《OPN和整合素αv、β3在子宫内膜异位症患者内膜中的表达及意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《OPN和整合素αv、β3在子宫内膜异位症患者内膜中的表达及意义（46页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与 我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名( 手写) ：季研签字日期：归；年6 月7 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘， 允许论文被查阅和借阅。本人授权直昌大堂可以将学位论
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3、内膜中骨桥蛋白( O s t e o p o n t i n ，O P N ) 和整合素Qv 、1 33 的表达。探讨其在子宫内膜异位症( e n d o m e t r i o s i s ，E M ) 不孕和发病机制中可能起到的作用。方法：利用免疫组化半定量检测内异症不孕患者和输卵管性不孕患者子宫内膜中O P N 和整合素Qv 、1 33 的表达。结果：1 0 P N 在输卵管性不孕患者、内异症性不孕患者在位内膜中的表达分泌期均高于增殖期，差异有显著性( P 0 0 5 ) 。2 分泌期O P N 的表达：输卵管性不孕患者高于内异症性不孕忠者在位内膜，差异有统计学意义( P 0 0 5 )
4、 。3 内异症性不孕患者异位内膜O P N 的表达高于其在位内膜，差异有显著性( P O 0 5 ) T h ee x p r e s s i o no fo s t e o p o n t i ni ns e c r e t o r yp h a s ei st h a tt h ep a t i e n t sw i t ht u b a li n f e r t i l i t yw e r eh i g h e rt h a nt h ep a t i e m sw i t he n d o m e t r i o s i si n f e r t i l i t y , t h ed
5、 i f f e r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( P 0 0 5 ) T h ee x p r e s s i o no fo s t e o p o n t i ni np a t i e n t sw i t he n d o m e t r i o s i si n f e r t i l i t yi st h a tt h ee c t o p i ce n d o m e t r i u mw e r eh i g h e rt h a nt h ee u t o p i ce n d o
6、 m e t r i u m ，t h ed i f f e r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( P 0 0 5 ) 。研究对象均月经规律( 2 5 3 5 天) 。性生活正常未避孕未孕1 年及1 年以上。心肺功能、肝。肾功能等正常。无传染性疾病。无手术禁忌。术前3 个月未使用激素类药物。具体分组如下：2 1 1 内异症组内异症组患者均经腹腔镜和病理检查确诊。年龄2 l 一4 0 岁，无其他内、外科疾病。筛选得在位子宫内膜组织标本3 0 份，增殖期2 1 例，分泌期9 例。异位内膜组织标本3 0 份，增殖
7、期2 1 例，分泌期9 例。I I I 期1 5 例，I I I 期1 5 例( A F S 修正子宫内膜异位症分期法) 。4第2 章材料与方法A F S 修正子宫内膜异位症分期法( 1 9 8 5 )I 期( 微型) ：1 5 分I I 期( 轻型) ：6 1 5 分I I I 期( 中型) ：1 6 4 0 分期( 重型) ： 4 0 分腹膜浅124深246卵巢右浅124薄膜1右深41 62 0致密4左浅124薄膜1左深41 62 0致密4输卵管右薄膜1 致密4左薄膜1 致密4直肠子部分封闭全部封闭宫陷凹44 0注：若输卵管全部被包裹，应为1 6 分资料米源：乐杰妇产科学一b 京：人民卫生
8、出版社，2 0 0 8 ，3 2 9 2 1 2 对照组对照组患者3 7 例，年龄2 1 3 8 岁，无其他内、外科疾病。具体纳入标准为：1 男方曾行精液检查示无异常；2 女方曾B 超监测提示卵巢有排卵；3 抽血查血清激素( 1 卵泡刺激素f o l l i c l es t i m u l a t i n gh o r m o n e ，F S H 、2 黄体生成激素l u t e i n i z i n gh o r m o n e ，L H 、3 甲状腺刺激素t h y r o i ds t i m u l a t i n gh o r m o n e ，T S H 、4 催乳素p r
9、o l a c t i n ，P R L 、5 雌二醇e s t r o d i o l ，E 2 、6 睾酮t e s t o s t e r o n e ，T 、7 绒毛膜促性腺激素h u m a nc h o f i o n i cg o n a d o t r o p i n ，H C G ) 无异常4 子宫输卵管碘油造影( h y s t e r o s a l p i n o g r a p h y ，H S G ) 示子宫无畸形仅输卵管有堵塞；5 腹腔镜检查无子宫内膜异位症病灶。筛选得子宫内膜组织标本3 0 份，病理检查显示增生期2 154 怕4 怕4怕4 M28282828第2
