《肝癌多药耐药与介入治疗临床和实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肝癌多药耐药与介入治疗临床和实验研究（62页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国医科大学博士学位论文肝癌多药耐药与介入治疗临床和实验研究姓名：刘瑞宝申请学位级别：博士专业：影像医学与核医学指导教师：徐克2003.4.1肝癌多药耐药与介人治疗临床和实验研究中文摘疆目的探讨原发性肝癌中多药耐药基因编码的P 一鼬表达对肝动脉化疗栓塞 沭疗效的影响。同时探讨应用化疗药物诱导传代的V X 2 肿瘤建立移植佳耐药肝癌模型以及利用耐药逆转剂进行耐药逆转研究的可行性。材料与方法1 。临床研究4 7 例未经过治疗的原发性肝癌患者，依据瘸入一般状况和肝功，应用不同剂量化疗药物与碘油混合制成碘油一化疗药物乳剂经肝动脉栓塞。其中3 3 人应用常规剂量化疗药物( 表阿霉素或阿霉素4 0 m g
2、 、丝裂霉素2 0 m g 、氟尿嘧啶5 0 0 m g ) ；1 4 人应用半剂量化疗药物( 表阿霉素或阿霉素2 0 r a g 、丝裂霉紊1 0 r a g 、氟尿嘧啶5 0 0 r a g ) 。介入治疗前，在透视引导下，应用1 8 G 活 检穿刺针经皮、经肝穿刺活捻。1 0 中性禚尔马林固定活检肿癀组织，石蜡包埋，制成4 p , m 厚连续切片b 应用J S B 一1 鼠抗入单克隆抗体，采用链霉亲 合素一生物寨酶复合物法进行免疫组化染色，检测原发性肝癌中M D R l 编码的P g P 表达。光镜下观察2 0 0 个肿瘸细胞并计算阳性细胞数，平均陌 性缨照数 1 0 为阳性。营次肝动脉
3、化疗栓塞后2 个月进行甜检查，与治疗前比较，按公式( V ) = 1 2 a b 2 计算肿瘤体积，按W H O 推荐的实体肿瘤疗效判定掭准判定疗效，肿瘤体积缩小超过5 0 势有效。斌时分磐 P g P 表达以及不同化疗药物剂量对肝动脉化疗检塞术治疗疗效的影响。2 。动魏实验 健康日本大耳自兔3 5 只，l O 只用于肿瘤传代，2 5 只用于建立移植往膳癌模型。携带V X 2 肿瘤大耳自兔2 只，将其中一只麻黪，无蘑条件下取高大腿矾岗肉传代的舯癯缝织，制残瓣瘸悬液注入传代兔太腿肌肉进行常规传代。勇一只予传代后2 周，连续三周，每周次，经耳廓蕨静脉注入阿霉索注射液( 4 m g S m l 次)
4、 避稽闯歇髅穗药诱导。第三次优疗结柬嚣一闵，取肿瘤组绥，再次传代、诧疗，共进彳亏三次传代，每次进行三凌化疗。2 5 只健康大耳自兔隧税分为五缱，每蕴5 哭，全麻下腹歪中线切口，暴瓣野脏，在肝左叶中部植入I m m 3 的V X 2 肿瘸组织，建立移植性_ 翳癌摸型。A 、B 磁组植入肿瘤组织取自常规传代兔，c 、D 、E 三组檀入的蒡孛瘸缀织取自经过多次 传代、 毛疗药物诱导的传代兔。肝黢内肿瘤植入3 周后，进行增强C T 检查，确定肿瘤大小。将肝癌模翟兔麻醉，无蘸条件下黢歪孛甥磊，暴露肝动脉，寓视下穿刺，分别注入不同化疗药物或生理盐承。其中，A 、e 两缝没入阿霉索4 r a g ( 2 m
5、 l 生理盐永稀释) B 、D 两缓注入等量生理盐水，E 组经肝动脉注入异搏定1 m g ( 0 2 m 1 ) 和阿簿素4 r a g ( 2 m l 生理盐水稀释 。治疗嚣一 周再次进行增强C T 梭查并与用药前跑较，分析各缰肿瘸倍增率。处死全部兔，取边缘肿瘤缀织，分别予- 7 0 冻存，1 0 牵性福尔马林、2 。5 戊二 醛固定。H E 染色和制备毫镜标本，光镜和透射电镜( J E M 一1 2 0 0 E X ) 下溉察V X 2 肿瘸结构。冻存肿瘤组绞制成荤细施惫液，染色，流式缨腮仪检测分析备组肿瘤凋亡率。3 统计学分析 应用S P S S l 0 0 软件分析实验结果，采稍x 2
6、 检验和F i s h e r 精确概率检验法、方差分析迸行统计学处理，P o 0 5 ) ；3 4 例P g P 阳性患者中，应用不同剂量化疗药物，疗效无显著差别( P 0 0 5 ) ；1 3 例P g P 阴性患者中，应用不同剂量化疗药物，常规剂量组有效率高于半剂量组，但无显著差异( P o 0 5 ) 。3 V X 2 肿瘤传代兔化疗后，将肿瘤组织悬液注入兔大腿内侧肌肉再次传代，传代后瘤组织生长速度无明显变化。4 2 5 只模型兔肝脏内肿瘤接种全部成功。三周后行增强C T 检查，肿瘤元强化，边缘光整，与正常肝组织分界清楚，各组之间肿瘤大小无明显差异。经肝动脉注入阿霉素、生理盐水和阿霉素
7、加异搏定一周后行增强C T检查，各组肿瘤体积均增大。比较各组肿瘤倍增率，A 组显著低于其它组 ( P 0 0 5 ) ；E 组肿瘤倍增率低于c 、D 两组，但无显著差异( P 0 0 5 ) 。5 形态学改变：传代后，经过耐药诱导的V X 2 肿瘤与常规传代肿瘤组织在形态上无明显区别。6 肿瘤凋亡：流式细胞仪检测各组肿瘤凋亡率，其中A 组高于B 、c 、D三组，并存在显著差异( P 0 0 5 ) ；应用异搏定加阿霉素的E 组肿瘤凋亡率高于C 、D 二组，但是，各组间无显著差异( P 0 0 5 ) 。结论1 多药耐药是影响肝动脉化疗栓塞术疗效的重要因素，治疗前检测Pg p 表达对制定个体化治
8、疗方案有重要意义；减少P g p 阳性肝癌患者中化疗药物用量不影响介入治疗疗效；在P g P 阴性肝癌患者中，在一定范围内疗效与药物剂量相关。2 通过药物诱导建立的兔V X 2 移植性肝癌模型具有耐药特征，可做为耐药肝癌模型用于介入治疗实验研究。3 经肝动脉一次性灌注耐药逆转剂异搏定和抗肿瘤药物阿霉素未能解决V X 2 移植性耐药肝癌模型耐药逆转。关键词：原发性肝癌；多药耐药；P 一糖蛋白；化疗栓塞术；动物模型；耐药逆转3 C l i n i ca n dE x p e r i m e n t a lS t u d yo fM D Ro fL i v e rC a n c e ra n dT
