《急性脑卒中病人血清S100B蛋白和神经元特异性烯醇化酶的变化研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《急性脑卒中病人血清S100B蛋白和神经元特异性烯醇化酶的变化研究（71页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、英文缩略语一览表英文缩写英文全称中文全称NS ENI HS SN e u r o n - s p e c i f i c e n o l a s eNa t i o n a l I n s t i t u t e o f He a l t h S t r o k e S c a l eCS SCP MC h i n a S t r o k e S c a l eC o u n t p e r - m i n u t eC e r e b r a l I n f a r c t i o nC e r e b r a l H e m o r r h a g eS u b a r a c h n o
2、 i d H e m o r r h a g eT r a n s i e n t I s c h e mi c At t a c kV e r t e b r a l - B a s a l a rt e ry I s c h e m i aB l o o d - b r a i n B a r r i e rC e r e b r a l - s p i n a l F l u i dE n z y m e - l i n k e d i m m u n o a d s o r d e n t a s s a yI mm u n o r a d i o m e t r i c a n a
3、i y s i sF l u o r o i m m u n o a s s a yL u mi n e s c e n t i m m u n o a s s a yO p t i c i m m u n o a s s a y神经元特异性烯醇化酶美国国立健康研究院中风评分中国中风评分每分钟计数( 测定放射性物质量的单位)脑梗死脑出血蛛网膜 卜 腔出血短暂脑缺血发作椎一 基底动脉缺血血脑屏障脑脊液酶联免疫吸附测定免疫放射分析荧光免疫测定荧光酶素免疫测定光学免疫测定A CICH洲琳VBI姗CsFELIsI RM AF I ALI AOI A论文:急性脑卒中 病人血清S - 1 0 0 B蛋白
4、和神经7 c 特异性烯醇化酶的变化研究中文摘要背景:S - 1 0 0 B蛋白 和神经元特异性烯醇化酶 ( N S E )被认为 是外周血中反映中枢神经系统受损的特异指标， S - 1 0 0 B 蛋白主要 存在于神经胶质细胞中，而N S E 主要存在于神经元和神经内分泌 细胞中。二者在正常情况下在体液中含量极少甚至测不出，当中 枢神经受损时，从细胞中释放入脑脊液，再通过受损的血脑屏障 进入血液。有文献报道二者与神经系统损伤有良 好的相关性，在 急性脑损伤、 脑血管病、 神经系统变性病以及炎症等疾病过程中，均有不同程度的升高，是脑损伤早期的重要血清生化标志之一。目的:本实验为病例对照研究，为了
5、 研究S - 1 0 0 B 蛋白 和N S E ( 神经元特异性烯醇化酶)在急性脑卒中病人血清中的变化，以 及两者与梗死/ 出血体积、神经系统功能缺损评分的关系， 以期 探讨二者在临床工作中判断急性脑卒中病情程度的意义。方法:本实验选择了2 0 0 2 年 8月一2 0 0 3 年 1 月我院神经利 -住院病人共9 1 例 ( 其中包括脑梗死 4 5 例、脑出血 2 2 例、T 工 A 2 4 例) ， 健康体检者 2 6 例， 进行血清 S - 1 0 0 B 蛋白和N S E 的动态检测( 分别取患者发病 4 8 小时、7 2 小时和 7 天时的静脉血) ，同时进 行梗死/ 出血体积的计
