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1、河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：蛾导师签名：嘲学院领导签名： 彰年乡月谚日河北医科大学 研究生学位论文独创性声明碱一：蛾聊鹤：隳；中文摘要突变型P 5 3 和F a s F a s L 在急性百草枯中毒大鼠肾脏 中的表达以及褪黑素对其影响的研究摘要目
2、的：百草 古( p a r a q u a t ，P Q ) 是目前世界范围内广泛使用的除草剂。随着其在我国农业上的广泛应用，百草枯中毒也日趋增多。百草枯除草效果好，但它对人和动物均有较强毒性。百草枯可以经呼吸道吸入、消化道吸收及皮肤接触三种途经进入体内，造成急性中毒。目前其发病机制尚未完全阐明，也无特效治疗药物，临床病死率高。因此百草枯中毒所引起的机体病理生理改变成为当前中毒治疗学的研究热点。百草枯进入机体后，主要损伤肺脏，其次是肾脏，并以原形从肾脏排出，所以肾功能的健全对清除体内已吸收的百草枯至关重要。但是，在急性百草枯中毒中，肾损伤的具体机制还不十分清楚。本研究通过观察急性百草枯中毒大鼠
3、模型的肾组织病理学改变，通过测定肾组织匀浆中超氧化物歧化酶( S O D ) 、谷胱甘肽一过氧化物酶( G S H P X ) 的活力和丙二醛( M D A ) 的含量，并采用免疫组织化学方法观察肾组织中突变型P 5 3 蛋白、肿瘤坏死因子家族中F a s L 及其细胞表面受体F a s 的表达，以及褪黑素( m e l a t o n i n ，M T ) 对其表达的影响，探讨急性百草枯中毒导致肾损伤的机制以及褪黑素( M T ) 对其的治疗作用。方法：选用健康成年S D 大鼠1 0 8 只( 雌雄各半) ，随机分为3 组：正常对照组( A 组) 3 6 只，单纯染毒组( B 组) 3 6
4、只，褪黑素治疗组( C 组) 3 6 只。B 、C 组一次性给予2 5 m g K gP Q中文摘要腹腔内注射染毒，A 组给予等量的生理盐水腹腔内注射。之后，C 组立即给予褪黑素1 0 m g K g 腹腔内注射，此后每日一次，直至大鼠被处死，最长用药时间为1 4 天；而A 、B 组换以等量生理盐水腹腔内注射，每日一次，直至处死。B 组、C 组分别于1 d ，3 d ，5 d ，7 d ，1 0 d ，1 4 d 各取6 只大鼠，均采用乙醚麻醉，开腹，留取肾组织，一部分标本制备匀浆，分别测定肾组织中M D A 的含量，S O D 及G S H P x 的活力；另一部分标本，行光镜观察，并采用免
5、疫组织化学染色法观察肾组织中P 5 3 、F a s F a s L 的表达。A 组3 6 只大鼠于生理盐水腹腔内注射后2 4 h 一次性处死，标本留取及指标测定同B 、C 组。结果：l 、大鼠中毒表现：B 组、C 组大鼠在染毒后3 0 m i n s 一- -2 h s 即可出现不同程度的中毒表现，包括呼吸系统、泌尿系统、神经系统和消化系统等全身中毒症状，且在1 3 d 最明显。C 组经褪黑素治疗后中毒症状较B 组减轻：呼吸困难改善，少尿持续时间缩短。2 、肾组织指标测定：( 1 ) B 组大鼠肾组织M D A 含量在l d 、3 d S n 5 d 时段明显高于A 组( P O 0 5 )
6、 。而在C 组M T 明显抑制了染毒大鼠肾组织 M D A 升高趋势，1 d 、3 d 及5 d 时段M D A 均较B 组明显降低( P O 0 5 ) 。C中文摘要组M T 明显增加了染毒大鼠肾组织S O D 活力，1 d 、3 d 、5 d 及7 d t - - 段S O D 活力均较B 组明显升高( P 0 0 5 ) 。( 3 ) B 组大鼠肾组织G S H P x 活力染毒后l d 并n 3 d 时段明显低于A 组f P O 0 5 ) ；C 组M T 明显增加了染毒大鼠肾组织G S H P x 活力，l d * 1 3 d 时段G S H P x 活力较B组增高( P 0 0 5
7、 ) 。3 、H E 染色结果：A 组光镜下观察可见肾小球、肾小管及肾间质结构正常。B 组肾小球内可见红细胞轻度增多，肾小管上皮细胞发生肿胀、变性，肾小管腔变窄，并出现上皮细胞坏死脱落。肾间质水肿、充血伴炎性细胞浸润。C 组M T 明显减轻了大鼠肾小球充血、肾小管上皮细胞水肿、渗出及坏死等病理改变。4 、治疗前后突变型P mF a s 和F a s L 免疫组织化学检测结果：( 1 ) A 组正常大鼠肾组织中突变型P 5 3 无表达或有微弱表达，主要分布在肾小管上皮细胞的胞核中。B 组大鼠在染毒1 d 肾组织中突变型P 5 3 的表达即明显强于A 组( P O 0 5 ) ，与A 组比较所有时
