《化疗联合粒细胞集落刺激因子DAG治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿症疗效及其机制的探索》由会员分享，可在线阅读，更多相关《化疗联合粒细胞集落刺激因子DAG治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿症疗效及其机制的探索（108页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号：R 5 5密级：学位类别：科学学位口专业学位团学校代码：10062学号：2 0 1 0 6 0 1 0 5 2学科门类：医学 又肄譬科袁母博士学位论文D o C T o R SD I S S E R T A T I o N论文题目：化疗联合粒细胞集落刺激因子( D A G ) 治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿症疗效及其机制的探索T I T L ET h es t u d yo f t h ee f f e c ta n dm e c h a n i s mo fc h e m o t h e r a p yp l u sg r a n u l o c y t ec o l o n ys t
2、i m u l a t i n gf a c t o r ( D A G ) f o rr e f r a c t o r yp a r o x y s m a ln o c t u r n a lh e m o g l o b i n u r i a一级学科：临床医学二级学科：内科学血液病论文作者：董喜凤指导教师：邵宗鸿教授导师组成员：付蓉教授天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个八在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志
3、对本研究所做的任何贡献均己在论文中作矿明确的说明并表示了谢意。本学位论文作即：学校有权将学影印、缩印或扫描关部门或机构送交学位论文作者签生荔二幺鱼同期沙l 婷朔。日本论文属于不保密E 了。( 请在以上方框内打“”)学位论文作者签名：导师签名：遍轨a钇足7 7。硼溅的规定，并采用向国家有日期洲弦明硝日期沙1 簪如日天津医科大学博二二学位论文中文摘面 ：之目的：1 研究D A ( 柔红霉素加阿糖胞苷) 联合化疗加粒细胞集落刺激因子( G C S F ) ：q案( D A G ) 治疗难治、复发性P N H 的疗效I ；2 观察P N H 患者G P I A P 阳性和阴性的骨髓单个核细胞胞体外生长
4、情况，比较两者对D A G 方案体外反应的差异。同时比较G C S F 对G P I A P 阳性和阴性细胞表面G C S F 受体( C D l1 4 ) 表达的影响。为探索P N H 细胞克隆对D A G 反应异常的机制，进一步分析P N H 患者和正常对照及P N H 患者体内G P I A P 阳性和阴性细胞表面G C S F 受体( C D l l 4 )和黏附分子C D 4 4 C D 4 9 d 表达差异。3 通过体外研究P N H 患者骨髓单个核细胞在不同条件孵育后C D 7 1 + C D 5 9 表达水平的变化，分析P N H 患者是否适合输注“不洗涤”的红细胞，为P N
5、H 患者输血时枉择“洗涤”或“不洗涤”红细胞提供理论依据。方法：第一部分：对1 0 例难治、复发性P N H 息者采用D A G 方案：柔红霉素4 0 m g第1 、2 天，2 0 m g 第3 天，静滴，共3 天；阿糖胞苷1 0 0 m g d ，静滴，共5 d 一7 d 。化疗当天同时应用G C S F3 0 0u g d 刺激造砷直至患者度过骨髓抑制期，W B C 恢复正常。观察患者血象、溶血指标及外周血l c D 5 9 一中性粒细胞比例、糖皮质激素用量变化，观察并记录相关不良事件。第二部分：( 1 ) 无菌分离1 7 例P N H 患肴B M M N C s ，应用免疫磁珠技术将其分
6、为C D 5 9 + 细胞( G P I A P 阳性细胞) 及C I D 5 9 一细胞( G P I - A P 阴性细胞) 两部 分，用液体I M D M 培养基加多种造血刺激困子模拟骨髓微环境来体外培养，根据D A G 体内浓度分别给予D A G 方案和G - I E S F 干预4 8 小时，观察这两部分细胞体外生长情况，应用流式细胞术检测两绅细胞死亡、凋亡、细胞周期相关指标，比较两组细胞对D A G 方案体外反应的善异。同时应用流式细胞术检测G C S F干预4 8 小时后G P I A P 阳性和阴性骨髓细雎表面G C S F 受体( C D l l 4 ) 表达水平的差异。(
7、2 ) 收集1 4 例P N H 患者外周血，l J 立用流式细胞术检测G P I - A P 阴性和阳性骨髓细胞表面黏附分子C D 4 4 C D 4 9 d 表达水平的差异，以探索P N H 细胞克 隆对D A G 方案反应异常的机制。( 3 ) 收剩2 2 例P N H 患者和1 4 名正常对照B M M N C s ，并将其中1 4 例P N H 患者骨髓标本应用免疫磁珠技术分为G P I 阴性细胞、阳性细胞两部分，采用Q P C R 技硝检测C D l l 4 和C D 4 4 C D 4 9 dm R N AT天滓医科大学博士学位论文表达水平。( 1 ) 间接免疫磁珠技术能将P N
8、 H 患者骨髓0 7 G P I A P 阴性细胞分离纯化，其纯度可高达9 0 以上。P N H 患者骨髓G P I AP | 阴性和阳性细胞在体外培养中对D A G反应的差别：D A G 方案体外干预G P I A P 阴性和阳性细胞4 8 小时后，其死亡率和I I一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一天津医科大学博j：学位论文凋亡率变化：G P I A P 阴性细胞未j J H D A G 干j ：逼组( 对照组) 死亡率和凋亡率分别为1 9 1 0 2 0 9 3 和7 2 6 7 6 ，D A G 方案：预组死亡率为和凋亡率分别为2 7 2 92 2 0 4 和1 0 5 5 1
