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1、中国医科大学硕士学位论文p27kip1和p53基因蛋白表达与中晚期上皮性卵巢癌预后的关系姓名：胡淑敏申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：姚嘉斐20030301中文摘要前言卵巢癌发病率居妇科恶性肿瘤第二位，而死亡率居妇癌之首，由于卵巢癌难以早期发现以及肿瘤耐药性等原因，其五年生存率仅2 0 3 0 。因此，影响预后的细胞生物学因素及生物学治疗能否为卵巢癌诊治提供新的途径为众人瞩目。本研究以5 6例卵巢上皮性癌为对象，研究p 2 7 k i p l ，p 5 3 基因蛋白表达与卵巢 癌患者预后的相关性。研究对象及方法卵巢癌标本取自中国医科大学附属第一医院妇科手术治疗的 卵巢浆液性囊腺癌4 6
2、 例，粘液性囊腺癌l O 例共5 6 例。根据F I G 0 1 9 8 5 年修订的卵巢癌临床分期标准迸行分期。组织分级根据 W H O 标准。初次手术残留灶O 0 5 ) 。2 p 2 7 k i p l 及p 5 3 基因蛋白表达与肿瘤的病理分级有关( P 一2 c mr e s i d u a ld i s e a s ea ts u r g e r y N o n eo ft h ep a t i e n t sh a dr e c i v e dc h e m o t h e r a p yo rr a d i a t i o nt h e r a p yb e f o r es
3、u r g i c a lr e s e c t i o n A l lp a t i e n t sw e r et r e a t e dw i t lap l a t i n u m b a s e dc h e m o t h e r a p e u t i cr e g i m e n F o l l o w u pd a t aw e r ea v a i l a b l ef o ra l l5 6p a t i e n t s ( m e d i a nf o l l o w u p2 1m o n t h s ；r a n g6 7 6m o n t h s ) E x p
4、r e s s i o no fp 2 7 k i p la n dp 5 3p r o t e i n sw a sr e t r o s p e c t i v e l ys t u d i e db yi m m u n o h i s t o c h e m i s t r yt h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h ea b o v em a r k sa n dt h ep r o g n o s i so ft h ep a t i e n t sw e r et h e na n a l y z e d S t a t i s t
5、 i c a la n a l y s e sw e r ep e r f o r m e du s i n gS P S S1 0 0S O f t w a r e S u r v i v a lc u i w e sw e r ec a l c u l a t e du s i n gK a p l a n M e i e rm e t h o d ，a n dl o g r a n kt e s tu s e df o rt h ea n a l y s i s T h ep r o g n o s t i cs i g n i f i c a n c eo fp 2 7 k i p l
6、a n dp 5 3p r o t e i n se x p r e s s i o nf o rs u r v i v a lw a sa s s e s s e di nam u l t i v a r i a t ew i t hC o xp r o p o r t i o n a lh a z a r d sr o o d e lR e s u l tT h ee x p r e s s i o nr a t e so fp 2 7 k i p Ip r o t e i ni n5 6e p i t h e l i a lo v a r i a nc a n c e rw e r e4
7、1 I T h ee x p r e s s i o nr a t eo fp 5 3i n5 6e p i t h e l i a lo v a r i a nc a n c e rw e r e4 8 2 t h e r ew e r en oc o r r e l a t i o nb e t w e e nt h ee x p r e s s i o no ft h eb o t hp r o t e i n s ( P 0 0 5 ) T h e r ew e r ec o r r e c t i o nb e t w e e nt h ee x p r e s s i o no f
8、p 2 7 k i p l ，p 5 3p r o t e i n sa n dt u m o rg r a d e I nu n i v a r i a t ea n a l y s i s ，t h e r eW a ss i g n i f i c a n c ei nt h em e d i as u r v i v a l ，t h ee a c hs u r i v a lr a t ei ns u r v i v a lc u r v eb e t w e e nt h ep a t i e n t se x h i b i t e da n yp 2 7 k i p l ，p
