《糖尿病血管病变中inos与cox-2消基化对其相互作用影响及中药防治》由会员分享，可在线阅读，更多相关《糖尿病血管病变中inos与cox-2消基化对其相互作用影响及中药防治（94页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、英文缩写英文缩写D MD i a b e t e sm e l l i t u s糖尿病i N O SI n d u c i b l en i t r i co x i d es y n t h a s e 诱导型一氧化氮合酶C O X 一2C y c l o o x y g e n a s e 一2环氧化酶2O N 0 0 。P e r o x y n i t r i t e过氧亚硝基阴离子 N TN i t r o t y r o s i n e硝基酪氨酸0 2 。S u p e r o x i d e超氧阴离子 N ON i t r i co x i d e一氧化氮P GP r o s
2、t a g l a n d i n前列腺素S T ZS t r e p t o z o t o c i n链脲佐菌素 P A SP e r i o d i ca c i d S c h i f f sr e a c t i o n 碘酸S c h i f f 反应N Y P B RN o u r i s h i n gY i na n d滋阴活血方药P r o m o t i n gB l o o df l o wR e c i p e2 0河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北
3、医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一二署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：私宁导师签河北医科大学 研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导F 迸行的研究工作及取得的研冗成果，除J文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：壕谚宁导师签名辎参 沙f 年3 只弓口B中文摘要糖尿病血管病变中i N O S 和C O X 2 的硝基化对其相 互作用的
4、影响及中药防治摘要目的：糖尿病( d i a b e t e sm e l l i t u s ，D M ) 慢性血管并发症包括大血管和微血管的病变，如动脉硬化和糖尿病肾病，是D M致死、致残的主要原因。然而，目前糖尿病血管病变的发病机制尚不完全清楚，其中氧化应激和炎症损伤被广泛认为是重要的机制。D M 时，诱导型一氧化氮合酶( i n d u c i b l en i t r i co x i d es y n t h a s e ，i N O S ) * 1 环氧化酶一2 ( c y c l o o x y g e n a s e 一2 ，C O X 一2 ) 可被诱导而活性增强，导致损伤
5、。已有体外的研究报道，i N O S和C O X 。2 之间存在相互作用。然而，在体内状态下i N O S 和C O X 2 之间是否存在相互作用，其相互作用与糖尿病血管病变发病和进展的关系未见报道。D M 时，过量的N O 可与超氧阴离子( s u p e r o x i d e ，0 2 - ) 快速反应生成过氧亚硝基阴离子( p e r o x y n i t r i t e ，O N 0 0 ) 。O N 0 0 可引起蛋白质中酪氨酸残基明显的硝基化。一旦蛋白质被O N O O 引起硝基化，它们的结构和功能就会受到影响。而O N O O 。引起的i N O S 和C O X 2 的硝基
6、化，对两者体内状态下，特别是糖尿病血管病变中的相互作用有何影响尚未见报道。尿酸盐( U r a t e ) 是特异的内源性O N O O 清除剂。滋阴活血方药( N o u r i s h i n gY i na n dP r o m o t i n gB l o o df l o wR e c i p e ，N Y P B R ) 是前期系列研究防治糖尿病并发症的核心方剂。中文摘要本实验采用健康雄性W i s t a r 大鼠，链脲佐菌素( s t r e p t o z o t o c i n ，S T Z ) 复制D M 模型，随机分为四组：正常组、 D M 组、U r a t e 组、
7、N Y P B R 组。实验中，检测i N O S 和C O X 2的转录水平、蛋白含量、两者的共定位和相互作用，以及i N O S 和C O X 2 的硝基化水平，旨在探讨D M 大鼠体内，i N o S和C O X 。2 之间是否存在相互作用；i N O S 和C O X 2 的相互作用与糖尿病大血管和微血管病变发病与进展的关系；O N 0 0 所致的i N O S 、C O X 2 硝基化对其相互作用的影响；N Y P B R 防治作用机制是否是通过降低i N O S 和C O X 2 的硝基化，影响其相互作用，从而起到防治糖尿病血管病变的目的。方法：1 动物分组与取材健康雄性W i s
8、 t a r 大鼠( 4 0 7 0 5 4 - 5 9 5l g ) 3 6 只，随机分为4 组，正常组( 8 只) ，D M 组( 1 0 只) ，U r a t e 组( 9 只) ，N Y P B R组( 9 只) ，后三组腹腔内注射S T Z 溶液( S T Z 溶于浓度为0 1 m o l L 的柠檬酸纳缓冲液，p H 4 4 ，新鲜配制，终浓度为1O m g m L ，按4 0 m g k g 注射) 制备D M 模型，正常组注射等剂量生理盐水。注射3 天后，测空腹血糖，高于1 3 m m o l L ，尿糖+ + + 以上，为造模成功。以上四组正常饮食喂养，正常 组和D M 组
