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1、微生物实验步骤微生物实验步骤实验一显微镜的使用，微型动物的计数，微生物形态观察一、实验目的熟悉光学显微镜基本结构和用途；掌握低倍镜、高倍镜使用方法;掌握使用显微镜观察微生物的形态；掌握微生物直接计数法中常用的方 法血球计数法学习血球计数器的构造、原理及使用方法二、实验器材显微镜玻片标本酵母菌载玻片、盖玻片、擦镜纸血球计数板待测水样无菌毛细管，吸水纸三、实验内容1.光学显微镜的构造机械系统部分光学系统部分照明系统部分机械部分3.显微镜使用注意事项显微镜持取正确姿势使用前后的镜头维护注意标本的放置方向观察时注意双目齐睁高倍镜不得使用粗调严禁拆卸任何部件使用后恢复机器原貌(二)微型动物的计数基本原理
2、利用血球计数板在显微镜下直接计数，直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液放在血球计数板与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的，可根据观察到的数目换算成单位体积的总数目，此法计得的是菌的总数，故称总菌计数法血球计数板刻有两方格网，每网分九大方格，中间为计数室。计数室为 2516（1625）小方格。计数时常数五个中格的总数，换算出 1ml 中的总菌数操作步骤稀释：将水样进行适当稀释，菌液不浓，可不必稀释。镜检计数室：在计数前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则进行清洗。加样品：盖上盖玻片，用毛细管将菌液由盖玻片边缘滴一小滴，让其自行渗进计数室。不可有气泡。4 显微镜
3、计数：先低倍镜找计数室，后高倍镜计数。一般以每小格510 个菌体为宜。常选四角和中央五个中格计数。格线上菌体只数上线和左边线。同法计另一室。5 清洗血球计数板：自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，自行凉干。镜检，洗净为止。记录7 计算计数时，若采用一大方格为 25 个中方格的血球计器，5 个中方格的总菌数设为 A，菌液稀释倍数为 B，则 1mL 溶液中的总菌数（个）为：A/525104B5104AB因为 1mL1cm31000mm3如果是 16 个中方格，设 5 个中方格的总菌数为 A1，菌液稀释倍数为 B，则 1mL 溶液中的总菌数（个）为：A1/516104B3.2104A1B 实验二微生物大小的
4、测定，各菌种的观察，油镜的使用三、基本原理微生物细胞大小，是其形态特征重要标志之一。每一种微生物在一定条件下，有其相对固有的大小形态。它是分类鉴定的依据之一。其大小测定可用测微尺测量。测微尺分为目镜测微尺和物镜测微尺两部分。目镜测微尺：是一块可以放入接目镜内的特定圆形玻璃片。玻片中央是一个细长带刻度的尺，等分成 50 或 100 小格，每个等分线间距为 0.1mm。由于不同显微镜的放大倍数不同，故目镜测微尺每格实际代表长度随显微镜的不同而不同。因此在使用前必须用物镜测微尺校正，以求得在一定接物镜及目镜等光学系统下，目镜测微尺每格所代表的实际长度。物镜测微尺是一块中央部分刻有精确等分线的载玻片。
5、每一刻度间距为 10um 即把 1mm 等分为 100 格，是专门为校正目镜测微尺实际数值用的。四、方法与步骤 1、目镜测微尺的校正1）将目镜测微尺装入目境内，刻度朝下，并将物镜测微尺朝上置载物台上。2）用低倍镜核对，至能清晰看到物镜测微尺。3）改用高倍镜或油镜对焦后，转动目镜，使目镜测微的刻度和物镜测微尺刻度平行。4)两尺吻合后，先使两尺的一端某一刻度完全重合，然后再寻找另一端第二条重叠的刻度5)计下两吻合刻度间，目镜测微尺与物镜测微尺的格数。按下列公式算出目镜测微尺每小格所代表长度。目镜测微尺每格长度（微米）两吻合刻度间物镜测微尺格数10m= 两吻和刻度间目镜测微尺格数例如：目镜测微尺的
6、5 格等于物镜测微尺的 2 格，则目镜测微尺 1格=（210）/5=4 微米 2、微生物大小测定：1）制作水样浸片2)取下镜台测微尺，将“水浸片”标本置于载物台上。3）先用低倍镜观察到目标后，转换高倍镜测量酵母的大小，测量1020 个菌体，求出其平均值。四、测量结果记录：目镜测微尺格=物镜测微尺格 目镜测微尺 1 格= 微米微生物长度=目镜测微尺平均格= 微米宽度=目镜测微尺平均格= 微米注：要求测量 10 个微生物的平均值实验三二、实验原理:培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。一般来说，培养基包括有水份、碳源、氮源、无机盐类以及生长因素等五大类营养成
7、份。此外还得有适宜的 pH 值，一定的渗透压（即浓度）以及氧化还原电位等。灭菌：即通过不同的加热方法，使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌的目的,蛋白质的凝固变性与蛋白质中含水量的多少有关，含水量较多者，其凝固所需要的温度低，反之，含水份较少者需要高温才能使蛋白质凝固。因此杀灭芽孢比杀灭营养体所需的温度高。利用目的菌的生理特征，将菌从微生物群体中筛选出来，并进行分离培养，获得纯种。三、实验方法1.玻璃器皿的灭菌：干热灭菌：适用于玻璃仪器，将物品放入烘箱，160170oC，12 小时。2. 培养基的配制察氏培养基、牛肉膏蛋白胨培养基3. 培养基的灭菌高压蒸汽灭菌三、实验方法1.稀释平板分离法(1) 取样 (2) 稀释水样 (3) 平板制作2. 平板划线分离法(1) 倒平板: (2) 划线：
