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1、四川大学硕士学位论文灯盏花素氯化钠注射液处方工艺及质量标准研究姓名：代勇申请学位级别：硕士专业：药物分析指导教师：李章万20050416堕川茎兰塑主堂位论文灯盏花紊氯化钠注射液处方工艺及质量标准研究灯盏花素氯化钠注射液处方工艺及质量标准研究硕士研究生：导师：摘代勇 李章万教授要灯盏花，又名灯盏细辛，为菊科植物短葶飞蓬E r i g e r o nb r e v i s c a p u s ( V a i n ) H a n d 一M a z z 的干燥全草，原系云南民间苗族、彝族、德昂族等少数民族习用草药，最早见载于“滇南本草 。自2 0 世纪6 0 年代云南省丘北一苗族罗姓草医以治疗瘫痪药介
2、绍于世后，开始被广泛研究。临床主要用于闭塞性脑血管疾病及所致的瘫痪、脑出血所致的后遗症和多种心血管疾病，如脑梗塞、脑出血恢复期后遗症、脑供血不足、椎底动脉供血不足、冠心病、心绞痛、高血压、高粘滞血症、心功能异常、I I 型糖尿病、肺心病等。灯盏花素系灯盏花的主要成分之一，临床实验表明灯盏花素大剂量使用有较好的疗效。目前灯盏花素已作为原料药用于几种制剂的生产，如片剂、胶囊剂和注射液( 小针剂) ，但迄今市场上尚未有灯盏花素氯化钠注射液( 输液剂) 上市，因此本文从处方筛选、制备工艺优化、质量控制标准的建立、稳定性考察等方面对灯盏花素氯化钠注射液( 输液剂) 进行了全面的研究。采用单因素考察和正交
3、实验的方法，综合多个评价指标，筛选确定了灯盏花素氯化钠注射液( 输液剂) 的处方及制备工艺。本文还对灯盏花素氯化钠注射液( 输液剂) 的质量控制方法进行了较深入的研究。根据本品的性质与结构特征，建立了理化鉴别、杂质检查以及含量测定方法，制订了本品的质量标准( 草案) 。采用沉淀四川大学硕士学位论文灯盏花素氯化钠注射液处方工艺及质量标准研究滴定法测定本品中氯化钠含量：采用R P H P L C 法测定本品中灯盏花乙素含量及进行有关物质检查。选择D i k m aD i a m o n s i l T MC 1 8 柱( 2 0 0m i n x 4 6n 1 1 ni d ，5 岬) ，流动相为
4、甲醇O 1 m o l L 叫醋酸铵( 4 5 ：5 5 )( 磷酸调p H 2 、4 ) ；检测波长为3 3 5 n m ；流速1 , 0m l r a i n ；柱温3 5 。C 。在此色谱条件下，在0 3 2 1 6 0 p g 范围内，灯盏花乙素量与其峰面积线性关系良好( ，= O 9 9 9 3 ) ，检出限为O 2 v g ( S N = 3 ) ，精密度实验R S D _ ( 1 9 7 7 年版一部) 现己被制成多种制剂，如灯盏细辛胶囊、灯盏花颗粒。灯盏花素片、青光康片、益脉康片等。临床主要用于闭塞性脑血管疾病及所致的瘫痪、脑出血所致的后遗症和多种心血管疾病，如脑梗塞、脑出血恢
5、复期后遗症、脑供血不足、椎底动脉供血不足、冠心病、心绞痛、高血压、高粘滞血症、心功能异常、I I 型糖尿病、肺心病等。主要药效学如下“。：1 、显著降改善微循环，增加脑血流量，提高血脑屏障的通透性。对脑缺所致脑功能障碍及脑水肿亦有防治作用。2 、显著增加营养性心肌血流量、改善心肌微循环，并有扩张血管的作用，对脑血栓形成所致心功能障碍具有防治作用。3 、显著的抗血小板凝聚作用。4 、能提高抗体巨噬功能，增加血流中C A M P 含量，提高抗体免疫功能。所谓“灯盏花素”，文献定义为以灯盏花乙素为主含少量灯盏花甲素的混合物。“中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂“ ( 第1 3 册)定义为：为菊
