《小鼠白介素 2(il-2)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小鼠白介素 2(il-2)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书（15页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 1st Edition, revised in Jun, 2014 （本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！ ） 小鼠白介素小鼠白介素 2(IL-2)酶联免疫吸附测定试剂盒酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书使用说明书 Mouse IL-2 (Interleukin 2) ELISA Kit 产品货号：E-ELN-M0042c 使用前请仔细阅读说明书。如果有任何问题，请通过以下方式联系我们： 全国免费电话 400-660-4808 销售部电话 027-87385095 技术部电话 027-87645690 电子邮箱（销售） P 电子邮箱（技术） QQ 客服 1037150941 网址 联
2、系时请提供产品货号（见试剂盒标签） ，以便我们更高效地为您服务。 Copyright 2012 Elabscience Biotechnology Co.,Ltd All Rights Reserved Elabscience 1st Edition, revised in Jun, 2014 小鼠白介素小鼠白介素 2(IL-2)酶联免疫吸附测定试剂盒酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书使用说明书 产品货号：E-ELN-M0042c （本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!） 声明：声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品适用于体外定量检测小鼠血清、血 浆或其它相关生物液体中天然和重
3、组IL-2浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！ 如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 试剂盒组成：试剂盒组成： 中文名称中文名称 英文名称英文名称 规格规格 保存条件保存条件 ELISA 酶标板（可拆卸） Micro ELISA Plate(Dismountable) 8 12 / 8 6 * 4/-20 # 冻干标准品 Reference Standard 2/1 支* 4/-20 # 标准品&样品稀释液 Reference Standard & Sample Diluent 1 瓶 20mL/12mL * 4 浓缩 HRP 酶结合物 C
4、oncentrated HRP Conjugate 1 支 120L/70L * 4(避光) 酶结合物稀释液 HRP Conjugate Diluent 1 瓶 10mL/6mL * 4 浓缩洗涤液（25 ） Concentrated Wash Buffer (25 ) 1 瓶 30mL/16mL * 4 底物溶液（TMB） Substrate Reagent 1 瓶 10mL/6mL * 4(避光) 反应终止液 Stop Solution 1 瓶 10mL/6mL * 4 封板覆膜 Plate Sealer 5/3 张* 产品说明书 Product Description 1 份 质检报告
5、Certificate of Analysis 1 份 特别说明特别说明： *: 96T/48T（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4，需长时间存放或多次使用建议存于-20. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠IL-2抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中 的小鼠IL-2会与包被抗体结合， 游离的成分被洗去。 加入辣根过氧化物酶标记的抗小鼠IL-2抗体。 抗小鼠IL-2抗体与结合在包被抗体上的小鼠IL-2结合，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)， T
6、MB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测 OD值， IL-2浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-2的浓度。 样品收集样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4过夜后于1000 g离心20分钟，取上清即可检测，收集 血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000 g离心15分钟，取上清即可1st Edition, revised in Jun, 2014 3 检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M,
7、 pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会 影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体 积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。 推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组 织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000 g离心510分钟， 取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000 g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000 g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可
8、参考：http:/ 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻 存于-20(1个月内检测)，或-80（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先建议先 做预实验，以确定稀释倍数做预实验，以确定稀释倍数）。 试验所需自备物品试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10L, 2-20L, 20-200L, 200-1000L 3. 37恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸
9、 检测前准备工作检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。 未用完的放回4。 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结 晶，属于正常现象，可用40水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超 过50，使用时洗涤液应为室温）。 3. 标准品: 加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后， 轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进（注：不要直接在反应孔中进 行倍比稀释）行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、12
10、5、62.5、31.25、0ng/mL， 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。 如配制1000pg/mL标准品： 取0.5mL 2000pg/mL 的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中， 混匀即可， 其余浓度依此类推。 4. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100L/孔计），实际配制时应多配制 100-200L。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。 当日使用。 标准品稀释方法图例：标准品稀释方法图例：（以500L/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200L/管） 1st Edition, revised
11、in Jun, 2014 4 1 2 3 4 5 6 7 8 Tube 2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 0 pg/mL 洗涤方法洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350L，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350L，浸泡1-2分钟，吸 去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 操作步骤操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100L，余孔分 别加标
12、准品或待测样品 100L，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触 及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次为保证实验结果有效性，每次 实验请使用新的标准品溶液。实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350L/每孔，甩干并在吸水纸 上轻拍将孔内液体拍干。 3. 每孔加酶结合物工作液酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100L，加上覆膜，37温育 60 分钟。 4. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 2。 5. 每孔加底物溶液底物溶液(TMB)90L，酶标板加上覆
13、膜 37避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情 况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止） 。 6. 每孔加终止液终止液 50L，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液 的加入顺序相同。 7. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值） 。应提前打开酶标仪电源，预热仪 器，设置好检测程序。 8. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。 1st Edition, revised in Jun, 2014 5 注意事项注意事项： 1. 保存：保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避
14、免将试剂暴露在强 光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成 任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在 10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标 板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度
15、。 5. 洗涤洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸 水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：试剂配制： Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因 此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器 小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀 释液配制， 不能混淆。 请精确配制标准品及工作液， 尽量不要微量配制 （如吸取Concentrated HRP Conjugate时，一次不要小于10L） ，以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重 复使用已稀释过的标准品、 酶结合物工作液。 若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装， 将其放在-20-80贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（
