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1、食品与药品 Food and Drug 2010年第12卷第03期 147知识介绍一种改进的糖醛酸咔唑反应Bitter T, Muir H M 糖醛酸咔唑反应1,2是测定色谱级分中糖醛酸的最好方法。但此方法至少需要2 h才能使生成的颜色相对稳定，且某些化合物反应的颜色部分易被盐抑制3-5。生成的颜色不稳定，对过热或水的稀释敏感6，且易受试剂或样品中杂质的干扰7-9。Gregory10建立的测定氨基己糖的方法得到的结论与Aminoff等11相同，即硼酸根离子能使己糖的地衣酚-硫酸反应立刻显色12，同样能增加糖醛酸-咔唑反应的颜色。本文改进的硼酸盐浓硫酸法反应快速、定量，有以下优点：（1）比Gre
2、gory报道的方法更灵敏；（2）立即显色；（3）颜色稳定性明显增加；（4）重现性好；（5）减少氯化物和氧化剂干扰。此方法已有初步报道13。1 试剂（1）0.025 mol/L十水合四硼酸钠（分析纯）的硫酸（比重1.84，分析纯）溶液；（2）0.125 %咔唑无水乙醇或甲醇溶液（分析纯），4 避光可保存12周；（3）葡糖醛酸内酯标准溶液 440 g/mL，用苯甲酸饱和水溶液配制溶液，储藏备用，使用时用苯甲酸饱和的蒸馏水或去离子水稀释即可。4 可保存6个月。2 步骤将硫酸试剂5 mL加入试管，在试管架上冷却至4 ，将样品1 mL或标准溶液1 mL小心加入酸液层上方，用毛玻璃或聚四氟乙烯塞密封试管，
3、先轻轻摇动试管架，后剧烈晃动，此过程中要一直保持冷却，混合物温度不能超过室温。如不遵守此注意事项，界面温度可升至135 。 试管在沸水浴中加热10 min，冷却至室温（为求准确，建议先将试管冷却至70 ，加入样品后，振动时再升至室温）。加入咔唑试剂0.2 mL，振动混匀，沸水浴加热15 min后冷却至室温。测定530 nm处的吸光度（A），空白管与硫酸A之差应小于0.025。测定色谱级分时，为节约样品和试剂，建议比例为样品0.5 mL，硫酸试剂3.0 mL，咔唑试剂0.1 mL。3 结果和讨论颜色至少可稳定16 h。除肝素外，葡糖醛酸内酯和大多数结缔组织杂多糖反应灵敏度约是Dische原始方法
4、的2倍。Dische方法中，硫酸皮肤素（硫酸软骨素B）由艾杜糖醛酸产生的颜色较浅，是4-、6-硫酸软骨素的41 %14。改进方法颜色产量可增至4-硫酸软骨素的83 %，见表1。1 g/mL糖醛酸溶液可产生一定的颜色，但4 g/mL以下重现性差。糖醛酸浓度440 g/mL时，A与糖醛酸浓度之间有线性关系。用葡糖醛酸内酯（ +19.4），终溶液中所有反应物在530 nm处的吸收系数为： =1 1603 %。如将酸试剂加入样品，与上述操作未发现差别。硼酸离子浓度可在0.0250.1 mol/L，咔唑浓度可在0.125 %0.5 %之间。戊糖和色氨酸浓度高达100 g/mL时，也不会产生颜色，但用0.
5、125 %咔唑、60 g/mL葡萄糖可产生相当于 8 g/mL 糖醛酸A。当被测样品为聚合物时，需将酸液加热10 min后再加入咔唑，经过以上处理或与咔唑同时加热25 min，葡糖醛酸内酯29 Heuer D, Lipinski A R, Machuy N, et al. Chlamydia causes fragmentation of the Golgi compartment to ensure reproductionJ. Nature, 2009, 457(7230): 731-735. 30 Ma S M, Li J W-H, Chio J W, et al. Complete r
6、econstitution of a highly reducing iterative polyketide synthaseJ. Science, 2009, 326(5952): 589-592.31 张汶婕，何晓冬，蒋企洲，等. 低分子质量蚯蚓纤溶酶的获得及其活性研究J. 药物生物技术，2009，16（6）：550-553.23 D1% 1cmE148 食品与药品 Food and Drug 2010年第12卷第03期有相近的颜色产量。色谱样品中的灰尘或水中氯的化合物等污染物在氧化剂作用下产生绿色。亚硝酸盐（5 mol/L）或过氧化氢（0.01 mol/L）产生的绿色在530 nm处A
7、为0.030。Dische测定方法中，相同浓度产生的颜色在530 nm处A达0.15。污染物在920 nm处A与530 nm的基本相等，可以用530 nm处A扣除920 nm处A以消除氧化剂的干扰，见图1。与Dische方法相比，改进方法也可减少试剂中污染物的干扰。Dische测定方法中，当氯化钾、氯化钠和氯化铵的浓度高于0.4 mol/L时，可使肝素及其衍生物产生的颜色降低33 %。改进方法只降低肝素本身产生的颜色。碳酸钠、碳酸钾、醋酸盐及磷酸盐对反应无影响。因此，可以将0.4 mol/L以上的氯离子加入到300 g多糖中，对比两种操作产生的颜色差异，以辨别肝素、肝素衍生物和其它结缔组织多糖
8、醛酸（见表2）。4 小结用硼酸盐改进Dische糖醛酸咔唑反应，有以下优点：（1）灵敏度约增加至2倍；糖醛酸浓度440 g/mL时，A与糖醛酸浓度之间存在线性关系；（2）最深颜色立刻显现；（3）颜色至少可稳定16 h；（4）重现性好，降低了氯离子和氧化剂的干扰。通过对比氯离子对两种方法颜色生成的影响，可以辨别肝素、肝素衍生物及其它结缔组织多糖醛。参考文献1 Dische Z. Characteristic color reactions of lactic acid, methylglyoxal and carbohydrates with carbazole and sulfuric aci
