《大豆疫霉侵染过程的分子细胞学研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大豆疫霉侵染过程的分子细胞学研究（106页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、M O L E C U L A RA N DC E L L U L A RB I O L O G YO FI N T E R A C T I O N SB E T W E E N 册y m P 日死日D R 。4圈D 尉EA N DH OS TS O Y B E A NB yT A OK a iAT H E S I SS u b m i t t e dt oN a n j i n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yI nP a r t i a lF u l f i l l m e n to ft h eR e q u i r e m e n
2、t sF o rt h eM a s t e rD e g r e eo fS c i e n c eS u p e r v i s e db yP r o f e s s o r C f 州GY h a n c h a oC o l l e g eo fP l a n tP r o t e c t i o n ，N a n ji n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yN a n j i n g ，21 0 0 9 5 ，P R C h i n aJ u n e ，2 0 1 2原创性声明J11I；II鲤11112墅IIIt本人郑重声明：所呈
3、交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者( 需亲笔) 签名：阉l ，乞年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保
4、密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。( 请在以上方框内打“”)学位论文作者( 需亲笔) 签名：副需亲笔) 答名：协陶f ，乞年月日年月日目录目录摘要IA B S T R A C T I I I弓f言V I I：7I百m - 。上篇。文献综述第一章疫霉菌与寄主互作过程的细胞学研究11 疫霉菌概述22 疫霉菌侵染过程的细胞学研究33 植物寄主防卫反应的细胞学研究5参考文献6第二章荧光蛋白在植物病原菌研究中的应用1 11荧光蛋白概述1 22 荧光蛋白在植物病原菌研究中的应用1 4参考文献1 7 下篇研究内容第一章大豆疫霉与寄主亲和互作过程的细胞学研究2 11 试验材料和方法2 3
5、1 1试验材料2 31 1 1供试菌株2 31 1 2 主要试验试剂2 41 1 3 培养基制备2 51 1 4 主要试验仪器2 51 2 试验方法2 51 2 1 大豆疫霉菌株的培养2 51 2 2 大豆黄化苗的培育2 51 2 3 游动孢子囊发育、释放游动孢子及游动孢子休止过程的连续观察2 51 2 4 游动孢子悬浮液接种2 61 2 。5 细胞荧光探针染料的使用2 61 2 6 细胞学染色2 71 2 7 显微观察与图像处理2 8大豆疫霉侵染过程的分子细胞学研究2 结果与分析2 82 1侵染前期2 82 2 侵入阶段3 72 3 侵入后扩展阶段3 82 4 大豆疫霉侵染过程中引发寄主防卫
6、反应的细胞学观察3 92 4 1寄主胼胝质积累的观察3 92 4 2 寄主活性氧迸发的观察4 13讨论4 1参考文献4 5第二章大豆疫霉绿色荧光蛋白标记菌株的遗传稳定转化。4 91绿色荧光蛋白遗传稳定表达载体的构建5 11 1 试验材料和方法5 11 1 1试验材料511 1 2 载体设计5 21 1 3 试验方法5 41 2 结果与分析5 71 2 1G F P 基因的扩增5 71 2 2 质粒载体提取及酶切5 91 2 3 菌落P C R 验证阳性重组质粒载体6 01 2 4 酶切验证6 12 大豆疫霉P 6 4 9 7 菌株的遗传稳定转化及转化菌株的生物学测定6 22 1 试验材料和方法
7、6 22 1 1试验材料6 22 1 2 试验方法6 32 2 结果与分析6 42 2 1绿色荧光蛋白标记大豆疫霉P 6 4 9 7 菌株的遗传稳定转化6 42 2 2 基于p T O R ：G F P 载体的绿色荧光蛋白标记菌株的筛选6 52 2 3G F P 标记菌株的生物学测定6 63讨论7 1参考文献。7 3第三章绿色荧光蛋白标记菌株与寄主亲和及非亲和互作过程的细胞学研究。7 51 试验材料和方法7 71 1试验材料7 7目录1 1 1 供试菌株和大豆品种7 7I 1 2 主要试验仪器7 71 2 试验方法7 71 2 1 大豆疫霉菌株的培养7 71 2 2 游动孢子悬浮液接种7 81
8、 2 3 细胞学染色与制片7 81 2 4 显微观察与图像处理7 82 结果与分析7 82 1大豆疫霉G F P 标记菌株侵染过程的细胞学特征7 82 2 大豆疫霉G F P 标记菌株与寄主亲和、非亲和互作中细胞学特征的差异8 13讨论8 5参考文献。8 8攻读硕士学位期间发表的研究论文。9 1致谢9 3摘要大豆疫霉侵染过程的分子细胞学研究摘要大豆疫霉( 砌y t o p h t h o r as o j a eK a u f r n a n n G e r d e m a n n ) 引起的大豆( G l y c i n em a x )根腐病是大豆生产上极其严重的病害之一；全世界每年因根腐
9、病引起的经济损失可高达1 0 亿美元以上。大豆疫霉为大豆的专性病原茵，田间初侵染源为通过有性生殖过程发育而来的卵孢子；卵孢子在适宜的环境下形成游动孢子囊，并通过孢子裘内原生质体的割裂形成初始接种体游动孢子对寄主进行侵染。对大豆疫霉侵染过程以及与寄主互作的细胞学研究，不仅能够促进对疫霉菌致病机理的了解，还能推动与致病过程相关分子生物学的研究，为认识和掌握该病害发生、流行规律以及制订有效的防治策略提供理论依据。本文采用常规的细胞学染色方法和分子荧光探针对大豆疫霉与感病寄主的侵染互作过程进行了较为系统的细胞学研究；并通过绿色荧光蛋白( G r e e nF l u o r e s c e n tP
10、r o t e i n ，G F P ) 标记菌株的获得，揭示大豆疫霉与寄主亲和、非亲和互作的动态变化过程。大豆疫霉与寄主亲和互作过程的细胞学研究。根据大豆疫霉形态特征的变化，将其侵染过程分为3 个主要阶段，即侵染前期、侵入阶段和侵入后扩展阶段。侵染前期，即大豆疫霉的无性生活史阶段，茵丝体通过在体内原生质往顶端地流动聚集，逐渐膨大发育形成无性生殖结构游动孢子囊；并通过对游动孢子囊内的原生质体的割裂形成初始侵染体游动孢子。侵入阶段，游动孢子通过游动寻找的到适合寄主后，随即在寄主表皮细胞间休止、附着，并通过萌发形成的芽管在寄主表面寻找适合侵入位点。约接种后3h ，绝大多数萌发的休止孢并没有在芽管顶端形成明显的附着胞结构，而是以芽管为侵
