《CD11clowCD45RBhigh调节性DC对异基因骨髓移植小鼠GVHD和GVL的作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CD11clowCD45RBhigh调节性DC对异基因骨髓移植小鼠GVHD和GVL的作用（69页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、研究生个人简介谷红红，2 0 1 0 , - - 2 0 1 3 年于徐州医学院攻读血液内科专业硕士学位，就读期间修满学分2 6 5 分，完成1 4 个月临床培训，顺利完成学位课题研究及毕业论文写作，通过论文盲审。研究方向移植免疫学研究课题名称C D ll c l o w C D 4 5 R B “曲调节性D C 对异基因骨髓移植小鼠G V H D 和G V L 的作用课题资助江苏省高校自然科学基金( 0 7 K J D 3 2 0 2 2 4 ) 、徐州市科技计划项( X F l0 C 0 6 5 ) 、徐州市科技计划项目( X Z Z D l l 4 9 ) 等项目资助。发表文章中国组织工
2、程研究1 篇；国际输血及血液学杂志1 篇目录l I 1 l l l l l l l 1 l l l l l l 1 l l l Z l l 2 1 t l l l 1 l l l l l l l l lIIlY 2 4 3 5 2 4 1缩略词表1中文摘要3英文摘要一6前言一9刚舌一第一部分小鼠C D l l c 炯C D 4 5 R B m g “调节性树突状细胞的培养与鉴定材料和方法1 2材料1 2方法1 4结果1 8第二部分C D l l c o W C D 4 5 R B M g “调节性树突状细胞对异基因骨髓移植小鼠G V H D 和G V L 的作用材料和方法2 4材料2 4方法2
3、 6结果3 3讨论4 0结论4 3参考文献一4 5综述4 9攻读硕士学位期间发表学术论文题目6 2临床培i ) l l d , 结6 3致谢6 4论文独创性声明6 5论文使用授权声明6 5论文审阅认定书6 6徐州医学院硕士学位论文缩略词A P Cb pC DC D N AD CD C r e gD E P CF B SF C MF I T CG M C S FG V H DG V LH EH L AI F N Yi m D CI LL P Sm D C英文全称缩略词表A b b r e v i a t i o nB a s ep a i rC l u s t e ro fd i f f e r
4、 e n t i a t i o nC o m p e n t a r yD N AD e n d r i t i cc e l l sR e g u l a t o r yd e n d r i t i cc e l l中文全称抗原递呈细胞碱基对分化抗原簇全长互补脱氧核糖核酸树突状细胞调节性树突状细胞D e t h y l p y r o c a r b o n a t e焦碳酸二乙酯F e t a lb o v i n es e r u mF l o wc y t o m e t r yF u o r e s c e i ni s o t h i o c y a n a t eG r a
5、n u l o c y t em a c r o p h a g ec o l o n y - s t i m u l a t i n gf a c t o rG r a f t v e r s u s h o s td i s e a s eG r a f t v e r s u s 1 e u k e m i a胎牛血清流式细胞术异硫氰酸荧光素粒一巨噬细胞集落刺激因子移植物抗宿主病移植物抗自血病H e m a t o x y l i na n dE o s i nG i e m s as t a i n i n g苏木精伊红染色H u m a nl e u k e m i aa n t i
6、 g e nI n t e r f e r o n g a m m a人类白细胞抗原干扰素吖I m m a t u r ed e n d r i t i cc e l l s未成熟树突状细胞I n t e r l e u k i nL i p o p o l y s a c c h a r i d e白介素脂多糖M a t u r ed e n d r i t i cc e l l s成熟树突状细胞徐州医学院硕士学位论文M H CM L RO DP B SP EM a j o rh i s t o c o m p a t i b i l i t yc o m p l e x主要组织相容性复合体
7、M i x e dl y m p h o c y t er e a c t i o n混合淋巴细胞反应o p t i c a ld e n s i t yP h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n eP h y c o e r y t h r i n光密度值磷酸盐缓冲液藻红蛋白R T - P C RR e v e r s et r a n s c r i p t i o n - p o l y m e r a s ec h a i n 逆转录聚合酶链反应r e a c t i o nT E MT r a n s m i s s i o ne l e c