9、dJ. Biochem Z, 1927, 189: 77-80.2 Dische Z. A new specific color reaction of hexuronic acidsJ. J Biol Chem, 1947, 167:189-198.3 Ringertz N R, Reichard P. Chromatography on ECTEOLA of sulfate containing mucopolysaccharidesJ. Acta Chem Scand, 1960, 14:303-311.4 Schiller S. Mucopolysaccharides of the e
10、strogen-stimulated chick oviductJ. Biochim Biophys Acta, 1959, 32:315-319.5 Buddecke E Z. Investigations on the chemistry of arterial walls. V. Formation and chemical composition of mucopolysaccharides 图 1表2 盐对咔唑反应颜色的抑制多糖Dische/%Borate/%4-硫酸软骨素无无6-硫酸软骨素无无硫酸皮肤素无无透明质酸无无硫酸乙酰肝素33 无Aortic硫酸乙酰肝素33 无肝素33 3
11、3 多糖醛酸总量(g/mL)A(Diache)A(Borate)A(Borate)/A(Dische)透明质酸（L. Light公司）1000.2740.5542.024-硫酸软骨素1000.2370.4762.04硫酸皮肤素1000.1060.3843.65硫酸乙酰肝素1000.3520.6141.74Aortic 硫酸乙酰肝素151000.3700.6121.65 肝素（Hoffmann-La Roche）1000.3350.5331.59果胶500.3160.6322.00藻酸盐（L. Light公司）1000.1780.8694.88表1 颜色产量对比食品与药品 Food and Dr
12、ug 2010年第12卷第03期 149药品是预防、诊断和治疗疾病的特殊商品。医院门诊药房窗口是体现医院整体服务水平的重要岗位。提高药品调剂工作质量，最大限度地减少发药差错，是确保患者用药安全有效的重要环节。本文总结分析了20052008年北京同仁医院在门诊处方调配过程中出现的差错及其成因，提出防范措施。1 门诊药房的调剂差错问题2005年至2008年药房调剂差错记录本记录在案的差错68例，其中因药品名称相似而错发23例，占34 %；因计价错误引发的差错14例，占21 %；药品数量差错9例，占13 %；同一药品不同规格、不同剂型错发各6例，各占9 %；药品包装相似5例，占7 %；医师处方书写错
13、误3例，占4 %；用法错误2例，占3 %。2 调剂差错的原因2.1 药师因素2.1.1 工作态度 药师没有严格执行操作规程及配方制度，是产生差错的首要原因。例如：当药品含量改变门诊处方调配差错原因分析与防范措施杨 静，李 荔，赵长凤（首都医科大学附属北京同仁医院药剂科， 北京 100730）时，药师仍按习惯为患者书写用法，造成用量差错；药品摆放位置改变，药师疏于核对而造成错误；药师在配方时对简单处方放松警惕，没有看全药品的通用名称就调配，如将妥布霉素地塞米松滴眼液发成妥布霉素滴眼液或将眼膏发成滴眼液；发药时未呼唤患者姓名，张冠李戴，造成差错。2.1.2 业务水平 药师对新药用法用量不甚了解，将
14、降压药氯沙坦钾的用法50 mg sid（一日1次）写成150 mg sid，造成患者血压剧降的医疗事故；药品管理不科学，易混淆药品的位置相近引发差错：如将复合维生素B片发成维生素B2片，硼酸滴耳剂发成苯酚滴耳剂等。2.2 医师因素医师处方的药物名称、剂量规格、剂型、用法用量、给药途径、给药次数书写不规范，造成药师发药错误。如将“小檗碱”错写成“小檗胺”；“氯丙嗪” 误写成“异丙嗪”；地高辛0.25 mg错写成0.25 g；收稿日期：2009-10-29作者简介：杨静（1972-），女，北京人，主管药师，医院药学专业 E-mail: of the human aortaJ. Physiol Ch
15、em (Hoppe Seylers), 1960, 318:33-55.6 Dische Z. New color reactions for determination of sugars in polysaccharidesM. New York, Interscience Publishers, Methods of Biochem Anal, 1955, 2: 313.7 Gurin S, Hood D B. The identification and estimation of hexom in poly- saccharides and glycoproteins by the carbazole methodJ. J Biol Chem, 1939, 131:211-223.8 Seibert F B, Atna J. J Biol Chem, 1946, 163:5119 Holzmann G , McAllister R V, Niemann G . J Biol Chem, 1947, 171:27.10 Gregory J D. The effect of borate on the carbazole reactionJ. Arch Biochem Biophys, 1960, 89
