《布鲁氏菌减毒活疫苗株adh缺失标记及其鉴别诊断研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《布鲁氏菌减毒活疫苗株adh缺失标记及其鉴别诊断研究（72页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、A D HM I S S I N GT A G SA N DD I A G N O S I SO FB R U C E L L AL I V EA T T E N U A T E DV A C C I N ES T R A I NB yY o n g f e iX i eS u p e r v i s o r ：P r o f K e h eH u a n gZ e l i a n gC h e nAT h e s i sS u b m i t t e dt oN a n j i n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yI nP a r t i
2、 a lF u l f i l l m e n to ft h eR e q u i r e m e n t sF o rT h eM a s t e rD e g r e eo fA g r o n o m yC o m p l e t e di nO c t o b e r 2 0 11C o m m e n c e m e n ti nD e c e m b e r 2 0 11原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其它个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和
3、集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者( 需亲笔) 签名砖阳争学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保( 请在以上方框内打“”)学位论文作者( 需亲 导师( 需亲笔) 签名阴蛎 、矽舻目录目录摘要IA B S T R A C T I I I符号及缩
4、略语说明V I I前言第一篇文献综述1第一章布鲁氏菌病原学及布病预防的研究进展11 布鲁氏菌病的病原学特征及其流行现状12 布鲁氏菌的致病机理23 布鲁氏菌病的临床症状、病理变化及诊断。54 布鲁氏菌疫苗的研究进展74 1 减毒活菌苗74 2 灭活疫苗84 3 亚单位疫苗9 参考文献11第二篇试验研究17第二章布鲁氏菌减毒活疫苗a d h 基因缺失标记171 材料与方法1 71 1 菌株、质粒和培养基1 71 2 试验试剂181 3 试验仪器181 4 试验引物1 91 5P C R 融合法快速构建突变株载体191 6 布鲁氏菌a d h 缺失标记株疫苗株的构建2 22 结果2 32 1 目的
5、基因片段的扩增2 32 2 突变盒的构建验证2 42 3 突变株的筛选与菌落验证2 53 讨j 跄2 54 小结一2 7 参考文献。2 8第三章布鲁氏菌a d h 基因缺失标记疫苗株免疫3 1保护性分析一3l1 材料和方法311 1 菌株、培养基、试剂和器械3 11 2 试验动物3 21 3 试验仪器3 21 4 试验动物的分组3 21 5 试验菌液的制备3 21 6 试验小鼠的免疫接种3 21 7 疫苗株在小鼠脾脏内的清除试验3 3硕士学位论文：布鲁氏菌减毒活疫苗株a d h 缺失标记及其鉴别诊断研究1 8 试验小鼠的攻毒3 32 结果3 32 1 疫苗株在小鼠脾脏体内的清除试验3 32 2
6、 缺失标记株疫苗与原始疫苗株对小鼠的保护力试验3 53 讨论3 74 小结3 7参考文献3 8第四章布鲁氏菌a d h 基因的蛋白表达与纯化4 11 材料与方法4 11 1 菌株和培养基4 11 2 试验试剂4 11 3 试验仪器4 21 4 目的蛋白a d h 诱导试验4 31 5 目的蛋白a d b 切胶纯化试验4 32 结果4 43 讨论4 54 ，J 、结一4 6参考文献4 7第五章布鲁氏菌a d h 基因缺失标记疫苗株与野生株、原始疫苗株的鉴别诊断4 91 材料与方法4 91 1 菌株和培养基4 91 2 试验动物和器具4 91 3 试验试剂5 01 4 试验仪器5 01 5 试验动
7、物领取与分组5 】1 6 试验菌液制备511 7 试验动物小鼠免疫接种511 8 小鼠血清中抗体水平鉴别诊断5 12 结果5 23 讨论5 44 小结5 4参考文献一5 5全文结论一5 7创新点一5 9致谢6 1摘要布鲁氏菌减毒活疫苗株a d h 缺失标记及其鉴别诊断研究摘要布鲁氏病是布鲁氏杆茵引起的一种在全世界范围内广泛传播的人畜共患病，严重制约着畜牧业的发展。在我国把其定为乙类传染病。根据对宿主的偏好，布鲁氏茵分为六个种，分别为马耳他布鲁氏杆菌B rm e l i t e n s i s 、流产布鲁氏杆菌B r a b o r t u s 、猪布鲁氏杆菌B r s u i s 、绵羊布鲁氏
8、杆菌B r o v i s 、沙林鼠布鲁氏杆菌赢n e o t o m a e 和犬布鲁氏杆菌B rc a n i s 。目前预防布病最有效的办法就是接种疫苗，现用的疫苗主要包括减毒活疫苗，灭活疫苗和亚单位疫苗等。由于灭活疫苗接种后不能在动物机体内复制，使用接种量比较大，免疫期较短还要加入适当的佐剂和亚单位疫苗生产成本较高等缺点，目前预防布病使用最广泛的还是减活疫苗。市场上用的减毒活疫苗主要包括A 1 9 ，S 2 ，M 5 ，1 0 4 M ，R e v 1 ，R B 5 1 等。虽然减活疫苗对布病的预防控制取得了很好的效果，但同样存在一些问题，如减活疫苗毒性较强，接种疫苗后的动物患上布病，无法区别是疫苗感染还是野生株感染。针对上述缺点，本论文将减毒活疫苗的a d h 基因缺失，使其毒力下降，原核表达a d h基因成蛋白，用免疫血清学方法鉴别诊断免疫感染和自然感染，具体试验如下：试验1 布鲁氏茵减毒活疫苗株a d h 基因缺失标记本部分试验通过基因芯片和蛋白芯片挑选出毒力相关基因a d h ，a d h 是表
