《1磷酸鞘氨醇抑制环磷酰胺致胎儿卵巢卵泡凋亡的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《1磷酸鞘氨醇抑制环磷酰胺致胎儿卵巢卵泡凋亡的研究（46页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、论文题E l ：! 二熊酸鞘氢醒抑制叠熊醛膣塑跆 k 鲤巢塑渔遇圭的硒窒答辩委员会主席：奎丝丞塑攫( 逝江太堂医堂部基趟医堂丕论文答辩E l 期：至Q ! 三生量旦2 堑旦温州医学院硕士学位论文目录中文摘要I英文摘要4前言9材料与方法1 1结果1 6分析与讨论2 6结论3 1参考文献3 2附录3 5致谢3 6综述保护女性生育功能几种方法的探讨3 7综述参考文献4 2论文独创性声明4 4温州医学院硕士学位论文卜磷酸鞘氨醇抑制环磷酰胺致胎儿卵巢卵泡凋亡的研究中文摘要目的随着科学技术的发展，放化疗大量应用于癌症患者的治疗，使癌症患者的生存率大大提高。随着放化疗所带来的卵巢早衰，大大降低了癌症生存患者
2、的生活质量n 1 。最近研究证实凋亡是化疗导致卵巢早衰的一个重要的机制之一位1 。国内外大量动物实验研究证实卜磷酸鞘氨醇可以抑制放化疗导致锯齿类动物鼠的卵巢卵泡凋亡，但是卜磷酸鞘氨醇是否同样可以抑制放化疗对人的卵巢的破坏作用则研究较少，故本实验旨在通过建立异种移植模型，将胎儿卵巢组织异种移植到裸鼠体内，研究卜磷酸鞘氨醇是否可以通过抑制化疗药物环磷酰胺导致的胎儿卵巢卵泡的凋亡，发挥保护卵巢功能的作用。方法收集引产胎儿卵巢标本，采用程序化冷冻和快速融解法处理，冻融前后胎儿卵巢组织片经光电镜分析，取足够新鲜的冻融胎儿卵巢标本进行异种移植至裸鼠背部两侧皮下自制的小囊内，将卜磷酸鞘氨醇( s l P )
3、 粉剂溶于由5 的聚乙二醇，2 5 的乙醇，0 8 的吐温一8 0 组成的P E T 介质中，浓度为2 O m l l l ，取部分2 O m M的s i p 进一步稀释至0 5 m M 浓度；利用微量加样器将不同浓度的卜磷酸鞘氨醇( A 左0 5 m M 组，A 右2 O m M 组) 、P E T ( B 组) 和生理盐水( C 组) 和生理盐水( D组，移植对照组) 注入两侧小囊内。移植1 小时后，A 、B 、C 三组经腹腔注射环磷酰胺( 1 m g m 12 0 0 m g k g ) ，D 组未经环磷酰胺处理作为移植对照组。移植2 周后回收各组移植物，行石蜡包埋H E 染色光镜分析、
4、戊二醛固定电镜分析超微结构和免疫组化T U N A L 检测细胞凋亡。结果一冻融前后胎儿卵巢光镜下形态学及电镜下超微结构的比较( 1 ) 光镜下观察，新鲜和冻融组胎儿卵巢组织绝大部分均为原始卵泡，且原始卵泡结构绝大部分均保存较好，为正常原始卵泡结构。与新鲜组相比，冻融组原始卵泡密度稍有降低，无统计学意义( 2 5 + 1 4 8 2V S2 4 8 1 1 4 3 6 ，P O 0 5 ) 。( 2 ) 电镜下观察冻融前后的卵巢的超微结构，新鲜组和冻融组中绝大部分卵泡均保存较完整的结构，较新鲜组，冻融组中卵母细胞中胞浆内空泡增多。少部分线粒体体积增大，呈轻度肿胀，嵴偶有消失，仅见个别卵母细胞出
5、现核膜轻度皱缩。温州医学院硕士学位论文二冻融组( 移植前) 胎儿卵巢组织与D 组( 移植对照组) 的比较( 1 ) 皿染色光镜下观察见D 组( 移植对照组) 原始卵泡明显下降，与冻融组( 移植前 相比具有统计学意义( 1 5 2 3 6 2 8V S2 4 8 1 1 4 3 6 ，P 存活的原始卵泡结构正常，部分卵泡出现卵母细胞形态不规则，胞浆深染，核膜皱缩。( 2 ) 电镜下观察冻融组( 移植前) 中绝大部分卵泡包膜胞浆核均保存较完整的结构，而D 组( 移植对照组) 中部分卵泡出现结构异常，卵母细胞胞膜尚完整，胞浆内偶有空泡形成，线粒体呈轻度肿胀，崤仍可见，核膜完整，核周隙无扩张，核内染色
6、体呈颗粒状均匀分布。颗粒细胞较完整，与卵母细胞连接较紧密，胞浆内有空泡形成，线粒体轻度肿胀，核膜完整，核内染色质分布均匀。三异种移植各组胎儿卵巢组织的比较1 D 组( 移植对照组) 与C 组( 生理盐水+ 环磷酰胺组) 的比较( 1 ) 光镜下观察D 组( 移植对照组) ，存活的原始卵泡结构保存良好，而C 组( 生理盐水+ 环磷酰胺组) 卵泡损伤较大，绝大部分原始卵泡结构异常，出现卵母细胞不规则，胞浆嗜酸性增强，部分细胞核皱缩，核深染，染色质聚集。卵母细胞周围的颗粒细胞不完整，甚至缺如，颗粒细胞排列紊乱，胞浆深染，核固缩，染色质聚集。基底膜不完整。卵巢间质水肿较明显，间质细胞较少，间质出现明显
7、纤维化。与D 组( 移植对照组) 相比，C 组( 生理盐水+ 环磷酰胺组) 原始卵泡密度明显下降( 1 5 2 3 6 2 8V S8 6 2 5 0 0 ，P O 0 5 ) 。而A 右组( 2 O m MS l p )则明显较高，且具有统计学意义( 8 6 2 5 0 0V S1 3 2 5 6 6 1 ，P O 0 5 ) ，而A左组( o 5 I I l Ms l p ) 中凋亡原始卵泡百分率则降低，但不具有统计学意义( 7 1 4 V S6 2 2 ，P O 0 5 ) 。在A 右组( 2 O m Ms l p ) 中则下降明显( 7 1 4 V S1 8 2 ，P 0 0 5 )
