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1、 北京韦氏博慧色谱科技有限公司 北京经济技术开发区中和街 14 号 B 座 411 室 邮政编码： 100176 TEL： 010-67804548 或 51029828 13911415318 FAX： 010-51029829 重组蛋白 A 琼脂糖凝胶 FF 重组蛋白 A 琼脂糖凝胶 FF 一、 简介一、 简介 蛋白 A 能特异与抗体的 Fc 区结合，所以将进口最好的重组蛋白 A 偶联到琼脂糖凝胶6B 得到的亲和色谱填料，可从腹水、培养液及血清等样品中一步纯化出高纯度的抗体。 重组蛋白 A 和天然的蛋白 A 相比有更好的稳定性和更高的结合能力。 此外由于采用了新的活化方法，填料的稳定性好，
2、没有非特异吸附，基团脱落少，寿命长，流速更快。可以完全代替进口产品。 二、 亲和填料特性：二、 亲和填料特性： 特点 基团脱落少，结合特异性强，载量高，寿命长 基质 6%的交联琼脂糖凝胶 配基 进口重组蛋白 A 配基密度 6mg 重组蛋白 A/ml 吸附载量 30mg 人 IgG/ml 亲和填料的颗粒大小 45-165m 最大流速 300cm/h pH 范围 3-10，在位清洗时 pH 范围可到 2-11 使用温度 常温 保存温度 +48 保存液体 20%乙醇 三、 适用范围三、 适用范围 抗体的种类抗体的种类 抗体与蛋白抗体与蛋白 A 结合的强弱程度结合的强弱程度 人 抗体IgG1， IgG
3、2+ 人 抗体IgG3， IgG4+ 牛抗体 + 狗抗体 + 猪抗体 + 猴抗体 + 小鼠IgG1 + 小鼠IgG2a+ 小鼠IgG2b+ 小鼠IgG3+ 马抗体 + 兔抗体 + 北京韦氏博慧色谱科技有限公司 北京经济技术开发区中和街 14 号 B 座 411 室 邮政编码： 100176 TEL： 010-67804548 或 51029828 13911415318 FAX： 010-51029829 大鼠IgG3+ 山羊抗体 + +号的多少表示该类抗体与蛋白 A 结合的强弱程度。 分离纯化部分常用抗体使用的缓冲液条件： 抗体的种类抗体的种类 与蛋白与蛋白 A 结合的强弱结合的强弱 吸附缓
4、冲液吸附缓冲液 pH 值值洗脱缓冲液洗脱缓冲液 pH 值值人IgG1+ 6.0-7.0 3.5-4.5 人IgG2+ 6.0-70 3.5-4.5 人IgG3+ 8.0-9.0 7.0 人IgG4+ 7.0-8.0 3.0-6.0 小鼠IgG1+ 8.0-9.0 4.5-6.0 小鼠IgG2a+ 7.0-8.0 3.5-5.5 小鼠IgG2b+ 7.0 3.0-4.0 大鼠IgG3+ 7.0 3.5-5.5 如果待分离纯化的抗体与亲和填料间的吸附力比较弱，则可适当提高吸附缓冲液的 pH值和盐浓度，即可获得较好的分离效果。 四、 应用实例四、 应用实例 实验名称：实验名称：从小鼠腹水中分离纯化I
5、gG2b实验步骤：实验步骤： 1、 重组蛋白 A 琼脂糖凝胶 FF 装柱，1.620cm，柱床体积为 10ml； 2、 用缓冲液缓冲液 A 平衡 5-10 个床体积，流速为 1ml/min； 3、 将 5ml 小鼠腹水用缓冲液缓冲液 A 稀释到 50ml， 0.45m 滤膜过滤上样。 流速为 1ml/min； 4、 用缓冲液缓冲液 A 再洗 5-10 个床体积，流速为 1ml/min； 5、 用缓冲液缓冲液 B 洗脱，流速为 1ml/min，收集洗脱峰 6、 用纯水流洗 10 个柱床体积，再用 20%的乙醇流洗 10 个柱床体积，流速为 2ml/min，柱子置于+48环境中保存 7、 将分离纯
