《Livin及PTEN在视网膜母细胞瘤中的表达及拓扑替康对其增殖凋亡的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Livin及PTEN在视网膜母细胞瘤中的表达及拓扑替康对其增殖凋亡的影响（87页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 目录U lI I I II I I I II I II I I I I I I I I IIIIIIlY 2 3 9 7 8 6 9中文摘要1英文摘要3研究论文L i v i n 及P T E N 在视网膜母细胞瘤中的表达及拓扑替康对其增殖凋亡的影响弓f 言”6第一部分L i v i n 及P T E N 蛋白在视网膜母细胞瘤中的表达及其与视网膜母细胞瘤临床病理特征的关系前言”9日U 吾”。材料与方法1 0结果11附I 蛩l3附表15讨论“17J 、结“一”2 0参考文献2 2第二部分拓扑替康对视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响前言”2 4 2 4日U 吾”“”材料与方法2 4结果2 7附I
2、 蛩”2 9附表3 2讨论33d 、结3 5参考文献37第三部分拓扑替康对视网膜母细胞瘤中L i v i n 和P T E N 表达的影响前言一9 3月U 吾材料与方法4 0结果4 3附图4 4附表4 5讨论“4 6J 、结”一一4 7参考文献4 8结论5 0综述一L i v i n 和P T E N 在恶性肿瘤中的表达5l综述二视网膜母细胞瘤的研究进展6 6致谢一8 2个人简历8 3中文摘要LiVin 及P T E N 在视网膜母细胞瘤中的表达及拓扑替康对其增殖凋亡的影响摘要第一部分L i v i n 及P T E N 蛋白在视网膜母细胞瘤中的表达及其与视网膜母细胞瘤临床病理特征的关系目的：
3、研究视网膜母细胞瘤( r e t i n o b l a s t o m a ，R B ) 组织中L i v i n 和P T E N蛋白的表达，探讨视网膜母细胞瘤中L i v i n 和P T E N 蛋白的表达及其与视网膜母细胞瘤临床病理特征的关系。方法：选取2 0 0 0 年1 月至2 0 1 0 年1 2 月在我院行手术治疗，并经病理证实为视网膜母细胞瘤的4 3 例患者的视网膜组织切片，用M a x - v i s i o n T M快捷免疫组化法联合检测L i v i n 和P T E N 在正常视网膜和视网膜母细胞瘤中的表达及其两者的相关性，并分析其与视网膜母细胞瘤临床病理特征之间
4、的关系。结果：1 视网膜母细胞瘤组中L i v i n 、P T E N 阳性表达分别为2 7 例( 6 2 7 9 ) 、2 0 例( 4 6 5 1 ) ，对照组分别为7 例( 2 0 5 9 ) 、3 1 例( 9 1 1 8 ) ；L i v i n 在视网膜母细胞瘤组织中的表达明显高于正常视网膜组织( z 2 = 3 。7 1 4 ，p 9 0 。初始化疗继以合理的局部治疗成为视网膜母细胞瘤治疗的一种趋势，也越来越受到我国学者及临床医生的重视。化学治疗是保守治疗的主要方法之一，已成为目前视网膜母细胞瘤综合治疗的重要手段之一，也是国内外视网膜母细胞瘤治疗研究相当活跃的一个领域。因此，新
5、的化疗药物及方案的筛选成为研究的重点。拓扑替康( t o p o t e c a n ，T P T ) 做为一种新型化疗药物，是一种合成的喜树碱类似物，它对血脑屏障具有良好的穿透性，现己经成功运用于儿童的某些神经系统肿瘤。近年来，研究表明拓扑替康能有效地穿透血眼屏障，静脉注射后其玻璃体腔内浓度与血浆浓度比值( v i t r e o u s p l a s m a )研究论文达到0 3 8 ，网膜中浓度与血浆浓度比值( r e t i n a p l a s m a ) 高达0 7 ，且联合卡铂对视网膜母细胞瘤的体内外模型都具有良好的治疗效果。由于视网膜母细胞瘤具有侵袭性，易向颅内转移，且其药
6、物敏感性与神经系统肿瘤相类似，因此拓扑替康在治疗视网膜母细胞瘤中具有巨大潜力。细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。它是细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身程序，在细胞基因调控下发生的一种自主性自杀现象，是细胞自我结束生命的一种方式。它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。细胞凋亡具有复杂的分子生物学机制及重要的生物学意义。视网膜母细胞瘤的重要生物学特征之一是存在较高的自发退化率( 1 8 3 2 ) ，是其它恶性肿瘤的1 0 0