9、自由饮水，U r a t e 组用U r a t e 水溶液灌养( 1 6 0 m g k g d ) ，N Y P B R 组按人与动物间体表面积折算的等效剂量比值灌胃给药( 含生药l g m L ) ，每只大鼠3 m L 天。2 0 2 5 室温下喂养1 3 周后，检测血糖、体重一次，股动脉放血处死，迅速剥离胸腹主动脉及肾组织，取一段主动脉及中文摘要肾皮质用作形态学观察及激光共聚焦分析；剩余的主动脉和肾皮质迅速置于液氮中，7 0 。C 冰箱保存，用于提取R N A ，W e s t e mb l o t t i n g ，免疫共沉淀等分子生物学检测。2 形态学观察主动脉内皮、肾皮质光镜和透
10、射电镜下观察。3 主动脉及肾皮质中i N O S 和C O X 2 转录水平的检测T r i z o l 一步法分别提取主动脉和肾皮质中总R N A ；用1 3 - a c t i n 做内参，R T P C R 方法检测i N O S 和C O X 2 的m R N A表达。4 主动脉及肾皮质中i N O S 和C O X 2 蛋白含量及硝基化水平的检测分别取主动脉和肾皮质，匀浆后，L o w r y 法测定蛋白含量，W e s t e m 。b l o t t i n g 检测主动脉及肾皮质中i N O S 和C O X 2的蛋白含量和其硝基化水平，即N T 含量。5 主动脉及肾皮质中i
11、N O S 和C O X 2 的共定位分别取主动脉和肾皮质，用激光共聚焦显微镜检测i N O S 和C O X 2 的蛋白含量及其共定位。6 主动脉及肾皮质中i N O S 和C O X 一2 的相互作用和硝基化水平6 1 分别取主动脉和肾皮质，匀浆后，L o w r y 法测定蛋白含量，i N O S 和C O X 一2 的免疫共沉淀检测其相互作用。6 2W e s t e m b l o t t i n g 检测沉淀的i N O S 和C O X 一2 蛋白含量及其硝基化水平，即N T 含量。结果：1 大鼠的一般表现，U r a t e 及N Y P B R 对大鼠血糖和体重中文摘要的影响
12、。造模3 天后，D M 组( 21 6 8 + 2 9 5 ) 、U r a t e 组( 2 3 2 8 + 3 9 8 )和N Y P B R 组( 2 1 9 3 + 3 9 3 ) l f l l 糖均较正常组( 5 8 4 + 0 1 7 ) 显著升高( 氏0 0 0 1 ) 。D M 组大鼠逐渐出现消瘦，皮毛无光泽、疏松，反应迟钝，多饮、多尿、多食、生长迟缓等症状。U r a t e 组和N Y P B R 组明显好于D M 组。1 3 周病程结束时，D M 组血糖( 2 2 。2 0 + 5 。5 7 ) 明显高于正常组( 6 0 5 4 - 0 9 4 ) ，体重( 3 4 7
13、 3 0 + 4 3 1 5 ) 1 t 垌显低于正常组( 5 2 1 2 + 8 1 7 4 ) ，有显著性差异( 尸 O 0 0 1 ) 。U r a t e 组血糖( 18 8 8 4 - 3 2 I ) 与体重( 3 2 0 4 4 4 - 6 1 7 8 ) 均与D M 组无差异。N Y P B R 组血糖( 1 4 7 9 4 - 3 0 7 ) 明显低于D M 组( 氏O 01 ) ，体重( 3 4 0 8 9 士51 2 4 ) 与D M 组无差异。2 主动脉形态学观察主动脉光镜( x 4 0 0 ) 下观察：正常组主动脉内皮完整，D M组内皮广泛脱落，U r a t e 组和
14、N Y l P B R 组，主动脉内皮形态学改变介于以上两组之间。N Y P B R 组较U r a t e 组的病理改变减轻。主动脉透射电镜( x 2 0 K 或x 4 0 K ) 下观察：正常组内皮细胞内可见到大量吞饮小泡，线粒体完整。D M 组内皮细胞可见大部分线粒体膜溶解、嵴消失，细胞连接融合或消失。U r a t e组和N ) B R 组，内皮细胞线粒体的形态学改变减轻，细胞连接部分融合。N Y P B R 组较U r a t e 组的病理改变减轻。3 肾小球形态学观察肾小球光镜( x 4 0 0 ) 下观察：正常组肾小球未见异常，糖原染色可见基底膜薄而清晰。D M 组，可见到肾小球
15、纤维化、肾小囊腔增大，糖原染色可见基底膜增厚。U r a t e 组和N Y P B R组肾小球的形态学改变介于以上两组之间。N Y P B R 组较中文摘要U r a t e 组的病理改变减轻。肾小球透射电镜( 1 0 K 、15 K 或x 2 0 K ) 下观察：正常组肾小球未见异常。D M 组，可见系膜细胞及足突融合、基底膜增厚。U r a t e 组和N Y P B R 组肾小球的形态学改变介于以上两组之间。N Y P B R 组较U r a t e 组的病理改变减轻。4 主动脉i N o S 和C O X 2 转录水平的变化正常组i N O S 和C O X 2 的m R N A 表
16、达未检测出，D M组i N O S 的m R N A 表达( O 5 7 + 0 0 5 ) 、C O X 2 的m R N A 表达 ( O 4 9 + 0 0 6 ) 均明显增高。U r a t e 组i N O S 的m R N A 表达( O 2 8 4 - 0 01 ) 、C O X 2 的m R N A 表达( O 2 9 4 - 0 0 2 ) 较D M 组显著降低( 尸 O 0 1 ) 。N Y P B R 组i N O S 的m R N A 表达( O 2 2 4 - 0 0 3 ) 、C O X 2 的m R N A 表达( O 2 9 4 - 0 0 3 ) 较D M 组显著降低俨 O 0 1 ) 。 5 肾皮质i N O S 和C O X 2 转录水平的变化 正常组i N O S 和C O X 2 的m R N A 表达未检测出，D M组i N O S 的m R N A