6、科植物短葶飞蓬中提取的黄酮成分，含量以灯盏花乙素( C 。H 。0 。) 干燥品计算，应为9 5 0 一1 0 5 O 。灯盏花乙素，又名野黄芩苷，英文名：B r e v i s c a p i n i ，化学名：4 、5 、6 三羟基黄酮- 7 - - 0 - - 葡萄糖醛酸苷，其化学结构见图1 。璺卫堕! 兰堡士学位论文灯盏花幕氯化钠注射液处方工艺及质量标准研究C O ，H图l灯盏花乙素O H该化合物为一黄酮类化台物，易溶于甲醇，氢氧化钠，难溶于水、醋酸乙酯，微溶于乙醇、丙酮、氯仿，在碱性溶液中易水解。曾有报道。1 ，临床上对病人大剂量静脉注射灯盏花素注射液疗效更为显著，而目前市场上尚未有
7、灯盏花素注射液( 输液剂) 上市，只有小针剂的灯盏花素注射液( 规格为5 m g 2 m l ，肌内注射) ，其制备工艺尚未见文献报道。而且现有的灯盏花素注射液标准。1 ( 卫生部部颁标准，1 9 9 8 年颁布，标准号W S 3 - - B 一3 8 2 3 - - 9 8 ) ，用紫外分光光度法测含量，而紫外分光光度法专属性差，不能很好反应注射液中灯盏花乙素的含量及其变化情况。我们曾将市售的灯盏花素注射液( 规格为5 m g 2 m l ，肌肉注射) 分别用紫外分光光度法和H P L C 法测含量，发现前者达到标示量的1 0 0 左右，而后者测得值只有标示量的5 0 左右。因此，对灯盏花素
8、注射液重新进行处方工艺和质量标准研究有一定的现实意义。本课题共包括三个部分：一、灯盏花素氯化钠注射液( 输液剂) 处方与工艺研究；二、灯盏花素氯化钠注射液( 输液剂) 质量标准研究：三、灯盏花素氯化钠注射液( 输液剂) 指纹图谱研究。研究工作根据制剂的有关参数，对不同的附加剂进行了筛选，并优化了处方，考察了处方工艺的稳定性：进行了灯盏花素氯化钠注射液( 输液剂) 的质量评价研究，考察了制剂的加速稳定性及长期稳定性，并对其进行了指纹图谱的初步研究，四川大学硕士学位论文灯盏花素氯化钠注射液处方工艺及质量标准研究通过对灯盏细辛药材、灯盏花素原料和注射液( 输液剂) - - 者间比较及十批不同批号的注
9、射液( 输液剂) 相似度分析，建立了灯盏花素氯化钠注射液的H P L C 指纹图谱。1 0四川大学硕士学位论文灯盏花素氯亿钠注射液处方工艺及质量标准研究第一部分灯盏花素氯化钠注射液处方与工艺研究1 仪器与试药1 1 仅器高效液相色谱仪：包括日本岛津L C 1 0 A 高压液相色谱泵、S P D 1 0 A v p 型紫外检测器、C T O 。6 A 型柱恒温箱、杭州普惠S E P U 3 0 0 0色谱工作站和美国R h e o d y n e7 7 2 5 型液相色谱进样器。紫外可见分光光度计：u V 2 2 0 1 紫外可见分光光度计，日本岛滓。其它仪器：p H S 一3 C 型酸度计，成
10、都方舟科技开发公司；S B 3 2 0 0型超声清洗器，上海市B R A N S O N 超声仪器有限公司；瑞士M E T T L E RA E 2 6 0 型电子分析天平( O 1 i n g ) ；美国A U T O S C I E N C E 减压抽滤仪：s H B 一3 型循环水式多用真空泵，郑州长城仪器厂；K X B 1 2 A 恒温培养箱，上海科学分析试验仪器厂；Y B 一2 型澄明度检测仪，天津大学精密仪器厂；热压灭菌器，天津大学无线电厂。1 2 试药灯盏花素对照品( 中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：8 8 0 - - 2 0 0 0 0 1 ，含量9 6 4 ) ：
11、灯盏花索原料，符合卫生部部颁标准灯盏花素项下各项指标的规定( 1 9 9 8 年颁布，标准号w s 3 B 一3 8 2 39 8 ) ：云南植物药业有限公司生产；灯盏花素注射液( 规格：5 m g 2 m l ，昆明友谊制药厂生产，批号：0 0 1 2 0 1 ) ；甲醇：色谱纯，江苏淮阴塑料制品厂精细化工研究所；超纯水：西南核物理研究所；其余试剂均为分析纯。2 处方与制备工艺2 1 剂量确定依据四川大学硕士学位论文灯盏花素氯化钠注射液处方工艺及质量标准研究根据临床报道，对病人进行大剂量静脉注射能显著提高疗效，结合灯盏花素注射液( 小针剂，标示量：5 m g m 1 ) 及注射液静脉注射的特