7、 0 倍。近年来，众多研究表明，细胞凋亡参与了视网膜母细胞瘤的自发退化，凋亡与视网膜母细胞瘤的发生发展、病程转归及预后存在着极其密切的关系，诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡可达到治疗视网膜母细胞瘤的目的。L i v i n 是I A P S ( i n h i b i t o r so fa p o p t o s i sp r o t e i n s ，I A P s ) 蛋白家族的新成员，2 0 0 0 年由科学家在人基因组库中筛选克隆出的一种新型、有较强抗凋亡功能的I A P s 家族成员，能够与C a s p a s e 蛋白结合，抑制其介导的细胞凋亡。L i v i l l 的B I R
8、结构域能与多种c a s p a s e 结合并相互作用，从而阻断c a s p a s e s 凋亡作用的发挥，达到抑制细胞凋亡的作用。P T E N 是第一个被发现的具有磷酸酶活性的抑癌基因，存在于多种正常组织，但在恶性肿瘤中P T E N 的表达明显异常。研究表明，P T E N也是唯一能使脂类去磷酸化的抑癌基因，不仅参与细胞周期的调控，还能调控细胞的凋亡，参与肿瘤的发生与发展，是人类肿瘤中最易发生突变的抑癌基因之一。为了研究视网膜母细胞瘤组织中L i v i n 和P T E N 蛋白的表达情况，本文应用M a x V i s i o n l M 快捷免疫组化法检测L i V i l
9、l 和P T E N 在正常视网膜和视网膜母细胞瘤中的表达，并分析其与视网膜母细胞瘤临床病理特征之间的关系。将人视网膜母细胞瘤细胞株H x o r b 4 4 进行培养传代，M T T 法测定在不同浓度拓扑替康的作用下H x o r b 4 4 细胞的存活率，并研究论文计算其I C 5 0 值。流式细胞仪检测不同浓度的拓扑替康对H x o r b 4 4 凋亡的影响，用W e s t e r nb l o t 法检测凋亡过程中L i v 试和P T E N 蛋白表达的变化。观察其对视网膜母细胞瘤细胞生长和凋亡的影响，初步探讨了其可能的机制，为深入理解L i v i n 和P T E N 蛋白在
10、视网膜母细胞瘤中的抗凋亡作用及其分子生物学机制奠定了基础。研究论文第一部分Liv in 及P T E N 蛋白在视网膜母细胞瘤中的表达及其与视网膜母细胞瘤临床病理特征的关系前言视网膜母细胞瘤( r e t i n o b l a s t o m a ，R B ) 是婴幼儿最常见的遗传性眼内恶性肿瘤。其发病率约为1 1 5 0 0 0 1 1 8 0 0 0 ，占儿童恶性肿瘤中的第二位。本病具有遗传因素，其致病基因R b l 是第一个被发现的抑癌基因，是整个遗传学、肿瘤学发展的里程碑。随着现代肿瘤诊疗手段以及分子生物学的不断进展，研究发现R b l 基因并非是导致视网膜母细胞瘤形成的唯一原因，视
11、网膜母细胞瘤的发生发展是一个多基因参与的过程。因此，从分子水平上深入研究视网膜母细胞瘤的发病机制，仍是今后眼科肿瘤研究的重点。肿瘤的发生发展往往是一个多因素、多步骤和多基因参与的过程。细胞增生和细胞凋亡之间的平衡失去控制是肿瘤发生的重要分子生物学基础。癌基因的激活和抑癌基因的失活导致了细胞基因突变、细胞异常增生，最终导致了肿瘤的发生。越来越多的研究发现，癌基因和抑癌基因在恶性肿瘤的发生、发展和预后等方面起着重要的作用，并为肿瘤的 早期诊断、细胞治疗和基因治疗提供了新的靶点。L i v i n 是I A P s( i n h i b i t o r so f a p o p t o s i sp
12、 r o t e i n s ，I A P s ) 蛋白家族的新成员，是一种有较强抗凋亡功能的I A P s 家族成员，能够与C a s p a s e s 蛋白结合，抑制其介导的细胞凋亡。P T E N 是第一个被发现的具有磷酸酶活性的抑癌基因，存在于多种正常组织，但在恶性肿瘤中P T E N 的表达明显异常。研究表明，P T E N 也是唯一能使脂类去磷酸化的抑癌基因，与多种细胞信号转导通路的因子有关，不仅参与细胞周期的调控，还能调控细胞的生长、凋亡、移动及信号转导等，参与肿瘤的发生与发展，是人类肿瘤中最易发生突变的抑癌基因之一。凋亡抑制蛋白L i v i n 及抑癌基因P T E N 在
13、视网膜母细胞瘤中的表达及其意义的目前尚未见报道。为此，我们应用M a x - V i s i o n T M 快捷免疫组化法联合检测L i v i n 和P T E N 在正常视网膜和研究论文视网膜母细胞瘤中的表达及其两者的相关性，并分析其与视网膜母细胞瘤临床病理特征之间的关系。旨在探讨L i v i n 及P T E N 蛋白在视网膜母细胞瘤的发生发展中的分子机制，从而加深对视网膜母细胞瘤发病机制的认识并寻找新的治疗手段。材料与方法1 实验材料1 1 标本来源：选取2 0 0 0 年1 月至2 0 1 0 年1 2 月在我院行手术治疗，并经病理证实为视网膜母细胞瘤的4 3 例患者的视网膜组织切片，其中男2 3 例，女2 0 例；年龄在9 个月8 岁，平均3 3 5 岁；临床分期为眼内生长期2 1 例，青光眼期1 3 例，眼外扩展期9 例；术前均未进行放化疗。组织病理分型为未分化型2 4 例、分化型1 9 例。选取外伤后眼球摘除的3 4 例患者的视网膜组织切片作为对照组。1 2 主要试剂：兔抗
