《伽玛刀照射兔视神经后电生理及病理组织学改变的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《伽玛刀照射兔视神经后电生理及病理组织学改变的实验研究（56页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号：R 6 5 1密级：学位类别：科学学位口专业学位团学校代码：10062学号：2 0 1 0 6 0 2 4 7 4学科门类：医学 又肄鼍斜袁辱硕士学位论文M _ A S T E R SD I S S E R T A T I O N论文题目：伽玛刀照射兔视神经后电生理及病理组织学改变的实验研究TIT L E E x p e r i m e n t a ls t u d yo fe l e c t r o p h y s i o l o g i c a la n dh i s t o p a t h 0 1 0 9 i c a lc h a n g e sa f t e rg a m m
2、ak n i f ei r r a d i a t i o ni n d u c e dt h eo p t i cn e r v eo fr a b b i t s一级学科：临床医学二级学科：外科学论文作者：指导教师：神外宗永青徐德生教授导师组成员：刘晓民副主任医师刘东副主任医师天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位
3、论文作者签名：邋日期：少弓年妇岁。日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密匮了。( 请在相对应的方框内打“”)学位论文作者签名：导师签名：日期：勿I ；年胡知日日期：函7 鲜明罗口I L l天津医科大学硕士学位论文中又捅要目的：通过建立伽玛刀照射兔视神经损伤动物模型，在不同放射剂量下不同时间点，应用P - V E P 、H E
4、 染色、髓鞘染色、N F 免疫组化染色及透射电子显微镜等技术，观察伽玛刀照射对兔视神经电生理及病理组织形态学的改变，旨在探讨伽玛刀照射兔视神经后所发生的电生理及病理形态变化。方法：本课题研究分为以下二个部分：第一部分：伽玛刀照射对兔视神经电生理学变化的影响。多项临床随访研究已发现放射性视神经损伤表现出视觉诱发电位的异常【3 ，4 】，动物实验研究也发现伽玛刀照射后显著的电生理改变【5 】，故我们在既往研究的基础上通过改进动物实验设计，予兔左侧眼眶内段视神经边缘剂量8 G y 、l O C y 、1 2 G y 及1 5 G y 伽玛刀照射，建立放射性损伤模型，在放射前1 天及放射后1 周、2
5、周、1 月、2 月、3 月、4 月、5 月及6 月时行P V E P 检测P 1 0 0 波形潜伏期及振幅变化。第二部分：伽玛刀照射兔视神经后病理组织学变化的研究。视神经损伤模型建立同第一部分，予兔双侧眼眶内段视神经边缘剂量8 G y 、l O O y 、1 2 G y 及1 5 G y伽玛刀照射，在照射后3 月时和6 月时取视神经标本，一部分标本行常规H E 染色、髓鞘染色、神经丝蛋白( N F ) 免疫组化染色光镜下观察其病理形态变化，另一部分制作电镜切片并在电镜下观察视神经超微病理结构变化。结果：1 电生理检测结果正常兔P 1 0 0 波潜伏期及振幅分别为( 8 3 6 + 6 9 2
6、) m s 、( 2 3 2 0 3 7 ) V 。8 G y组各时间点的P 1 0 0 潜伏期和幅值与正常组比较，均无显著性差异( P O 0 5 ) 。1 0 G y组照射后5 月时P 1 0 0 潜伏期出现延长及6 月时振幅降低，与正常组相比差异具有显著性差异( P 0 0 5 ) 10 G yg r o u pP10 0l a t e n c ye x t e n da tt h e5 t hm o n t ha n da m p l i t u d ed e c l i n ea tt h e6 t hm o n t ha f t e ri r r a d i a t i o n ，