8、t r o nm i c r o s c o p e透射电镜S y n B M TS y n g e n e i cb o n em a r r o wt r a n s p l a n t a t i o n同基因骨髓移植T B ET G F D lT r e gt r i s b u f f e r e ds a l i n eT r i s 缓冲液T r a n s f o r m i n gg r o wf a c t o r - 1 3 1转化生长因子p 1R e g u l a t o r yTc e l l2调节性T 细胞徐州医学院硕士学位论文C D l l c l 。W C D
9、 4 5 R B m g h 调节性D C 对异基因骨髓移植小鼠G V H D 和G V L 的作用中文摘要目的建立急性单核细胞白血病小鼠( A M O L ) 模型，观察C D l l c o W C D 4 5 R B h g h表型的调节性树突状细胞( D C r e g ) 对异基因骨髓移植( a l l o B M T ) 小鼠移植物抗宿主病( G V H D ) 及移植物抗白血病( G V L ) 的调控作用，为G V H D 的防治提供实验依据。方法1 、无菌条件下取C 5 7 B L 6 小鼠的骨髓单个核细胞( M N C ) ，均匀接种至含有R P M l l 6 4 0 完
10、全培养基的六孔板中，按组别分别加入不同的细胞因子，培养不同种类的树突状细胞( D C ) 。实验分为3 组：D C r e g 组：用含r m G M - C S F2 0n g m L 、I L 1 02 0n g m L ，T G F p l2 0n g m L 的R P M l l 6 4 0 培养基培养7d ，细菌脂多糖( L P S ) 刺激2 4h 使其成熟。成熟树突状细胞( m D C ) 组，用含r m G M C S F2 0n g m L 、I T I I I L 一41 0n g m L 的R P M l l 6 4 0 培养基培养6d ，予L P S 刺激2 4h ，使
11、其成熟。未成熟D C 组( i m D C ) ，用含r m G M C S F2 0n g m L 、r m l L 41 0n g m L的R P M l l 6 4 0 培养基中诱导培养7d 。用倒置显微镜及透射电镜观察D C 的形态及超微结构，流式细胞术鉴定其免疫表型；C C K 8 法检测上述不同种类D C 刺激异基因淋巴细胞增殖能力；趋化实验检测细胞迁移能力。2 、建立白血病骨髓移植小鼠模型：以C 5 7 B L 6 小鼠为供鼠，B A L B c 小鼠为受鼠，B A L B c 小鼠经致死剂量6 0 C o 丫射线全身照射( T B I ) 后4h 内经尾静脉输注A M O L
12、细胞株S H I 1 细胞、供鼠骨髓M N C 和脾脏M N C 。实验分为5 组：T B ! 组( n = 5 ) ；A M O L 组( n = 1 0 ) ：即输注同基因小鼠骨髓M N C5 x 1 0 6 只和脾脏M N C5 x 1 0 5 只，同时输注S H I 1 细胞1 2 x 1 0 7 只；a l l o B M T 组( n = 1 5 ) ：即输注异基因小鼠骨髓M N C5 1 0 6 只和脾脏M N C5 1 0 只，同时输注S H I 1 细胞1 2 1 07 只；i m D C 移植组( n = 1 5 ) ：在徐州医学院硕士学位论文a l l o B M T 的
13、基础上输注i m D C5 1 0 6 5 寻；D C r e g 移植组( n = 1 5 ) ：在a l l o B M T 的基础上输注D C r e g5 x 1 0 6 H 。通过受鼠G V H D 临床评分、病理评分、异基因嵌合体、生存期等，观察输注D C r e g 、i m D C 对移植小鼠G V H D 的影响，并通过白血病发生率、生存期评价G V L 效应。结果1 D C 细胞的鉴定：倒置显微镜下观察小鼠骨髓M N C 培养2 4h 后大部分贴壁生长，仅见少量悬浮细胞，培养3d 左右，可见细胞呈现“葡萄“ 状生长的集落，培养至4d 后可见细胞表面出现不规则树突状突起，呈现
14、典型的D C 形态，集落边缘也可见毛刺状突起，约5d 时细胞逐渐从集落中释放出来，并悬浮生长；透射电镜下观察到m D C 放射状突起多而密集，细胞表面褶皱多；i m D C 、D C r e g 放射状突起较稀疏，细胞表面褶皱减少；m D C 高表达C D 8 0 、C D 8 6 、C D l l c和I A I E 分子，i m D C 低表达C D S 0 、C D 8 6 、I A f I E 分子，高表达C D ll c ，与i m D C相比D C r e g 高表达C D 4 5 R B ，低表达C D ll c 及更低水平表达C D 8 0 、C D 8 6 。D C r e g组、i m D C 组增殖率明显低于m D C 组，差异有统计学意义( P 0 0 5
