水稻ERECTA家族基因表达和功能初步分析

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1、关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文,是在导师指导下,独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体,均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定,同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文,同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库,并向社会公众提供信息服务。保密论文在解密后应遵守

2、此规定。论文作者签名:趣因地导师签名:平定军拿日期:塑! 三型2符号说明A m p :A m p i c m 她氨苄青霉素A P :缸衄1 0 n i 衄p e f s 岫) h t e ,过硫酸铵A 叱A 咧a m i d c ,丙烯酰胺B p :B 撇p 啦碱基对B i s :B i S a C 巧l 锄i d e ,甲叉双丙烯酰胺C a r b :C a f b e n i c i U 缸羧苄青霉素d m 2 0 :D i 湖e da n dd e i o 血乙e d 嗽重蒸水D E P C :D i e 也y lp y r 0 C a 献) 肋钯,焦碳酸二乙酯D N A :D x 如b

3、 o 曲d e i c 迅脱氧核糖核酸E c o l i :E s C h 砸c h i ac o l i ,大肠杆菌 H y g :m y C i n ,潮霉素口T G :I s o p r o p y l 也i 0 _ p D 鸣a l a c t o s i d e ,异丙基一p D 一硫代半乳糖苷 勋n :勋眦y C i n ,卡那霉素L B :h l r i a - b e r t a n im e d i u m ,L B 培养基 O s :岫砌,水稻P C R :P o l y m 聪睇c h a i n 他a 撕o n ,聚合酶链式反应时叮A :R i b 0 删c l e i

4、 Ca c i 也核糖核酸 呷:删0 n p e r 蛐,转分钟R 1 - P C R :R e 麟e 缸a n S 面皿龄1 p o b ,I n e r :醛ec h a i nr e a 曲。玛逆转录酶一多聚酶链式反应S D S :S o d i 唧d o d e c y l 吼施:t e ,十二烷基硫酸钠 T E m :t 咖m 劬y l e d l y l 耐卸血e ,四甲基乙二胺W T W d 姊e ,野生型目录中文摘要1英文摘要31 前言51 1 植物R L 结构和分类51 2 植物蛋白激酶在植物生长发育中的功能71 2 1 参与植物的逆境应激反应71 2 2 参与植物生长发育的

5、调控81 2 3 参与激素信号转导8 1 3 麟基因的研究进展_ 9 1 3 1 剧删基因的拟南芥包括花、叶片在内的地上器官发育中的作用9 1 3 2 剧蚴基因调节拟南芥的蒸腾效率和光合作用1 11 3 3 剧己叱! 尉基因在拟南芥激素和光信号途径中的作用1 1 1 3 4 麟尉基因影响拟南芥的抗病性1 21 3 5 剧己蚴基因在拟南芥中表达的特点1 2 1 3 6 麟尉基因在其它植物中的相关研究进展1 31 3 7 剧己比Z 重基因在植物气孔发育中作用1 32 材料和方法14 2 1 麟尉基因的生物信息学分析1 42 1 1 试验方法1 4 2 2 剧蚴基因的表达模式分析152 2 1 供试

6、材料152 2 2 实验材料的培养及处理1 62 2 3 水稻叶片总对叮A 的提取及D N A 的去除1 62 2 4 砒呵A 浓度和质量检测172 2 5 反转录j 1 72 2 6 赆P C R 操作方法172 2 7R e a l m m eP C R 操作方法19T2 3 麟勿基因的功能分析一2 02 3 1E 魁2 基因功能缺失突变体的筛选2 02 3 2 水稻E 碰J 基因植物表达载体的构建和水稻遗传转化2 l2 3 3 转基因植株的鉴定2 42 3 4E 魁J 转基因水稻抗旱性鉴定2 42 4E R 蛋白激酶活性的分析2 42 4 1M B P E R 融合蛋白的获得2 42 4