7、c o m p a r e dw i t ht h en o r m a lg r o u p ，t h ed i f f e r e n c e sw e r es i g n i f i c a n t ( P O 0 5 ) 。1 0 G y 组在伽玛刀照射后的4 月出现了电生理学的变化，但这种变化与对照组比较无显著性差异( P 0 0 5 ) ，从趋势分析图l 可以看出，5 月以后潜伏期延长明显，与对照组相比具有显著性差异( P0 0 5 ) 。从趋势分析图可以看出1 0 G y 组的变化在照射后5 个月出现振幅降低，但与对照组比较无显著性差异( P 0 0 5 ) ，到6 月时进一步
8、降低，具有显著性差异( P 0 0 5 ) 。1 2 G y 、1 5 G y 组分别于照射后2 周、1m踮佰弼天津医科大学硕士学位论文一、伽玛刀照射对兔视神经电生理学变 化的影响周时出现振幅的降低趋势，与对照组比较具有显著性差异( P 0 0 1 ) ，这种变化随着时间的延长降低更加明显。图1 7 不同剂量下不同时间振幅变化趋势表2 不同剂量照射组与对照组在不同时间V E P 的振幅比较( ，i s )注：与对照前比较，丰P 0 0 5 ，AP 0 0 11 3 讨论1 3 1 关于视神经放射性损伤模型的建立理想的放射性视神经损伤动物模型至少应具备以下条件：照射部位准确无误，照射剂量确实，易
9、于控制；能产生受照射部位的脑组织应有病理学上的改变；照射的副反应小；临床模拟性好，除照射外其他干扰因素应减少到，2C u15l0 A n v 磐蜷天津医科大学硕士学位论文一、伽玛刀照射对兔视神经电生理学变 化的影响目前国内外对于放射性视神经损伤动物模型的建立有不同的方法，刘如恩等 5 ，2 1 】应用伽玛刀照射猫视交叉建立视神经损伤动物模型取得成功，但临床上临床放射性视神经病变多为单侧性损伤，这可能与肿瘤的放射部位相关，尤其是眼眶内肿瘤多为单侧眼眶内病变。因此，本课题在既往设计基础上，我们应用伽玛刀照射单侧眼眶内段视神经，经验证在核磁共振影像下眶内段视神经可清晰显示定位，更贴近临床模拟单侧放射
10、性视神经损伤，也发挥了伽玛刀精确定位照射的优势，经V E P 检测证实出现了临床类似的潜伏期及振幅的变化趋势，说明伽玛刀照射后视神经放射损伤确切，可以更好的模拟放射性视神经损伤并建立研究的动物模型。1 3 2 视觉电生理改变视觉诱发电位( v E t , ) 是视网膜接受视觉刺激，经视路传到枕叶中枢引起的电位变化。它反映了视网膜神经节细胞到视皮质的信息传递，是评价视路功能的一个重要的客观指标。枕叶皮层对视觉刺激产生的电活动可以用头皮电极检出，用这种方法检出V E P 是长潜伏期的近场皮层电位，波幅较大，容易记录。V E P主要是用来诊断视神经病变，脱髓鞘时V E P 表现为潜伏期延长，轴突受损
11、时的V E P 表现为振幅的下降【2 4 】。在放射性视神经损伤临床随访研究结果 3 】发现与放疗前相比，V E P 潜伏期在放疗后1 年中出现显著延长，振幅虽有降低，但无统计学意义。在放疗后1 年后，V E P 的潜伏期显著延长，振幅显著降低，表明放疗后1 年内视神经己开始发生损害，并且随着时间的延长损伤更加明显。刘如恩等【5 】应用伽玛刀照射猫视神经来观察射线对视神经电生理学的影响，结果1 0 G y组伽玛刀照射后没有出现任何变化，说明该剂量不能引起猫视神经生物学效应的变化，11 G y 组照射后半月内有轻微的变化，随着时间的延长，这种变化基本消失，1 2 G y 以上组照射后出现了明显的