6、化的IgG2b与进口的柱子纯化的样品进行SDS-PAGE电泳分析。 备注：备注：柱子每使用几次后应该用以缓冲液缓冲液 C 流洗 3 个柱床体积，以便将吸附更牢的蛋白去除，然后再用纯水流洗 10 个柱床体积，再用 20%的乙醇流洗 10 个柱床体积，流速为 2ml/min，柱子置于+48环境中保存。 缓冲液组成：缓冲液组成： 缓冲液缓冲液A： 20 mM磷酸盐缓冲液， pH7.4， 即pH7.4 的PBS溶液。 配制： 0.2 M NaH2PO4 19ml，0.2 M Na2HPO4 81ml，NaCl 9g加水至 1000ml。 缓冲液缓冲液 B：100mM 柠檬酸缓冲液，pH4.0。配制：柠
7、檬酸 21g 加水 950ml，用 5M NaOH调至 pH 4.0，加水至 1000ml。 缓冲液缓冲液 C：0.5M 醋酸缓冲液，pH3.0。配制：0.5M 醋酸溶液用固体 NaOH 调至 pH 3.0。 缓冲液缓冲液 D：1M Tris-HCl 缓冲液，pH9.0。配制：Tris 盐 121.14g，加水至 950ml，浓盐酸调 pH 至 9.0，加水至 1000ml。 结果：结果： 分离纯化色谱图见图 1； SDS-PAGE电泳分析结果见图 2， 结果比较了本公司生产的亲和填料与进口蛋白A亲和填料纯化抗体的效果：泳道 1 为标准蛋白Marker，泳道 2 为腹水，泳道 3 为本公司生产
8、的亲和填料所装的柱子的洗脱峰，泳道 4 为进口蛋白A亲和柱子在同样条下的洗脱峰。泳道 3、4 中，上、下两条带分别是IgG2b的重链和轻链。试验结果表明了本公司生产的亲和填料与进口亲和填料的分离效果完全一致， 载量也相当， 都可以一步得到纯度大于 95的IgG2b。 01302603905206500306090120volume(ml)A280(mAu)图图 1 重组蛋白重组蛋白A琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶 FF亲和色谱分离腹水中的亲和色谱分离腹水中的IgG2b 重链重链 轻链轻链 北京韦氏博慧色谱科技有限公司 北京经济技术开发区中和街 14 号 B 座 411 室 邮政编码： 100176 TE
9、L： 010-67804548 或 51029828 13911415318 FAX： 010-51029829 图图2 SDS-PAGE电泳结果电泳结果 1：marker， 2：腹水， 3：IgG2b， 4：IgG2b 图 3 为在相同条件下应用本公司产品分离小鼠腹水中的IgG1的分离纯化色谱图， 电泳结果见图 4。由于IgG1与蛋白A的结合力较弱，因此应适当提高缓冲液A的pH值和盐浓度（pH 8.4 ，NaCl终浓度 3mol/L） 。上样样品：3ml腹水。 用该缓冲液稀释到 120ml；洗脱溶液的条件不变。可一步从腹水中纯化IgG1。 09018027036045054005010015
10、0200time(min)A280(mAu)图图 3 重组蛋白A琼脂糖凝胶 6B FF亲和色谱分离腹水中的重组蛋白A琼脂糖凝胶 6B FF亲和色谱分离腹水中的IgG1 图图4 SDS-PAGE电泳结果电泳结果 1：腹水， 2：穿透样品， 3：洗脱IgG1 图 5 为在相同条件下应用本公司产品分离人血浆中的IgG的色谱图，电泳结果见图6。色谱条件和IgG2b的条件完全相同，只是样品为 20ml人血浆用缓冲液A稀释到 90ml。 北京韦氏博慧色谱科技有限公司 北京经济技术开发区中和街 14 号 B 座 411 室 邮政编码： 100176 TEL： 010-67804548 或 51029828
11、13911415318 FAX： 010-51029829 060012001800240004080120 volume(ml)A280(mAu)160图图 5 重组蛋白重组蛋白A琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶 FF亲和色谱分离人血浆中的亲和色谱分离人血浆中的IgG图图 5. SDS 电泳图电泳图 1 上样血浆，2. 穿透, 3. 洗脱抗体. 提高缓冲液 A 的 pH 值和盐浓度可以高抗体的上样吸附载量。 五、 亲和填料应用的注意事项：五、 亲和填料应用的注意事项： 1、 该凝胶从冷室或冰箱中取出后最好在室温下缓慢振摇恢复到室温， 然后再装柱， 以免产生气泡影响柱效； 2、 柱子用低 pH 缓冲液洗脱