10、 章材料与方法例，分泌期9 例。2 2 主要仪器和试剂2 2 1 主要仪器雨露防脱载玻片( 南昌雨露实验器材有限公司)徕卡切片机( 德国徕卡R M 2 2 3 5 型轮转切片机)生物组织摊烤片机Y T - 7 F ( 湖北省孝感市亚光医用电子技术有限公司)电热恒温干燥箱( 上海跃进医疗器械厂)全自动染色机S T 5 0 2 0 ( 德国L e i c a )超纯水机A S H 4 0 0 1 一C ( 艾科浦)电冰箱B C D 一2 5 2 K ( 伊莱克斯E l e c t r o l u x )离心机T D L 8 0 - 2 B ( 飞鸽牌)G a l a n z 微波炉、美的电磁炉、不
11、锈钢压力锅、耐高温塑料染色架、孵育盒等2 2 2 主要试剂一抗：鼠抗人O P N 单克隆抗体( 编号：Z M 0 1 7 4 ，工作液；北京中杉金桥生物技术有限公司)一抗：鼠抗人整合素a V 单克隆抗体( 编号：S C 9 9 6 9 ，原液；美国S A N T AC R U ZB I O T E C H N O L O G Y 公司；稀释度为1 ：1 0 0 )一抗：鼠抗人C D 6 1 ( 整合素B 3 又名C D 6 1 ) 单克隆抗体( 编号：Z M 一0 0 5 9 ，工作液；北京中杉金桥生物技术有限公司)二抗：酶标羊抗鼠兔I g G 聚合物( 编号：K I T - 9 9 0 3
12、B ，1 l O m l 瓶，福州迈新生物技术开发有限公司，2 8 保存)内源性过氧化物阻断剂( 型号：S P K I T - A 3 ，1 1 0 m l 瓶，福州迈新生物技术开发有限公司，2 8 保存)增强剂( 编号：K I T - 9 9 0 3 一A ，1 1 0 m l 瓶，福州迈新生物技术开发有限公司，2 8 保存)D A B 底物液( 编号：Z L I 9 0 1 9 ，1 0 0 m l 瓶，北京中杉金桥生物技术有限公司)6第2 章材料与方法浓缩D A B 溶液( 编号：Z L I 一9 0 1 9 ，l O m l 瓶，北京中杉金桥生物技术有限公司，2 8 。C 保存)苏木素
13、染液( 编号：Z L I 9 6 1 0 ，5 0 0 m l 瓶，北京中杉金桥生物技术有限公司)中性树胶( 1 0 0 9 瓶，厂家：上海华申康复器材有限公司)P A PP e n 免疫组化笔( 型号：Z L I 9 3 0 5 ，北京中杉金桥生物技术有限公司)2 2 3 主要溶液及配置P B S 磷酸盐缓冲液( 型号：Z L I 9 0 6 1 ，1 0 0 0 m l 袋北京中杉金桥生物技术有限公司取一袋加入1 0 0 0 m l 蒸馏水溶解后使用，室温储存)柠檬酸盐缓冲液( 型号：Z L I 9 0 6 5 ，2 0 0 0 m l 袋北京中杉金桥生物技术有限公司取一袋加入2 0 0
14、0 m l 蒸馏水溶解后使用，室温储存)D A B 溶液( 按照D A B 底物液：浓缩D A B 溶液= l m l ：5 0 u1 比例配制，避光储存，3 0 分钟内有效)1 0 中性缓冲福尔马林固定液( 4 0 甲醛1 0 m l + 0 0 1 MP H7 4P B S 缓冲液9 0 m 1 )2 3 实验方法2 3 1 取材制片用1 0 福尔马林固定液固定，脱水，石蜡包埋，切片厚度为3 5um 。2 3 2 免疫组化染色采用免疫组化E l i V i s i o n T M 法操作流程：( 1 ) 石蜡切片脱蜡、水化。( 将切片放置于全自动染色机中)( 2 ) 将切片从全自动染色机取
15、出后用自来水冲洗并浸泡于水中待用。( 3 ) 配制柠檬酸抗原修复液。( 4 ) 用柠檬酸抗原修复液高温高压抗原修复法修复抗原。取1 2 0 0 m l 已配制的柠檬酸抗原修复液于压力锅中，将压力锅放置于电磁炉上，大功率加热至沸腾。将功率调至8 0 0 w ，将切片置于耐高温染色架上，放入己沸腾的修复液中，盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热。当压力阀开始喷气时7第2 章材料与方法计时2 m i n ，然后关闭电磁炉，拿掉压力阀排气。当压力阀不再排气时将压力锅端离电磁炉。在压力锅外壁冲淋自来水加速锅内修复液冷却。冷却至室温后取出切片，用自来水冲洗干净。除去自来水，在离组织3 m m 处用免疫组化笔画圈
16、。( 1 ) 配制P B S 缓冲液。( 2 ) 用P B S 缓冲液冲洗切片。( 3 )切片上滴加过氧化酶阻断剂5 0ul ，室温下孵育1 0 m i n 。P B S 冲洗3 3 m i n 。将一抗用离心机离心备用。( 4 )除去P B S ，切片上滴加第一抗体5 0ul ，室温下孵育l h 。P B S 冲洗33 m i n 。( 5 )( 6 )( 7 )( 8 )( 9 )( 1 0 )除去P B S ，切片上滴加增强剂5 0ul ，室温下孵育2 0 m i n 。P B S 冲洗3X 3 m i n 。除去P B S ，切片上滴加第二抗体5 0ul 。室温下孵育3 0 m i n 。P B S 冲洗3 x 3 m i n 。配制D A B 显色液。除去P B S ，切片上滴加新鲜配制的D A B 显色液5 0u1 。O P N 组显色2 5 m i n ，I n t e g r i