6、算和测量，神经系统功能缺损评分，( 包括 N I H S S 和 C S S ) 。血清 S - 1 0 0 B蛋白和 N S E 浓度分别使用 E L 工 S A和 I R M A 方法测定，结果使用统计软件S P S S 1 0 . 0 进行处理。结果: 本实验中， 脑梗死和脑出血组病人的S - 1 0 0 B 蛋白血清 浓度在4 8 小时左右最高 ( 与对照组比， P 1 6 )度，C S S 评分程度分级为轻 ( 0 - 1 5 ) 、中 ( 1 6 - 3 0 ) .重( 3 1 - 4 5 )度。4 . 脑梗死患者和出血患者于 3 天内行M R 工 或头 C T 检查， 根据公 式
7、V = 二 / 6( 长* 宽* 层面)测量梗死、出血体积。( 二) 实验方法:1 . S - 1 0 0 B 蛋白:酶联免疫法，试剂盒购自 第四军医大生理教研室，试验步骤严格按照说明书进行。使用具有高度特异性的 S - 1 0 0 0 m A b 作为包被抗体2 1 ，以抗S - 1 0 0 的P c A b 作为待测抗体， 以羊抗兔 工 g G - H 即为酶标抗体，催化底物显色，根据标准品各孔论文:急性脑卒中病人血清S - I O O B蛋白 和神经元特异性烯醇化酶的变化研究的光密度O D 绘制标准曲 线， 从标准曲 线上查出 待测标本中S - 1 0 0 的含量。具体步骤:用抗 S -
8、 1 0 0 m A b ( 4 0 m g / L ) 包被酶标板，4 包 被4 8 h 。 洗涤液( P B S +0 . 0 5 % T w e e n 2 0 ) 洗涤3 次， 加入标准品( 牛 S - 1 0 0 6蛋白) 及待检样品，3 7 作用 1 h 。洗板，加入兔抗牛S - 1 0 0 P c A b ( 1 : 5 0 0 0 ) , 4 过夜再置室温 1 h ， 洗板同前。加入羊 抗兔I g G - H R P( 1 : 7 0 0 ) , 3 7 作用1 h 。 洗板， 加入显色液 ( 底物 液 I O m l +A B T S 5 m g +3 % H 20 2 2
9、0 11 1 ) , 3 7 0C 显色 1 5 -3 0 m i n后读记 A 4 1 0值。标准曲线的绘制:用 0 . 1 % P B S A ( P B S +0 . 1 %白蛋白) 将S - 1 0 0 6蛋白自1 6 11 g / L 起，2 倍连续稀释至 0 . 0 3 11 g / L ，每个浓 度加 3 孔，测定A 4 1 0 值。以A 4 1 0 平均值为纵座标，S - 1 0 0 6 蛋白 浓度为横座标绘制标准曲线。 或在S P S S 1 0 . 0 统计软上使用曲线估 计标准曲 线方程， 用曲 线方程换算待测样品的S - 1 0 0 浓度。本试 剂盒批内变异系数为6 .
10、 4 % ，批间变异系数为1 2 . 5 % 0操作步骤流程图:包被抗体用包被缓冲液作1 : 9 0 0 倍稀释， 加入E L I S A 板，1 0 0 1x 1 / 孔， 4 放置4 8 h 工洗涤液冲洗E L 工 S A 板3 次，侮次5 m i n 杏加入封闭液，2 0 0 u 1 / 孔，3 7 0C , 1 h 杏 洗涤液冲洗E L I S A 板 3 次，侮次5 m i n 杏加入1 0 0 11 1 / 孔，3 7 0C l h ，并置复孔 待检样品 阴性对照:稀释液 倍比 稀释的标准品1 6 N g / L , 8 u g / L , 4 u g / L , 2 u g /
11、L , 1 u g / I ， 0 . 5 P g / L , ( ) 2 5 a g / L ，0 . 1 2 5 P g / L , 0 . 0 6 ”g / L , 0 . 0 3 u g / L论 文 急 性 脑 卒 中 病 人 血 清S - I O O B 蛋 白 和 神 经 元 特 异 性 烯 醇 化 酶 自 勺 变 1 上 竺 茎杏洗涤液冲洗E L I S A 板3 次，每次5 m i n 杏 待测抗体用稀释液作1 : 1 0 0 倍稀释，1 0 0 w 1 / 孔，4 过夜后置室温 I h 或3 7 0C2 h 杏 洗涤液冲洗E L 工 S A 板 3 次，每次5 m i n
