《胎盘异铁蛋白在受精卵着床和早期胚胎发育过程中的免疫作用机制探讨》由会员分享，可在线阅读，更多相关《胎盘异铁蛋白在受精卵着床和早期胚胎发育过程中的免疫作用机制探讨（112页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、华中科技大学同济医学院2 0 0 0 级博_ I - 学位论文胎盘异铁蛋白在受精卵着床和早期胚胎发育过程中的免疫作用机制探讨华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科博士研究生朱颖指导老师孙永玉教授王泽华教授摘要交 二 十 世 纪 5 。 年 代 早 期 ， M e d aw ar (19 5 3 ) 首 先 提 出 胎 儿 是一种同种异体移植物 的概念， 认为在妊娠期间胎儿与母体的关系和移植物与受体的关系类似。 但是胎儿明显不同于通常的异体移植物， 他能够成功地逃避母体免疫系统的排斥并形成免疫耐受。 母体免疫系统与胎儿胎盘单位间的免疫学相互作用不仅贯穿于正常妊娠的全过程，而且是多因素综合作用的
2、结果。 过去主要从系统免疫状态对母胎免疫耐受加以解释， 如母胎间存在解剖屏障; 胚胎组织表面不存在经典的主要组织相容性抗原复合物 MH C )一I 类和MH C一I I 类抗原;孕妇保护性抑制免疫反应增强: 外周血出现抗淋巴细胞抗体、 封闭抗体、血清抑制因子，以及出现 T细胞亚群变化。目前，随着生殖医学和免疫学的发展， 母胎界面局部的特殊免疫状态日益成为生殖免疫学研究的重点。 在从受精开始到胚泡种植以及早期胚2 0 0 0 级博士学位论文华中 科技大学同 济K.学院胎发育的整个围着床期， 子宫内环境发生了一系列变化， 使胚泡的发育与子宫的分化达到同步，以利于建立和维持正常妊娠， 因此在围着床期
3、母胎之间免疫相互作用时发生的任何异常变化都会对妊娠早、中、晚期造成不同程度的影响，反复自然流产理性妊娠结局、妊娠高血压综合征、胎儿生长受限、甚至造成死胎等病。 这些病理性妊娠不仅严重威胁母胎健康， 而且产生沉重的社会负担。 因此， 探讨围着床期母胎免疫耐受机制、J 尸户 诊 对 提 高 围 产 医 学 水 平 具 有 极 其 重 要 的 理 论 价 值 和 临 床意 义 。 夕近年来发现一种新的具有免疫调节作用的标志物一胎盘异铁蛋白 ( P l a c e n t a l i s o f e r r i t i n P L F ? ，不仅在母胎组织界面具有独特的分布表达模式， 而且其表达水平的
4、异常与多种病理性妊娠结局有关。己有大量的临床研究发现血清 P L F在正至血常妊娠的第 ”天就呈现高水平并随孕周增加逐渐升高足月时开始下降;而不全流产和妊娠高血压综合征的孕妇，清 P L F水平较正常妊娠者显著降低;在体外受精一 胚泡移植的孕妇中，发生早期胚胎丢失者血清 P L F水平较胚胎持续存活者显著降低， 而且P L F 水平降低的时间要早于0 - h C G水平的下降;同时孕妇血清 P L F的浓度与婴儿出生体重、出生体重的百分数具有很强的相关性。 小于胎龄) L 即出生体重在相同胎龄儿平均体重的第 1 0百分位以下，或低于平均体重 2 个标准差的新生儿。 根据成熟度可分为早产、 足月
5、产、 过期产小于胎龄儿。这些孕妇的血清 P L F水平较生育正常体重新生儿者显著降低 。、 _ 少/一-华中科技大学f ll i 3 F rk M ,2 0 0 0 级博f : 学位论文目前， 国内外关于围着床期P L F 在母胎组织界面发挥免疫耐受的确切机制和途径尚未见报道。 山于影响受精卵着床的关键因素是子宫内膜容受性和胚胎发育质量，因此， 本从 以弄入 从厂下4 个方面开展了一些创新性研究:首次探讨P L F 作用下母胎组织界面免疫微环境的变化;首次探讨P L F 作用下子宫内膜容受性的变化:首次探讨 P L F对早期胚胎发育的影响;首次探讨P L F 对受精卵着床的影响。 第 材 、
6、习 扮之 户 7、 ，1，乙目的一、人早孕期滋养层细胞对蜕膜源性巨噬细胞分泌T N F - 。的作用及其与P L F的关系，了解 P L F作用下的母胎界面免疫微环境的变化;二、P L F对人早孕蜕膜细胞分泌前列腺素的影响，了解 P L F作用下子宫内膜容受性的变化;三、P L F 对受精卵着床和早期胚胎发育过程的影响。方法一、 建立正常人早孕期蜕膜巨噬细胞培养体系( 单独培养组) ，分别用双抗体夹心酶联免疫吸附 ( E L I S A) 法和放射免疫法 ( R I A) 检测培养液中P L F 和T N F - a 水平;再将蜕膜巨噬细胞和人早孕期滋养层细胞共培养 ( 共培养组) ，比较培养
7、液中P L F和 T N F - 。水平的变化:两组细胞在 P L F华中科技人学同济医学院2 0 0 0 级博士学位论文单克隆抗体作用下继续培养，比较培养液中P L F 和T N F -。水平的变化 ;二、 建立正常人早孕期蜕膜细胞体外培养体系， 利用免疫组织细胞化学技术鉴定培养细胞的类型和纯度; 然后将其与蜕膜巨噬细胞置于不同浓度 P L F培养基中共培养，利用逆转录酶链聚合反应( r e v e r s e t r a n s c r i p t i o n - p o l y m e r a s e c h a i nr e a c t i o n , R T - P C R降落法)和
8、聚丙烯凝胶电泳检测共培养细胞T N F - a m R N A的表达水平;利用放射免疫法 ( R I A )检测培养液中P G F 2 。 和P G E 2 水平;三、建立体外无血清小鼠胚胎种植模型，置于不同浓度 P L F的培养基中培养， 倒置显微镜下观察摄影， 记录胚胎数目并分级;在大鼠双侧子宫角分别注入生理盆水和 P L F或其单克隆抗体，记录双侧着床的胚胎数和卵巢黄体数，比较胚胎着床率:结果一、 共培养组:I 培养液中P L F 水平 ( 4 8 .3 2 1 3 . 2 4 u g / m L )较单独培养组 ( 5 .2 3 1 0 . 5 6 t1 g / m L )显著增加;T