12、时间应短，然后用纯水尽快洗到 pH 中性，可延长亲和填料的使用寿命。 3、 洗脱后，应立刻用碱性缓冲液（如缓冲液 D 或固体 Tris 盐）将收集到的抗体溶液中和到中性（pH7.0 左右） ，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。 4、 通常使用后该亲和填料应用 0.5M 醋酸缓冲液（pH3.0）做再生处理，然而长期采用极端的洗脱条件将使亲和填料的寿命缩短。本公司生产的重组蛋白 A 琼脂糖凝胶 FF 亲和填料杂吸附较少，故可相应减少再生处理的频率，一般每使用 5 次再生 1 次即可。 北京韦氏博慧色谱科技有限公司 北京经济技术开发区中和街 14 号 B 座 411 室 邮政编码： 10017
13、6 TEL： 010-67804548 或 51029828 13911415318 FAX： 010-51029829 北京韦氏博慧色谱科技有限公司 北京经济技术开发区中和街 14 号 B 座 411 室 邮政编码： 100176 TEL： 010-67804548 或 51029828 13911415318 FAX： 010-51029829 5、 重组蛋白 A 琼脂糖凝胶 FF 亲和填料的其它再生处理方法：亲和填料和柱子使用 10 次后最好先用 20%乙醇洗 5 个柱床体积，然后再用 70%乙醇洗脱 5-10 个柱床体积，可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质， 避免使亲和填料的载量下降、 干
14、扰亲和填料的应用效果。 6、 该亲和填料保存条件为 20%乙醇，+48。 本产品有严格的生产质量控制标准， 我们力求为您提供最满意的产品、 技术支持和服务。 除了为您提供各种包装规格的重组蛋白重组蛋白 A 琼脂糖凝胶 FF 亲和填料琼脂糖凝胶 FF 亲和填料外，我们还提供其它产品和服务，包括： 1、填料和柱子选择以及预实验 2、开发各种生物大分子的分离纯化工艺，为您解决分离纯化的难题 3、帮助您合成特殊要求的色谱填料，包括偶联各种配基 4、按客户要求提供各种填料及规格的预装柱，并配相应接口用于各种纯化设备。 5、代理各种进口填料，为客户提供最专业的售前和售后服务。 产品目录：产品目录： 货号
15、产品名称 包装 载量 mg/ml 特性 及应用 平均粒径 (m) 耐压 MPa 最大流速 (cm/h) CS-A02-00 重组蛋白A琼脂糖凝胶 FF 1ml 预装柱30mg IgG各种抗体的纯化， 包 括Fc片段的纯化。90 0.3 4ml/min CS-A02-0A 重组蛋白A琼脂糖凝胶 FF 5ml 预装柱30mg IgG各种抗体的纯化， 包 括Fc片段的纯化。90 0.3 15ml/min CS-A02-0B 重组蛋白A琼脂糖凝胶 FF 10ml 预装柱30mg IgG各种抗体的纯化， 包 括Fc片段的纯化。90 0.3 15ml/min CS-A02-01 重组蛋白A琼脂糖凝胶 FF
16、 5ml 30mg IgG各种抗体的纯化， 包 括Fc片段的纯化。90 0.3 300 CS-A02-02 重组蛋白A琼脂糖凝胶 FF 10ml 30mg IgG各种抗体的纯化， 包 括Fc片段的纯化。90 0.3 300 CS-A02-03 重组蛋白A琼脂糖凝胶 FF 25ml 30mg IgG各种抗体的纯化， 包 括Fc片段的纯化。90 0.3 300 CS-A02-04 重组蛋白A琼脂糖凝胶 FF 大包装 30mg IgG各种抗体的纯化， 包 括Fc片段的纯化。90 0.3 300 北京韦氏博慧色谱科技有限公司北京韦氏博慧色谱科技有限公司 电话：电话： 010-67804548 或或 51029828 13911415318： 联系人： 联系人:韦新桂韦新桂