12、杏酶标抗体用稀释液作 1 : 7 0 0 倍稀释，1 0 0 w 1 / 孔，3 7 0C, l h 杏 洗涤液冲洗E L 工 S A 板3 次，每次5 m i n 杏加入配好的A B T S 显色液，1 0 0 1x 1 / 孔，3 7 显色 1 5 - 3 0 m i n a 杏终止液:5 0 w 1 / 孔。酶标仪4 1 0 n m 处测O D 值，绘制标准曲 线2神经元特异性烯醇化酶: 采用免放法， 试剂盒购自 北方所， 试验步骤严格按照说明书进行。采用双抗体夹心法，使样品中的 N S E 与包被球上的N S E 抗体结合，再与 2 5 工 一 抗N S E 结合，形成免 疫复合物，测
13、定包被球的C P M 值，即可检测样品中的N S E 浓度。论文: 急性脑卒中 病人血清S - I O O B蛋白 和神经元特异性烯醇化酶的变化研究操作步骤:( 单位:微升) 一一 一N S B标准管样品管S2 0 0S rS ;2 0 0样品2 0 0标记物5 05 05 0包被球各加入一粒包被球操作步骤1 . 轻摇混匀，室温过夜。2 . 吸出反应液，蒸馏水洗涤3 次，每次洗涤大于3 毫升， 最后吸干。3 . 将反应珠用吸水纸吸干后移到 -个干净试管中，测定其C P M 值( 三)数据处理1 . 所有计量资料进行正态分布检验，符合程度不佳的，换算成 自然底对数， 再进行描述性分析， 使用均数
14、士标准差和中位数表示。检测值低于试剂盒最低检测范围的， 以 最低检测值表示。 2 . 所有计量资料进行方差分析，相关分析正态分布的资料使用P e a r s o n相关检验，非正态分布的资料使用 S p e a r m a n相关检验。论文:急性脑卒中病人血清S - t 0 0 B蛋白 和神经元特异性烯醇化酶的 变化研究实验结果一基本资料: 1 . 各组男女比例在统计学上均无明显差异， 年龄上，将其划分为4 个年龄段:5 0 岁以下、5 0 - 5 9 岁、6 0 - 6 9 岁以及 7 0 岁以上，各组人数依次分别为， 脑梗死组4 , 6 , 2 2 , 1 3 人; 脑出血组4 ,3 ,
15、9 , 6 人;T I A 组2 , 8 , 8 , 6 人，对照组 2 , 6 , 1 1 , 7 人。总平均年龄为 6 3 . 8 士1 1 . 7岁，各年龄组无明显差异。病例组中最小年龄为 2 4岁，是一例大动脉炎女性病人，发生了大脑中动脉闭塞性梗死，年龄最大的是一位 9 2岁的女性，发生了基底节区脑出血。( 见表一、二)2 . 脑梗死组平均梗死体积为 4 6 . 8 7 士9 2 . 9 3 m l ，脑出血平均血肿体积为 3 8 . 1 1 士6 7 . 3 4 m l , 3例蛛网膜下腔出血病人因无法计算出血体积，故在计算与体积相关的统计时除去。( 见表三) 3 . 实验过程中使用
16、两种评分标准， 一为美国国立健康研究院使用的中风评分标准 N I H S S ，其轻中重程度分级为轻 ( 7 0均6672295孟目氏、0八艺n月Jq，一气，4ZC 4，乙，乙气乙脑梗死 脑出血11一506 4 . 4士1 1 . 96 4 . 0士1 3 . 6 6 2 . 5 士9 . 6 6 2 . 4 土1 0 . 56 3 . 8士1 1 . 7范围 ( 岁) 2 4 - 8 43 4 - 9 24 2 - 7 54 2 - 7 52 4 - 9 21 1 71 2 2 366636666-66t 体积统计表N一4518体积 ( ml )9334脑梗死组 脑出血组4 6 . 8 7 士9 23 8 . 1 1 士6 7表四 病人评分轻重程度统计表NI HS S轻中重ft ti f(n )CS S 轻中重cl(n ) G45 - 1 53 1 6(1 5 1 6 - 3 0要3 14522一67l1829114045刀-67l4l3l78脑梗死 脑出血 合计( n )论文:急性脑卒中病人血清S - 1 0 0 B