12、点，确定灯盏花素氯化钠注射液( 输液剂) 的标示量为2 0 m g 2 5 0 m l 。2 2 处方依据及研制灯盏花素氯化钠注射剂的处方是在借鉴文献的基础上，以灯盏花素原料药直接投料，并经初步试验研究、加速试验、留样观察等的基础上确定的，分别对处方组成中的增溶剂的种类及用量、p H 调节剂、金属离子螯合剂以及抗氧剂的用量进行了考察。2 2 1 原料来源灯盏花素原料药由云南植物药业有限公司提供，其各项理化性质均符合卫生部部颁标准灯盏花素项下各项指标的规定。含量照标准中的方法( u v 法) 测定，按干燥品计含C 2 1 H ：8 0 1 2 为9 9 5 7 ：采用本文中含量测定法( H P
13、L C 法) 测定，按干燥品计含C 2 】H 1 8 0 l 。为9 6 0 1 。2 2 2 增溶剂种类及用量由于灯盏花素( 包括乙素和少量甲素) 为一黄酮苷类化合物，具有不溶于水的物理特性，因此无法直接将灯盏花素溶解于水中。根据灯盏花索具弱酸性，可溶解于氢氧化钠溶液的特点，因此首先考虑以氢氧化钠作为增溶剂，并对其用量进行研究。分别配制O 1 m o l m l 、O 0 5 m o l m l 及O 0 1 m o l m l 的氢氧化钠溶液，各加1 5 m l 、7 5 m l 和1 5 m l 于含2 0 m g 灯盏花素的1 0 0 m l 悬浊液中，搅拌溶解后用高效液相色谱测定灯盏
14、花乙素百分含量，其结果如表1 所示：璺必兰堕主望垡堕塞灯盏花素氯化钠注射液处方工艺及质量标准研究试验结果表明，三种浓度的氢氧化钠溶液均能使灯盏花素溶解，溶解后溶液的颜色均有所加深，灯盏花乙素量显著下降，估计为氢氧化钠溶液浓度过高，在溶解灯盏花素过程中溶液局部过浓，而灯盏花素为黄酮苷类化合物，其特殊的化学结构在强碱作用下遭到破坏，使得灯盏花素含量降低。而将氢氧化钠的浓度改为0 0 0 m o m l 后，因浓度低使灯盏花素的溶解变得较为困难。改用碱性较弱的碳酸氢钠溶液( 浓度分别为为O 1 m o l m l 、O 0 5 m o l m l 及O O l m o l m 1 ) ，加入一定量的
15、体积后，搅拌，使灯盏花素溶解，定容至2 5 0 m ，于输液瓶中灌封，在1 1 5 。C 高温灭菌半小时，以H P L C 测定灯盏花乙素含量，结果如表2 所示：表2 不同浓度N a H C 0 3 下灯盏花乙素含量四川大学硕士学位论文灯盏花素氯化钠注射液处方工艺及质量标准研究试验结果表明，三种浓度的碳酸氢钠均能使灯盏花素溶解，且溶液颜色均为黄色，溶解过程中灯盏花素的含量虽仍然降低，但降低幅度远少于相同浓度下的氢氧化钠溶液，表明了碱性不同的物质对灯盏花素的含量影响各不相同。经高温灭菌后，灯盏花素的含量进一步下降，且溶液颜色加深，说明采用碳酸氢钠作为增溶剂后，与灯盏花素生成一强碱g 日酸盐，在高
16、温时易水解，从而造成了灯盏花素的含量进一步下降，造成了灯盏花素的回收率较低。改用碱性极弱的L 一精氨酸作为增溶剂，通过它与灯盏花素( 包括乙素和少量甲素) 反应生成一弱碱弱酸盐化合物，从而使灯盏花素溶解。按反应式进行计算，O 0 2 9 灯盏花素约需要0 0 2 2 5 9L 一精氨酸，因此分别配制含：O 0 2 2 8 9 、O 0 2 7 6 9 ( 过量2 0 ) 、0 0 3 2 2 9 ( 过量4 0 ) 、0 0 3 5 2 9 ( 过量6 0 ) 0 0 4 0 6 9 ( 过量8 0 ) 、0 0 4 5 2 9 ( 过量1 0 0 )和0 。0 5 0 3 9 ( 过量1 2 0 ) 的2 5 m l 水溶液，加入约含0 0 2 9 的灯盏花素悬浊液中，搅拌，考察灯盏花素的溶解情况。结果表明：加入O 0 2 2 8 9 、O 0 2 7 6 9 、O 0 3 2 2
