如何验收高效液相色谱仪

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1、如何验收高效液相色谱仪谢 光华(中科院化学所 )仪 器验收是一项很 细致 的工作。化了大笔的外汇,理应得到满 意合用的产品,仪器验收的 目的是检 查 外商提供的商品是否达 到了 它的性能 指标。一台高效 液相 色谱仪到货后,首先要组织一个精悍的验收小组,由液相色谱专家、应 用技 术人员、电气 技术人员和器材部门的代 表组成。应准 备专 用的记录本、详细记载验 收过程 中的原始 记录。整个过程分 数量验 收、外观 检查 和质量验收三 步。即首先俭查货物装箱单上所开列的 物件与原订货合同是否 相符、核对无误后对主机和各零部件进 行 外 观检 查,仪器经过 长途运输和装卸、难免有叩碰、如 果防震、耐

2、压的 包装完善的话、是可以完好无损地 到达用户手中的。若发现 包装破 损,就要注 意仪器有否受损,特别 对那 些精密光 学部件和光源有否发生位移和破 碎。仪 器如无缺损、外观完好、则在仔细 阅读使用 说 明书后即可开始 质量(或性能)验收 的工作。高效液相 色谱仪的主要部件有高压 泵、进样阀、色谱柱、检测器、记 录器和梯度 装置等。先进行单机检查、然后再联机测试.单机检 查是指脱开其他连接部件、单独对 某 一组件进 行检 查。然后对整个系统联机测试。一、高压输液泵主要检查其压力和流量能否达 到规定 的指标。例如,指标规定该高压泵可达最高 压力 5 00公斤/厘米“,则在泵 出口处接 一堵头,观

3、察泵压是否可达50 0公斤/厘米“,系统的所有接头 处有否渗 漏现象,泵 密封垫 圈是 否可 靠地工作。目前.高压泵的流量范围一般为0.0 5、9.9毫 升/分,须 检 查流 量精密度和重复性。流量精密度是 指在设 定 流量条件下 与实测 流量是 否相符,方 法是用精密量筒和停表测 定单位时间的 流量,一般,在最 低或 最高流量条件下客易偏离 原设定流量。所谓重复性是指在不同情况下(如空载和 不 同柱压降)流量 的变动。这 里要注意 的是、大多数 泵的压力、流量指标分 两档,即流量5毫 升/分以下最高压力为50 0公 斤/厘米2,5一9.9毫 升/分的最高压力为25 0公斤/厘米2,不能要求在

4、高流量条件下 达 到最高压力。二、检测器1、紫外吸收检测器:包括单波长 和可 变波 长两类。需 要检查以下 几 项,噪音和漂移将灵敏度放在最高档程,分别在静态 和动 态条件下(即没有或有流动 相通过检测池)测 定基 线的 噪音和漂 移(图l)并同 指标比较。稳定性检测器 连续 工作12小时或2 4 小时,观察基 线噪音和漂移的情况。灵敏度自检(以L DC公司120 3单波长紫外检测器为例)将档程(RANGE)放在。.5招位置,选 择开并(ZE RO/CHECK),放在CH-EC K,记录器应偏转满标的5 0%。换句话说,从电气线路给出0.268土o.olAU的偏转值,看 记录器 指 示是否相应

5、偏转满标的5 0%。一46-图1,噪音 和漂移动态线性范围随着样品量 的改变,检测 器有一个线性响应的范围(图2),有的是3个数量 级,有的是4个数 量级。图中LM间为线性响应范围,L点为最小检测 量,是指检测 器能够确切地反映出样品的最低极限量,一般 取噪音的2倍或3倍(图1).对可变波长检测器在改变波长时有一个设置精度的问题,故有,波 长精度测定各种可变波长检测 器有不同的 检查方法。例如日立200一1。型 分光检测器利 用氖灯在65 6.I nm光谱线检测。从6 58nm开始慢慢向短波长扫描,记录仪应在65 6.1土0.4nm范围获得最大读数,如能重复几次即可视为达到了指标要求。国2刚定

