《2012级《微生物学实验》指导手册》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2012级《微生物学实验》指导手册（44页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 微生物与微生物工程实验微生物与微生物工程实验 指导手册指导手册 西北师范大学生命科学学院 微生物学团队 2014 年 9 月编制 目目 录录 前言 . 1 微生物实验室安全须知 . 2 微生物实验注意事项 . 3 微生物与微生物工程实验用器材一览表 . 9 微生物与微生物工程实验教学进度表（必修） . 10 实验设计方案与实验报告撰写要求 . 11 实验内容指导 . 12 实验一 (I) 普通光学显微镜的使用 . 12 实验一 (II) 细菌的涂片及简单染色法 . 16 实验二 四大类微生物菌落及细胞形态的观察 . 19 综合大实验(三十) 产酶菌种的分离、筛选、鉴定和产酶条件优化 . 25
2、 附录 . 32 附录 1 微生物实验常用菌种及其学名 . 32 附录 2 常用培养基成分及其配制 . 33 附录 3 常用染色液和试剂的配制 . 36 附录 4 常用缓冲液配制表. 40 附录 5 常用消毒剂表 . 41 参考文献 . 42 1 前言前言 为适应现代大学开放性、综合性、创新性实验教学改革的要求，经微生物学团队讨论， 在 2012 级生物技术和制药工程专业开展 微生物与微生物工程实验教学改革初步尝试。 本实验指导手册只提供实验内容的基本纲要、 基本思路、 基本方法和主要参考书目，具体的实验内容（实验三实验十）须要同学们借助微生物学及相关课程的理论和实验教材，在教师的辅助指导下，
3、自主设计、自主实施、协作分工。 希望通过本次实验教学改革，达到以下目的： 1、通过一个综合设计实验，贯穿微生物学研究的主要技术和方法，使实验内容系统化、 整体化， 使同学们对微生物学研究技术和方法的认识更加系统全面； 2、通过自主设计、实施实验，提高同学们对实验课程的积极性和主动性，培养同学们的自主性、创造性、协作精神和统筹能力，锻炼基本科学研究能力。 同时也希望同学们本着对自己和实验小组负责的态度， 认真投入时间和精力，尽力设计、筹划、实施所设计的实验内容，配合教师做好本次实验教学改革。 由于初次尝试，在由于初次尝试，在本本实验课程时间安排、实验课程时间安排、人员协调、人员协调、内容衔接、仪
4、器设备内容衔接、仪器设备和和场地场地提供提供等等诸多诸多方面都会出现方面都会出现不可预期的不可预期的问题，还望同学们予以配合和谅解！问题，还望同学们予以配合和谅解！ 2 微生物实验室安全须知微生物实验室安全须知 普通微生物学实验课程的目的是： 训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基本知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。同时，通过实验，培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力；养成实事求是、严肃认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神；树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。 为了提高教学效果，保证实验质量和实验室安全，特提出如下注意事项： 1每次实验前必须对实验内容
5、进行充分預习以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路淸楚。 2认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。 3实验室内应保持整洁，勿离声谈话和随便走动，保持室内安静。 4实验时要小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打玻、 皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时， 应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐瞒。 5实验过程中，切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰，如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火，必要时用灭火。 6使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护，对消耗材料和药品等要力
6、求节约，用毕后仍放回原处。 7每次实验完毕后，必须把所用仪器摆放妥当，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，可用 3%来苏尔液或 5%石炎酸液覆盖0.5h 后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间，凡带菌之工具（如吸管、玻璃刮棒等）在洗涤前须涂在 3%来苏尔液中进行消毒。 8每次实验需进行培养的材料，应标明自己组别及处理方法，放于教师指定的地点进行培养，实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得捎出室外。 9每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入实验报告中，力求简明准确，认真回答思考题，并按时提交实验报告供教师批阅。 10离开实验室前将手洗干净，注意关闭仪器、水电、门窗
7、和灯等。 3 微生物实验微生物实验注意事项注意事项 一、无菌操作要求 1接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用 75酒精棉球将手擦干净。 3进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿， 不能放置后再使用， 金属用具应高压灭菌或用 95%酒精点燃烧灼三次后使用。 4从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 5接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出
8、后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 6接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸 5min，再经火焰烧灼。 7吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求 1无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有 0.50.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2 无菌间内应保持清洁， 工作后用 2%3%煤酚皂溶液消毒， 擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3无菌间使用前后应将门关紧，紫外灯，距离在 1.0m 处，照射时间不
9、少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭， 除去上面灰尘和油垢， 以减少紫外线穿透的影响。 4处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。 4 三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 （一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法 1灭菌前准备 （1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 （2） 装培养基的三角瓶塞， 用纸包好，
10、 试管盖好盖， 注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 2装放 （1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。 （2）大型高压蒸汽锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。 3设备检查 （1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。 （2）检查压力表蒸汽排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。 （3）对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。 4灭菌处理 (1) 干热灭菌法：此法适应于在干热情况下，不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器
11、皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。 器械器皿应清洗后再干烤，以防附着在表面的污物炭化。 灭菌时安放物品不能过挤， 不要直接接触底和箱壁， 物品之间留有空隙。 菌时将箱门关紧，接上电源，先将排气孔打开约 30min，排除灭菌器中的冷空气，温度升至 160调节指示灯，维持 1.52h。 灭菌完毕后或温度升温过程中，须在 60以下才能打开箱门。 (2) 手提式高压锅或立式压力蒸汽灭菌器的使用应按下列步骤进行： 手提式高压锅在主体内加入 3L 清水，立式高压锅加水 16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需更换）. 手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用） 。 盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气（水沸腾
