《【分析化学课件】高效液相色谱-nbg（可编辑）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《【分析化学课件】高效液相色谱-nbg（可编辑）（92页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 第十七章高效液相色谱 第十七章高效液相色谱 第十七章高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography HPLC High Pressure Liquid Chromatography HPLC 第十七章 高效液相色谱 第十七章 高效液相色谱 第十七章 高效液相色谱 一 概述 一 概述 二 液相色谱仪 二 液相色谱仪 三 HPLC 检测器 三 HPLC 检测器 四 各种色谱方法 四 各种色谱方法 五 HPLC 分离利用 五 HPLC 分离利用 六 超临界流体色谱 六 超临界流体色谱 七 毛细管电泳 七 毛细管电泳 一概述 一概述 一概述 1 分配色谱
2、2 吸附或液固色谱 3 离子色谱 4 凝胶色谱或尺寸排阻色谱 经典 LC 与 HPLC 比较 经典 LC 与 HPLC 比较 HPLC 应用概图 HPLC 应用概图 经典 LC 与 HPLC 比较 经典 LC 与 HPLC 比较 经典 LC 与 HPLC 比较 经典 LC HPLC 经典 LC HPLC 柱之内径 15cm 04cm 柱之内径 15cm 04cm 长度 50100cm 1550cm 长度 50100cm 1550cm 填充材料粒度 150m200m 4m10m 填充材料粒度 150m200m 4m10m 使用压力 110atm 50200atm 使用压力 110atm 5020
3、0atm 分离时间 05h 天 10min 分离时间 05h 天 10min HPLC 应用概图 HPLC 应用概图 HPLC 应用概图 HPLC 使用 HPLC 使用 的模式大约 的模式大约 可由此图看 可由此图看 出 出 极性 极性 水不溶性 水不溶性 水不溶性 水不溶性 非极性物质 离子 非极性物质 离子 极性非离子型 极性非离子型 分配 分配 反相分 反相分 正相分 吸附 正相分 离子交换 吸附 离子交换 配色谱 配色谱 配色谱 配色谱 凝胶渗透 排阻 凝胶过滤 凝胶渗透 排阻 凝胶过滤 二液相色谱仪 二液相色谱仪 二液相色谱仪 流动液贮存提供脱气 输液泵 进样系统 分离系统 检测系统
4、 控制与记录系统 LC 系统 LC 系统 LC 系统 LC 系统 1 流动相贮存与脱气 1 流动相贮存与脱气 1 流动相贮存与脱气 脱气方法 脱气方法 1 真空泵抽滤系统 1 真空泵抽滤系统 2 低溶性惰性气体导入替换 2 低溶性惰性气体导入替换 3 超声脱气 3 超声脱气 2 输液系统 2 输液系统 2 输液系统 活塞泵 注射泵 气动泵 活塞泵 活塞泵 活塞泵 优点 缺点 优点 缺点 易如自动控制长时间不 输出为脉冲时 易如自动控制长时间不 输出为脉冲时 间断运转 需要简化装置 间断运转 需要简化装置 内体积小 3540L 内体积小 3540L 否则噪音增大 否则噪音增大 高输出压 高输出压
5、 流速与柱压力几乎无关 流速与柱压力几乎无关 活塞泵工作原理 活塞泵工作原理 活塞泵工作原理 活塞泵工作原理 注射泵 注射泵 气动泵 气动泵 气动泵 压强定律 压强定律 P A P A 1 1 2 2 3 进样系统 3 进样系统 不使整个压力变化的情况下将样品 不使整个压力变化的情况下将样品 注入色谱柱通常使用所谓六通阀 注入色谱柱通常使用所谓六通阀 样品环 样品环 样品环 样品环 自动进样装置 Tower Tray Bar code Turret reader Americas Technical Center 各种色谱柱 三 HPLC 检测器 三 HPLC 检测器 三 HPLC 检测器 与
6、 GC 的检测器一样可以分为两大类 与 GC 的检测器一样可以分为两大类 溶液折光介电常数密度 溶液折光介电常数密度 溶质吸光光度荧光光度扩散电流等 溶质吸光光度荧光光度扩散电流等 1 吸光检测器 1 吸光检测器 2 红外检测器 2 红外检测器 3 荧光检测器 3 荧光检测器 4 折光检测器 4 折光检测器 5 电化学检测器 5 电化学检测器 6 质谱检测器 6 质谱检测器 1 吸光检测器 1 吸光检测器 1 吸光检测器 单波长 UV 检测器光源用 Hg 灯 加滤光片可以到 254 280 313 334365 等生化中用到很多 多波长 光度计类似光栅或棱镜 分光 PMTPD 单波长检测 PD
7、A 多波长同时检测三维 典型光路 典型光路 Tungsten lamp Coupling Deuterium lamp lens Source lens Achromat Support lens Array Holmium Spectro oxide lens filter Flow cell Programmable Slit Grating Diode Array - Details LIGHT PHOTODIODE CAPACITOR SHIFT Time REGISTER msec Wavelength nm TRANSISTOR SWITCH VIDEO LINE READOUT
8、CYCLE 90 MeOH coelute 05 mLsmin 2 红外检测器 2 红外检测器 2 红外检测器 可同时定性分析 可同时定性分析 但红外灵敏度有限一般在中红外 但红外灵敏度有限一般在中红外 -1 690-4000cm-1 主要问题是窗口材 690-4000cm 主要问题是窗口材 料为 NaCl 或 CaF 对流动相限制较多 料为 NaCl 或 CaF 对流动相限制较多 3 荧光检测器 3 荧光检测器 3 荧光检测器 灵敏度比吸光好选择性亦较 灵敏度比吸光好选择性亦较 好光源可以使高强度汞灯或 好光源可以使高强度汞灯或 氘灯但并不是所有物质都有 氘灯但并不是所有物质都有 荧光可通过
9、柱前或柱后衍生 荧光可通过柱前或柱后衍生 法来检测 法来检测 荧光检测器-原理 荧光检测器-原理 Luminescence - a photon is absorbed by the molecule followed by subsequent re-emission of a photon Fluorescence - a photon is S 2 Internal absorbed Conversion by the molecule vibrational relaxation occurs and the molecule IX emits radiation S1 T T of lower energy than that 2 T absorbed m m e Phosphorescence - n n c 0 0 n 0 5 e T1 through intersystem 2 2 c e s c e n crossing the molecule r o e u c shifts to its triplet s l e F r state and then back to the o h ground state p s o via photon emission The h P lifet