6、检侧器和 线性 响应范 围2.杀 差折光检树器有两种。一种是反射式示差折光检测器(例如LDC公 司生产的),有两个棱 镜(折光指数为1.3 1一1.4 5和1.40一1.55),根据所用溶剂和被测样品的 折光指数的范围来选择。使用前先要调整跟踪(Tr aok),否则基线无法归零,并有显著的漂移和噪音。跟踪 调整方 法可参阅说明书。基线 噪音和漂移示 差折 光检测器易受温度的影 响,漂 移可能会较大,可按指标要求检查。如、噪音(在流速1毫升/分 或 更 低时),士1X10一7RIU(水溶液)土2X10一7R IU(甲醇)漂移(在流速1毫升/分或更低时)a,检 测 池有温控5Xlo一7R IU/时

7、(水溶液)15X10一7RI U/时(甲醇 )b,测检 池无温控SX10一。RIU/(水溶一液 )15X10一”R IU/o C(甲醇)跨导(Spa n)调整用来准确刻度示 差折光单位(RIU),以便在记 录仪 上可直 接读出R IU方 法如下,溶解13.33克干燥 过 的蔗糖于10 0 毫升蒸馏水中。再取 出5毫升稀释至1升。该溶液应为1毛R 工U。将该溶液注入样品池。测 量档程放在1 6火位置。记录仪 应偏移至 满标的6 2.5%,如不够或 超过。均可调sP an电位器 至该偏转位置。另 一种是偏转型示差 折光 检测 器,范围较宽,可测折光指数1、1.7 5,例如日本昭和电工 生产的Sho

8、dexRl,SE一5 1,其跨导调 整稍有不 同,方 法如下,溶解22 0毫克蔗糖于10 0 毫 升脱气蒸馏水中,该溶液 的折 光指数同蒸馏水折光指数 之 差应 为3 2x10 - -“RI U,将该溶液注入样品池,参比池保持蒸一月仕一馏水,测量挡程放在3 2又位置,记录笔应偏移满标的1 00%,如不够,可调机,体内的sPa n电位器.动态线性范围和最小检测量并无固定指标可视需要测定。3.荧光检溯器目前多数是光栅自动 扫描荧光检测器,其激发 波长和发射波长范围为22 0一78 onm,检查 光栅准确度如果氨灯作光源,样品池盛满蒸馏水,激发波长(Exeitat呈onWav eleng th)放在

9、o位置,发射波长(EmissionWav ele ng-t h)在467nm慢慢来回转动发射波长度盘,并注意指示表的读数在最大的位置,此时发射波长应在4 67土snm为合适。反过来,发射波长放在。位置,激发波长在4 6 7nm附近慢慢来回转动,指示表在最大读 数位置处,激发波长应 在46 7士s nm。如用 汞灯作光源,波长应为招6士s nm,检 查已知样品 的荧光光谱用标准样品蕙,配置。.0 1微克/毫 升 的乙醇溶液,激发波长放在25Onm,发射波一长扫描得 图3。还可用蕙或丹酞化氨基酸测定最小检测三、进样阀进口液相 色谱仪都采用进样阀 进样,其工作压力多数在15 0 公斤/厘米2,所以,

10、若较长时 间工作在15 0公斤/厘米“以上极易损坏进样阀转子造成漏液。对进样阀主要检查两项指标.1.定量准确性进样阀都有固定体积的定量管(L。p)一般是1 0微升和2 0微升,可用微量注射器精确测量定量管的体积。一次进样的绝对量是通过样品液 的浓度乘上定量 管体积得到 的。2.重复性连续 几次进样,分别测得检测器 的响应值(以峰高或峰面 积表示),可算出均方偏差和变异系数。图3葱的荧尤光谱定 量 分析配置不同浓度的 硫酸奎宁0.IN硫酸 溶液,在激发波长365 nm和发射波长4 6 onm条件下,作定量工作曲线(图4),检查检 测器 的线性响应。四、色谱柱色谱柱是 液相色谱仪的 重要组件,在运