12、电生理的变化，从而认为引起这种可逆变化的最小伽玛刀剂量为l1 G y ，引起视神经放射性损伤的最d , N 量为1 2 G y 。本实验结果可以看出，8 G y 组伽玛刀照射后没有出现明显电生理改变，说明该剂量不能引起兔视神经电生理效应的变化。1 0 G y 组照射后半年时出现明显电生理学变化，这种变化出现较晚，说在该剂量下有可能引起迟发性R O N 风险，但这种改变能否恢复不能确定。1 2 G y 组照射后2 周以后即出现了明显的电生理的变化，1 5 G y 组的这种变化更早更明显，说明1 2 G y 以上剂量已经引起了兔视神经的质变，从而引起电生理改变，且这种变化随着时间的延长而加重。由此
13、可见，我1 0天津医科大学硕士学位论文一、伽玛刀照射对兔视神经电生理学变 化的影响们认为兔视神经接受8 G y 的辐射剂量尚不能引起视觉电生理学的改变，引起兔视神经电生理学变化的最小伽玛刀剂量可能为1 0 G y ，1 0 M 2 G y 剂量有可能引起放射性损伤。1 2 G y 以上的剂量引起视神经放射性损伤的风险将会增加，且这种损伤随着时间的延长逐渐加重。从本实验结果与放射剂量和时间关系上看，引起兔视神经电生理变化的特点与伽玛射线的剂量及时间相关。1 4 小结放射外科致兔视神经V E P 变化与照射剂量及时间相关：8 G y 剂量的伽玛射线未引起明显的V E P 的潜伏期及振幅的变化；1
14、0 1 5 G y 剂量的伽玛射线可引起V E P 的潜伏期延长和振幅降低，该变化随时间的延长逐渐加重，且有随照射剂量增加而逐渐提前的趋势。天津医科大学硕士学位论文二、伽玛刀照射兔视神经后病理组织学变化的研究二、仂D t - q 刀照射兔视神经后病理组织学变化的研究日U 舌本研究第一部分发现伽玛刀照射兔视神经后，1 0 G y 以上的剂量组出现了电生理学变化，表现为潜伏期的延长及振幅的降低，这种变化随着时问的延长逐渐加重。本部分实验通过H E 常规检查、髓鞘染色、免疫组化及电子显微镜检查等技术，观察伽玛刀照射兔视神经后病理组织学变化情况，从大体标本到微观水平，从不同剂量下不同时间点观察放射性视
15、神经损伤情况，探讨其可能的发生机制，判断造成明显视神经放射损伤的剂量范围，从而更好地认识这种疾病，为临床采取有效预防措施提供理论依据。2 1 对象和方法2 1 1 主要实验试剂与仪器试剂与仪器名称生产厂家手术显微镜O M S 3 2 0电动开颅钻动物解剖手术器械石蜡包埋机L E I C AE G1 1 6 0石蜡切片机L E I C AR M2 2 3 5图像采集系统透射电子显微镜H 6 0 0超薄切片机L E I C AU L T R A C U TR4 。C 药品冷藏箱( H Y C 3 6 0 )B E S T 型病理组织浸蜡包埋烤片箱电热恒温水浴锅普通光学显微镜动物脑立体定向仪( D
16、Y 1 型)鼠抗人神经丝蛋白( N F ) 单克隆抗体二步法免疫组化检测试N p v 9 0 0 2日本T O P C O N 公司天津市津东希翼医疗器械厂德国蛇牌公司德国L E I C A 公司德国L E I C A 公司北京航空航天大学图像中心日本日立公司德国L E I C A 公司青岛海尔特种电器有限公司天津博大生物工程有限公司北京市永光明医疗仪器厂日本O l y m p u s 公司天津市医疗器械研究所北京中杉金桥生物技术有限公司北京中杉金桥生物技术有限公司天津医科大学硕士学位论文二、伽玛刀照射兔视神经后病理组织学变化的研究D A B 显色试剂盒苏木素染液0 0 1 MP B S ( p H7 2 7 4 )髓鞘染色试剂盒无水乙醇二甲苯中性树胶架盘药物天平微量移液器不锈钢染色架北京中杉金桥生物技术有限公司北京中杉金桥生物技术有限公司北京中