9、 2 3 4 ；而G P I A P I S H 性田胞未；0 H D A G 干预组( 对照组) 死亡率和凋亡率分别为1 2 8 3 1 8 9 2 和1 凋亡率：J7 9 6 6 7 9 6 ，力N D A O 方案干预组死亡率和凋亡率分别为3 1 8 9 4 - 2 6 7 5 矛H 凋亡ii 为6 3 1 1 3 2 ；且与对照组相比，D A G 方案干预组G P I A P r i l 性死亡率显著增ji ( P 1 0 ( 5 1 0 为可疑) ( 见图1 1 、1 2 ) 。临床表现符合，实验检查结果具备2 2 项或2 3 项者皆可诊断，2 2 项和2 3项可相互佐证。天津医科大
10、学博士学位论文一、化疗联合造血刺激因予治疗难治性、复发性P N H 的研究图1 1P N H 患者外周血红系C D 5 5 、C D 5 9 检测结果图1 2P N H 患者外剧血粒系C D 5 5 、C D 5 9 检测结果( 4 ) 病例选择标准：经泼尼松1 m g ( k g d ) ( 或相当剂量的其它肾上腺糖皮质激素静滴) 治疗1 个月以上无效；虽肾上腺糖皮质激素治疗有效，但减量后很快复发或激素治疗出现严重副反应以至于不能耐受：严重感染、糖尿病、高血压、消化道出血、股骨头坏死等。E O C G 一般状况评分小于等于2 ；心电图正常；自愿接受住院治疗并书面同意。( 5 ) 排除标准：乙
11、肝表面抗原( H B s A g ) 阳性且乙肝病毒大于等于1 0 5 病毒拷贝数毫升严重心、肺、肝、肾功能不全妊娠或哺乳，或试验期间不能采取避孕措施者严重免疫缺陷，或全身自身免疫性疾病( 如S L E ) ，或严重的病毒感染( 如H I V )过去6 个月内，有明显临床症状的心脏病( 例如充血性心衰、有症状的冠状动脉性疾病和药物控制效果不佳的心律失常) 或心肌梗死；天津医科大学博士学位论文一、化疗联合造血刺激因子治疗难治性、复发性P N H 的研究其他不宜参加本试验的任何其他情况的患者1 1 3 治疗方案：( 1 ) 基础药物治疗：雄激素：安雄1 2 0 m g d ；碱化利尿：碳酸氢钠3
12、9 d 口服治疗；维生素EO 3 9 a 口服。( 2 ) 联合化疗方案：D A G 方案：柔红霉素( D N R ) 4 0m g 第1 ，2 天，2 0m g 第3 天；阿糖胞苷( A r a C ) 1 0 0m g d ，5d 或7 d ；G C S F ：3 0 0 u g d ，第1 天直至白细胞恢复正常。第1 疗程无效者，间隔1 个月后行第2 疗程治疗。( 3 ) 支持治疗所有患者在化疗期间予以保护性隔离，监测血常规及生命体征，酌情予以成分血输注，尤其R B C 的选择，要“未洗涤”的悬浮红细胞，发生感染时用适当抗生素及对症处理。( 4 ) 疗效评定参数贫血程度及输血依赖：监测血
13、象，输血患者记录输血间隔。溶血指标：血清游离血红蛋白( F H b ) 浓度，血清胆红素水平、尿R o u s 试验、血清L D H 水平、H a m 试验P N H 克隆负荷指标：外周血成熟粒细胞表面C D 5 9 C D 5 5 的表达。肾上腺糖皮质激素用量：均换算为强的松的剂量后进行比较。1 1 4 统计方法S P S S 统计软件处理实验数据，均数比较采用t 检验；图表的制作应用s i g m a p l o t 软件。1 2 结果D A 或H A 方案治疗难治、复发性P N H 的疗效观察。l O 例P N H 患者化疗后均有效。所有病人的临床基本资料可见表1 1 。表1 ：! 绝至
14、垡痘痘鲍! 堕瘗壁延一一一一C h a r a c t e r i s t i cP a t i e n t sS e x n o( N = 10 ) 一M a 瞎：iI I 。i i 耷F e m a l e6A g 溥叠i”i。M e d i a nR a n g e3 3 4l l 一5 1D u r a t i o no fP N H y rM e d i a nl。一誓4 9R a n g e0 0 4 1 7T i m e 稃o md i a g n o s i st oc h e m o t h e r a p y y r二M e d i a nR a n g eR e t i
15、c u l o c y t ec o u n t s - 4 90 0 4 - 1 7M e d i a n ；：1i。?01R a n g eH i S t o 联o fa p l a s t i ca n e m i a n o i ( )H i s t o r yo fm y e I o d y s p I a s t i cs y n d r o m en o ( )? H 韬t o 哆o ft h r o m b o S i s - n o , ( 哟T o t a ln o o ft h r o m b o t i ce v e n t s_U s eo fe r y t h r o p o i e t 妒n 吱( 呦7 1 2毒5 0 。1 0 01 0 0OU s eo fc y c l o s p o r i n e n o ( )4_ ；嵋菱o t 和勤g u 。l a n t 囊a g e n t s ( c o u m 曩a - ：善i 眷：ij j 溲iij。静o。#“_- 蛹o r ，h e p a r i n O - - n o ；( 乡磅。囊U s eo fc o r t i c o s t e r o i d s n o ( )1。薯搿滔。ji l l 夔蘸；! 燮鲤夔曼受曼夔竺! 夔墼蠖：，j