11、输过程中由于振动或柱内溶剂挥发导致柱效下降、柱分离效能变差,因 此,需要检查几个指标。1.柱效选择 一个纯净的 已知样品和合适的流动相,得到样品的保留体积 和半峰宽(也可取峰底宽),如图5所示。例如,tr二48一,2沙Wh=13.2秒,按下式N一55“试N理论塔板数N=5.5 4(漂毕, )=7369如每根柱子长度为2 5 厘米,则理论塔板高度L rl=一不二一 州2.准确度 如指标规定为满标的0.3%,则向记录仪输入 某 一毫伏数几次,观察满标响应值的偏 差和 重复性.3.记录纸速度可设定某一 记录 纸速,如5毫米/分,在一定时间内量取走纸长度,与设定纸速比较。还可测定不 同时间内记 录纸速

12、是 否均衡。六、梯度洗脱装置一般,由梯度程序装置控制(图6),可作2 50*、,、八。月台、,。工1一万厄丽笔 不一”。“笔 不各种柱子 测柱效使用的已知样品和流动 相各不 一样,如C,。反相往可用蔡作已知样况1,7 5 %甲醇,2 5%水为流动相.图6.梯度洗 脱 系统1.高压泵(A、B两种 溶剂)2.梯度 程序控制3.进样阀4.色谱柱5.检测器6.记 录仪1 3.混 合室1 4.胆尽器图5柱效计算和峰不时称性2.峰不对称性(图5)由峰尖作垂线 与底线相交,在峰高1 0写 处截取A和B,然后 计算峰对称 因子B/A,一般以0.8、1.2为宜。五、记录仪1.员敏度有1.2.5.xo.2 o.5

13、o.lo0.5 0 0.lo o0毫 伏各挡,分别代表满标毫伏数。可用标准电子电位差计分别向记录仪 输 入_h述各毫伏数,视记录笔 是否满标偏移,图7才弟 度曲线各种形式 的梯度洗脱 曲线。但由于混合室以及连接管道等死体积的存在,实际的梯度 曲线(即流动 相组成的变化)总要比理 想 的滞图8梯度洗 脱 实验流速2毫升/分紫外检刚器260 nm,。16 a/厘术后 一段时间(图7),故应尽量减小死体积和 提高溶剂混合的效率.图8表示对系统进行梯度洗脱实验的 检查.两种溶剂梯度,A溶剂为0.2%甲苯的甲 醇溶液,B溶剂为甲醇,梯度变 化从。%A到1 0%A(其余为B),每分钟变化5%,然后保持3分

14、钟,再恢复到起始状态。很多高效液相 色谱仪巳由微机控制,在工作前利用微机自检系统进行检查,如无差错 则可进行整个仪器 的运转检查,这些,可参阅有关说明书,这里不再赘述了。简讯东方仪器进出口公司资料室可向您提供世界上商品仪器的最新信息为了更好地为科研工作服务,为用户提供最大的 方便,本资科室在科学 院化 学所技术一室的协助下,清理了近 几年来收集的外国资料样本,最近三年的资料已经 上架,外国公司最新样本将陆续上架。样本按国家分开放置,如.美国、英 国、西德、法国、日本、瑞士、澳大利亚每个国家里按公司的第一个字母顺序排列。香港的代理商有单独的资料盒,欢迎大家光l右查 询。美国SSM公司在北京半导体所建立维修站东方科学仪器 进 出口公司和美 国SolidStateMe a su reme nts公司(以下简称SSM公司)合作,在 中国科学院半导体所建立产品维修站,负责维修中国各进口公司从美国SSM公司进口的合同保修期内外的扩 展 电 阻测试仪等仪器产品、,井努力促进SSM公司的产l异,在中国的技术交流及介绍产品信息。维修站 地址:北京中科院半导休所电话:2 8 4 8 87电报:2 3 31文勇途稿一50一