8、( 2 ) U n d e ru l t r a s t m c t u r a lo b s e r v a t i o n ，t h em o s tf o l l i c l e sw e r ep r e s e r v e dr e l a t i v e i yi n t a c ts t r u c t u r ei nt h eb o t hg r o u p s I nc o n t r a s tt of l e s hg r o u p ，t h ec a v i t yi n c r e a s e di no o c y t ec y t o l y m p ho f
9、t h ec r y o p r e s e r v e dg r o u p T h ev o l u m eo fas m a l lp a r to ft h em i t o c h o n d r i a li n c r e a s e d ，s l i g h t l ys w o l l e na n dt h em i t o c h o n d r i a lc r i s t ao c c a s i o n a l l yd i s a p p e a r e d N u c l e a rm e m b r a n eo fi n d i v i d u a lo o
10、 c y t e ss h r i n k e d P a r tI I ：Ac o m p a r i s o no ft h ef r e e z i n g t h a w i n gg r o u pa n dt h eDg r o u po ft r a n s p l a n t a t i o ng o u p ( 1 ) U n d e rl i g h tm i c r o s c o p i co b s e r v a t i o n ，C o m p a r e dw i t ht h ec r y o p r e s e r v e dg r o u p ，t h e
11、d e n s i t yo fp r i m o r d i a lf o l l i c l ei nt h eDg r o u p ( t r a n s p l a n t a t i o nc o n t r o lg r o u p )d e c r e a s e ds i n i f i c a n t l y ( 2 4 8 1 1 4 3 6v s l 5 2 3 6 2 8 ，P 0 0 5 ) B u tt h en u m b e ro ft h er i g h tAg r o u pw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e r
12、 ( 9 8 2 5 2 4V S13 2 5 6 61 ，P 0 0 5 ) ，a n dt h ep e r c e n t a g eo fa p o p t o s i so fp r i m o r d i a lf o l l i c l e si nt h el e f tAg r o u p ( O 5 m MS 1 P ) d e c r e a s e d ，b u tt h e r ew a sn os t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c e ( 7 1 i 4 a n d6 2 0 牡2 ，P 0 0 5 ) ，w h i
13、l ei nt h er i g h tAg r o u p ( 2 0 m MS 1 P ) i tw a ss i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e d ( 7 1 4 V St 8 士2 ，P 0 0 5 ) 详见图3 ，详见表1 ( 2 ) 电镜下冻融前后卵巢组织超微结构的比较新鲜组：卵母细胞包膜完整，胞浆较均匀分布，偶有小空泡形成，线粒体数目较多，呈圆形或椭圆形，膜为双层结构，无明显肿胀，嵴清晰可见，以簇状形式分布于细胞核周围；高尔基体和核糖体分布不规则；核较大，核仁明显，核膜较完整，无皱缩，染色质呈颗粒状分布均匀。颗粒细胞排列规则，与卵母细胞
14、连接紧密，微绒毛交错排列，细胞膜完整无皱缩，胞浆分布均匀，核膜完整，无染色质深染聚集，分布均匀。卵巢间质无明显水肿，问质细胞包膜完整，无皱缩，核膜完整，染色质均匀分布。冻融组：大部分卵泡均保存较完整的结构。包膜完整，胞浆内空泡较新鲜组增多。少部分线粒体体积增大，呈轻度肿胀，嵴偶有消失：核糖体均匀分布，核膜完整，核周隙无扩张，染色质均匀分布，无深染聚集断裂；仅见个别卵母细胞出现核膜轻度皱缩。颗粒细胞包膜完整，无皱缩，胞质内较新鲜组有较多的线粒体出现轻度肿胀，嵴消失，核膜完整，染色质均匀分布，未见聚集断裂，颗粒细胞与卵母细胞连接紧密，两者之间的微绒毛交错结构完整。卵巢间质多处出现局部水肿，水肿部位
15、的间质细胞轻度增大，胞浆内有空泡形成，线粒体肿胀嵴消失，核膜完整，未见染色质聚集深染断裂，详见图4 。表1 冻融前后胎儿原始卵泡密度( 个H P )组名原始卵泡密度新鲜组冻融组2 5 1 4 8 22 4 8 1 1 4 3 6注明：纵向比较P 0 0 51 6温卅医学院硕士学位论文 一蘸口-图3 ，I 图代表新鲜组卵巢结构：I I 图代表冻融组卵巢结构：黑色箭头所指为 原始卵泡结构。图3 均为H E 染色2 0 0图4 注明：I 图代表新鲜组，完整的原始卵泡结构代表颗粒细胞，代表 卵母细胞；I I 图代表冻融组，一代表空泡二冻融组与移植后对照组光镜与电镜的比较( 1 ) 光镜下移植前后组的比较光镜下观察冻融组胎儿卵巢组织绝大部分均为正常原始卵泡结构。D 组( 移植对照组) 中绝大部分存活的原始卵泡结构保存良好，部