7、 2M B P E R 融合蛋白磷酸化分析2 53 结果与分析2 6 3 1 水稻麟拗家族基因有三个成员2 63 2 剧己珊家族基因表达模式分析一2 73 2 1p b 呻l 介导的红光信号抑制麟刚家族基因的表达,并且这种抑制作用发生在光处理的后期:2 7 3 2 2 调控刷删家族表达的光敏色素介导的光信号通路存在交叉又各自不同2 83 2 3 别咂C 翻基因的表达受光周期调控31 3 2 4 删财家族基因表达的组织特异性分析一3 23 3 内含子的存在是E 魁J 基因表达所必需的3 33 4 剧己臣C 盟家族基因的功能分析3 43 4 1E 魁J 基因植物超表达载体的构建3 43 4 2 仇

8、蚶_ 江J 过表达转基因水稻株系的遗传分析3 5 3 4 3 仍脚J 转基因水稻植株抗旱性鉴定3 63 4 4 仍碰弛旺J 基因过表达导致水稻种子长度变大进而影响种子千粒重3 73 4 5P ,您突变体遗传分析一3 83 4 6g ,陀突变体雄蕊花药长度和结实率显著降低一3 93 5E R 蛋白激酶活性的生化分析4 14 讨谢。4 2 4 1 水稻麟劢基因家族有三个成员4 2 4 2 水稻麟玖家族基因的表达4 34 2 1p h y B 负调控水稻麟劢家族基因的表达4 34 2 2E 魁J 7 的表达需要内含子的存在4 3T T4 3 水稻麟尉家族基因的功能4 44 3 1E 魁J 基因过量表

9、达可以增强水稻植株的抗旱能力和提高种子长度4 44 3 2P r 眩突变体花药生长受到影响4 54 4 水稻点i 尬C 基因编码丝氨酸苏氨酸蛋白激酶4 55 结论。4 6参考文献4 7致谢5 4攻读学位期间发表论文情况5 4m山东农业大学硕士学位论文摘要拟南芥麟殂基因家族包括么屯欧,彳t E R ,E J ( 么也魁J ) 和么堀肛2 三个成员,编码一种植物跨膜信号受体的亚族,在拟南芥的多种组织中广泛表达。已有多篇报道证明:五淑家族基因通过协同作用协调细胞分裂和细胞增殖从而调节包括叶片、雌雄蕊和气孔在内的气生器官的产生和形态建成;参与多种生理过程如二磷酸核酮糖羧化酶 ( R u b i s C

10、 0 ) 羧化率( C 砌姗酣撕0 n 跳e ) 、电子传递能力( E 1 。C 缸o n 仃a 州c 印雒时) 、植株的水分利用效率和蒸腾作用;参与植株对干旱和细菌感染等生物和非生物胁迫的响 应。这些都证明了剧蚴基因在促进植物正常生长和发育中起到重要作用。然而 麟尉基因在水稻生长发育中的作用还未见报道,根据拟南芥五R 基因的氨基酸序列, 本研究在水稻基因组中预测到三个水稻麟基因家族成员,在本研究中,本研究进一步分析了剧鬯E C 基因在水稻中的表达模式和特征,并初步分析了其在水稻生长发育中的作用,为深入分析翩乙叱Z 重基因对水稻生长发育的调控作用及调控机制奠定了基础。主要研究结果如下: 1 麟

11、基因在水稻中的表达模式 ( 1 ) 利用生物信息学方法发现水稻中的剧删基因家族成员有三个,分别为:点琢篮I :珊( 戤) ( O s 0 6 9 0 2 0 3 8 0 0 ) ,点黛坐I :? Z 4 一乙砸,( E E R J ) ( J N 9 9 1 0 0 5 ) 和点:魁2 ( O s 0 6 9 0 1 3 0 1 0 0 ) 。利用荧光定量P C R 对麟尉家族基因在根、茎、叶、旗叶和幼穗等器官中的表达水平进行分析,发现E 尬C 刚家族基因在根中几乎检测不到,在成熟的地上器官如叶片、茎、旗叶中表达水平较低,在分生组织或者生殖器官如幼穗中表达水平较高。 ( 2 ) 利用荧光定量P C R 分析麟拗家族基因在红光和黑暗条件下生长的野生型水稻和p 而多毋突变体水稻中的表达水平。结果发现,在红光条件下生长的野生型水稻中 的E 尬C

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