9、 N F - 。 水平 ( 1 . 7 0 1 0 . 6 2 p g / m L ) 较单独培养组 ( 5 2 . 7 6 1 4 . 5 3 p g / m L )明显降低，差异均有显著性 ( P 0 .0 5 ) 。单独培养组:I .在P L F单克隆抗体作用下培养，与基础培养基作用下比较，P L F 水平明显降低( 2 . 5 6 士 。 . 4 2 1 1 g / m L ) , 差异有显著性( P0 . 0 5 ) . 2 .与P L F 单克隆抗体作用下的共培养组比较， P L F和 T N F - a水平均无显著性差异 ( P0 . 0 5 ) 。二、人早孕期蜕膜细胞与蜕膜巨噬
10、细胞共培养时，根据 P L F无血清培养基的浓度不同分为三组:1 . 5 u g / m L P L F 组共培养细胞 T N F - 。 基因表达水平为 0 . 3 0 1 0 . 0 3 ，培养液中 P G F 2 。和 P G E 2 水平以及 P G F 2 a / P G E 2 值分别为1 2 0 5 1 6 6 f m o l / 1 0 6 c e l l / 3 h , 2 2 0 士 5 8 f m o l / 1 0 6 c e l l / 3 h 和5 . 4 810 . 1 9 ，与对照组比较差异均无显著性 ( P 0 . 0 5 ) 0 2 . 5 011 g /
11、m L P L F 组与对照组、5 1 1 g / m L P L F 组比 较，共培养细胞 T N F - 。基因表达水平、P G F z a和 P G E 2 水平以及P G F 2 a / P G E 2 值 ( 分别为 0 . 1 5 士0 .0 3 , 2 7 3 士 4 9 f m o l / I 0 6c e l l / 3 h , 9 7 1 3 0 f m o l / 1 0 6 c e l l / 3 h 和2 . 8 1 士 0 . 1 2 ) 均显著降低，差异均有显著性 ( P 0 . 0 5 ) ;但是， 在5 0 u g / m L 和5 0 0 0 g / m L
12、 浓度的P L F 培养基作用下，发育至囊胚期和孵出期鼠胚数的百分率明显提高 ( P0 . 0 5 ) ;结合大鼠体内试验， 经P L F 作用的胚胎着床率较对照组明显提高，差异有显著性 ( P 0 . 0 5 ) .A l o n e c u l t u r e g r o u p : T r e a t e d w i t h t h e m o n o c l o n a l a n t i b o d i e sa g a i n s t P L F , t h e r e l e a s e o f P L F ( 2 .5 6 1 0 .4 2 t o g / m L ) s i
13、g n i f i c a n t l yr e d u c e d ( P 0 . 0 5 ) . A m o n gt h o s e o f t h e c o - c u l t u r e d g r o u p t r e a t e d w i t h t h e m o n o c l o n a l a n t i b o d i e sa g a i n s t P L F , P L F a n d T N F - a r e l e a s e i n c u l t u r e m e d i u m w e r e s i m i l a r( P 0 . 0 5
14、) .2 T h e h u m a n f i r s t t r i m e s t e r d e c i d u a l c e l l s a n d m a c r o p h a g e s w e r ec o - i n c u b a t e d , t h e y w e r e c l as s i f i e d i n t o t h r e e g r o u p s i n a c c o r d a n c ew i t h t h e d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f P L F : T h
15、e c o - c u l t u r e d c e l l sm R N A e x p r e s s i o n f o r T N F - a , P G F 2 a a n d P G 马r e l e a s e i n c u l t u r em e d i u m , a n d t h e r a t i o o f P G F 2 a / P G E 2 i n 5 u g / m L P L F g r o u p ( 0 .3 01 0 .0 3 , 1 2 0 5 1 6 6 f m o l/ 1 0 6 c e ll/ 3 h , 2 2 0 1 5 8 f m
16、 o 1/ 1 0 6 c e l U 3 h a n d 5 .4 8士 0 . 1 9 , r e s p e c t i v e l y ) w e r e s i m i l a r w i t h i n c o n t r o l g r o u p ( P 0 .0 5 ) ， T h e c o - c u l t u r e d c e l l s m R N A e x p r e s s i o n f o r T N F - a , P G F 2 。 a n dP G 几r e l e a s e i n c u l t u r e m e d i u m , a n d t h e r a t i o o f P G F 2 a / P G E 2 i n 5 0。 g / m L P L F g ro u p ( 0 . 1 5 士 0 .0 3 , 2 7 3 4 t 9 f m o l/ 1 0 6 c e l l/ 3 h , 9 7 1 3 0 6 n o U 1 0 6ce l l/ 3 h a