9、r a n s c a t h e t e rA r t e r i a lE m b o l i z a t i o n I n f u s i o nA B S T R A C TP u r p o s eT os t u d yt h ee x p r e s s i o no fP g l y c o p r o t e i n ( P g o ) a n di t se f f e c to nt h er e -s p o n s eo ft r a n s c a t h e t e ra r t e r i a lc h e m o e m b o l i z a t i o
10、n ( T A C E ) i np a t i e n t sw i t hh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a ( H C C ) ，a n di n v e s t i g a t et h ef e a s i b i l i t yo fe s t a b l i s h i n gt u m o rm o d e lo fM D Ri nr a b b i t sl i v e rw i t hV X 2t u m o ri n d u c e db ya d r i a m y c i na n dt h ef e a s i
11、b i l i t yo fM D Rr e v e r s a l M a t e r i a la n dM e t h o d1 C l i n i ct r i a lT A C Ew a sp e r f o r m e di n4 7c o n s e c u t i v eu n t r e a t e dp a t i e n t ss u f f e r i n gf r o m H C Cw i t hd i f f e r e n td o s e so fa n t i c a n c e ra g e n tm i x e dw i t hl i p i o d o
12、la c c o r d i n gt ot h e i rg e n e r a lc o n d i t i o na n dC h i l d s t a g i n g R o u t i n ed o s eo fa n t i c a n c e ra g e n t( e p i r u b i c i no ra d r i a m y c i n4 0n 塔，m i t o m y c i n2 0m g ，f l i o m u r a c i l5 0 0m g ，) w a su s e di n3 3H C Cp a t i e n t sa n ds e m i d
13、 o s ew a su s e di nt h eo t h e r1 4p a t i e n t s B i o p s yW a sp e r f o r m e di na l lo ft h e4 7p a t i e n t sp r i o rt oT A C Ew i t ha n1 8G a u g eB i o p s yn e e d l eu n d e rt h em o n i t o ro ff l u o r o s c o p y S p e c i m e n sw e r ef i x e di n1 0 n e u t r a lf o r m a l
14、 d e h y d es o l u t i o na n de m b e d d e di np a r a f f i n ；S e r i a ls e c t i o n sw e r ep r e p a r e da t4 p , mf r o mt h es a m p l e sf o ri m m u n o h i s t o c h e m i c a l P g oe x p r e s s i o nw a sd e t e c t e db yS t r e p ta v i d i n b i o t i nc o m p l e xi m m u n o h
15、 i s t o c h e m i c a lt e c h n i q u eu s i n gm o n o c l o n a la n t i b o d yJ S B 一1 I m m u n o r e -a c t i o n sw a so b s e r v e du n d e rt h ef i g h tm i c m s c o p oa n dm o r et h a n1 0 p o s i t i v ec e n sW a sr e g a r da sP g pe x p r e s s i o n F o B o wu pC TW a sp e r f
16、o r m e d2m o n t h sa f -t e ri n i t i a lT A C E T u m o rv o l u m eW a Sc a l c u l a t e da n dt h er e s p o n s et ot r e a t m e n ta w a sa s s e s s e da c c o r d i n gt ot h er e c o m m e n d a t i o no ft h eW o r l dH e a l t h0 r g a n i z a t i o n R e d u c t i o no f5 0 o rm o r ei nt h et o t a lv o l u m er e g a r d e da se f f e c t i v e 2 A n i m a lt r i a l3 5h e a l t h y ( 2 5 3 0k g )