9、5 3o v e r p r e s s i o na n dt h ep a t i e n t se x h i b i t e dn op 2 7k i p l ，p 5 3o v e r p r e s s i o n ( P 2 e m 者1 9 例。术后采用以铂类为主的化疗方案，疗程6 1 2 个。术后经过系统的化疗，全部病例均经随访，随访时间6 7 6 个月，中位随访时间为2 1 个月。所有标本取材后用1 0 中性福尔马林固定，石蜡包埋，制成5 u m 厚石蜡切片。2 染色方法2 1方法：采用单克隆抗体免疫组化链霉素抗生物素蛋白一过氧化酶标记法( S P 法) 检测p 2 7 k
10、 i p l 及p 5 3 蛋白产物的表达。s p k i t 为美国Z y m e d 公司产品( 均购自北京中山生物技术有限公司) 。2 2 实验步骤2 2 1 切片常规脱蜡和水化，P B S 洗2 分32 2 2滴加过氧化氢阻断溶液，以阻断内源过氧化物酶活性，室温孵育1 0 分钟。2 2 3 滴加1 0 非免疫性动物血清，室温下孵育3 0 分钟。2 2 4 抗原抗体结合：将切片分为2 组，每组分别加鼠抗人p 2 7 k i p l 蛋白单克隆抗体，鼠抗人p 5 3 单克隆抗体( 两种抗体均为美国S a n t aC r u z 公司产品，均购自北京中山生物技术有限公司) ，室温下孵育6
11、0 分钟。2 2 5 滴加生物素标记的二抗，室温下孵育3 0 分钟。2 2 6 滴加亲和素一过氧化物酶溶液，室温下孵育3 0 分钟。2 2 7 显色与封片：滴加新配制的D A B 液，显微镜下观察后终止显色，每张切片经过梯度酒精脱水透明，中性树胶封固。对照组：取已知阳性的切片作为阳性对照，用P B S 代替一抗作为阴性对照。3 结果判定p 2 7 k i p l 蛋白阳性染色定位于细胞核及细胞浆内出现棕黄色染色，p 5 3 阳性染色定位于细胞核出现棕黄色染色。每张切片随 机观测l O 个高倍视野，每个视野记数1 0 0 个癌细胞，共计数1 0 0 0个癌细胞中的阳性细胞数，取其平均数求其阳性百
12、分率作为结果。p 2 7 k i p l 染色阳性细胞 t 2 0 者判定为阳性。4 统计学方法：本研究采用S P S S I O 0 统计软件进行统计分1 2 析。用K a p l a n M e i e r 法计算生存率并绘制生存曲线，各组生存率比较应用L o g R a n k 检验，C o x 比例风险回归模型进行预后多因素分析，P 0 0 5 ) 。详见表1 。表lp 2 7 k i p l 及p 5 3 蛋白在5 6 例上皮性卵巢癌中的表达关系2 p 2 7 k i p l 及p 5 3 基因蛋白表达与上皮性卵巢癌临床病理特征的关系在4 6 例卵巢浆液性囊腺癌及1 0 例粘液性囊腺
13、癌中，p 2 7 k i p l及p 5 3 蛋白表达与患者的年龄、肿瘤的临床分期、病理类型、病理分级及残留灶的相关性分析详见表2 。p 2 7 k i p l 及p 5 3 蛋白表达与患者的年龄、肿瘤的临床分期、病理类型及残留灶大小差异无显著性( P 0 0 5 ) ，但两者基因蛋白表达与肿瘤的病理分级有关，p 2 7 k i p l 基因蛋白在高、中、低分化的上皮性卵巢癌组织表达率分别为7 5 O ，3 7 O ，2 3 5 ，高分化与中、低分化癌比较差异有1 3 显著意义( P 5 年) 与短生存期( 0 0 5 ) ；2 p 2 7 k i p l 及p 5 3 基因蛋白表达与肿瘤的病
14、理分级有关( P 0 0 5 ) ；3 单因素分析：p 2 7 k i p l 及p 5 3 基因蛋白表达与患者的中位生存时间、生存曲线各时点生存率相关( P 5 年) 生存期短( 2 年) 两组病人p 2 7 k i p l 在上皮性卵巢癌中的表达情况，结果发现p 2 7 k i p l 与预后有明显关系，在生存期短的2 4 例患者中有2 0 例p 2 7 k i p l 低表达，而2 9 例生存期长患者中仅有7 例p 2 7 k i p l 低表达( P 0 0 0 1 ) ，提示p 2 7 k i p l 与预后有明显关 系。在进行分层分析后，也提示p 2 7 k i p l 可能是一个
15、独立预后因素。M a s c i u l l o 等洋。用免疫组化方法对9 9 例晚期( I I I I v 期) 卵巢癌患者观察p 2 7 k i p l 表达情况。结果发现p 2 7 k i p l 表达不与临床参数中任何一个有关，p 2 7 k i p l 蛋白缺失与无病生存期( 1 T r P ) ( P= 0 0 0 0 4 病理) 和生存期( O S ) ( P = 0 0 3 0 2 ) 有重大联系，p 2 7 k i p l阳性5 年生存率是5 3 ，而p 2 7 k i p l 阴性生存率是4 3 ，p 2 7 k i p l阳性5 年无病生存期率是5 0 而p 2 7 k
16、i p l 阴性的病人5 年无病生存率是1 l ，在多变量分析中，p 2 7 k i p l 表达在晚期卵巢癌中是一 个新的预后标志，而且观察到p 2 7 k i p l 阳性病例，尤其在初次行理想缩瘤术后的病人对化疗有很高反应。然而，S h i m i z u 等汹1 的报道提出了相反的观点，他们认为p 2 7 k i p l 的表达与卵巢癌患者的预后无关，临床分期是病人生存唯3 4 一的独立预后因素。推测他们之间的差异可能是由于样本的数量及样本的选择不同引起的。目前大多数研究表明p 2 7 k i p l 蛋白在上皮性卵巢癌中表达普遍存在减少或缺失，与病人预后负相关，是一个独立的预后因素2 p 2 7 k i p l 与子宫内膜癌预后B a m b e r g e r 等陋。通过免疫组化对4 1 例子宫内膜癌病人进行分析，比较子宫内膜癌病人及正常子宫内膜的p