8、段均有统计学意义( P 0 0 5 ) ，与A 组比较所有时段均有统计学意义( P O 0 5 ) 3H Es t a i n i n g ：G r o u pA ：T h es t r u c t u r eo fr e n a lg l o m e r u l u sa n dr e n a lt u b u l ew a sn o r m a l G r o u pB ：R e n a lg l o m e r u l u sh a dm i l dh y p e r a e m i aa n dd i s t e n s i o n R e n a lt u b u l ee p i
9、t h e l i a lc e l lh a d一，英文摘要e d e m aa n dv a c u o l a rd e g e n e r a t i o na n dr e n a lt u b u l el u m i n aw e r en a r r o w i n go n18 d a y T h e r ew e r ee d e m ae x u d a t i o na n dn e c r o s i so n3 耐d a y T h e r ew e r es e r i o u se d e m ae x u d a t i o na n dn e c r o s
10、 i so n7 t h d a y , w h i c hg r a d u a l l yl e s s e n e d I n f l a m m a t o r yc e l li n f i l t r a t i o n ，e d e m aa n dh y p e r a e m i aa p p e a ri nr e n a li n t e r s t i t i a l G r o u pC ：M Tt r e a t m e n tw e a k e n e dt h ep a t h o l o g i c a lc h a n g e so fr e n a lt
11、i s s u e 4 I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ( I H ) s t a i n i n g ：( 1 ) I ng r o u pA ，t h e r ew a so n l yv e r yw e a ke x p r e s s i o n so fm u t a n tP 5 3a n dF a s F a s L i nt h en o r m a lr e n a lt i s s u e M u t a n tP 5 3c a nb eo b s e r v e di nt h en u c l e u so fr e n
12、 a lt u b u l a re p i t h e l i a lc e l l s ，F a s F a s Li nt h ec y t o p l a s m ( 2 ) I ng r o u pB ，t h ee x p r e s s i o n so fm u t a n tP 5 3a n dF a s F a s Lw e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a ti ng r o u pAo nt h e1 吼d a yw h i c hc o u l db eo b s e r v e di nr e n
13、 a lt u b u l ee p i t h e l i a lc e l l sm a i n l y T h ee x p r e s s i o n so fm u t a n tP 5 3a n dF a s F a s Lc o u l db eo b s e r v e di nt h en u c l e u sa n dc y t o p l a s mr e s p e c t i v e l y B o t ho ft h e mk e p ta tt h eh i g hl e v e l st i l lt h e14 md a y ,w h i c hw a sh
14、 i g h e rt h a nG r o u pA ( P 0 0 5 ) 。C 组：褪黑素明显抑制了P Q 染毒大鼠肾组织M D A 升 高的趋势，1 d 、3 d 及5 d 时段M D A 较染毒组明显降低( P O 0 5 ) 。2 2 肾组织S O D 活性测定( F i g 2 、)B 组：与A 组比较，大鼠染毒后l d 肾组织S O D 活力即明显下降，以后各时段呈逐渐上升趋势。l d 并1 3 d 时段明显低于A 组( P O 0 5 ) 。C 组：褪黑素明显增加T P Q 染毒大鼠肾组织S O D 活力，l d 、3 d 、5 d 及7 d 时S O D 活力均较B 组明显
15、升高( P O 0 5 ) 。2 3 肾组织G S H P x 活性检沥 l ( F i g 3 ) B 组：与A 组相比较，染毒组大鼠染毒后1 d 肾组织G S H P x 活力下降，以后各时段呈逐渐上升趋势，1 d 和3 d时段与A 组比较有统计学意义( P O 0 5 ) 。C 组：褪黑素明显增加了P Q 染毒大鼠肾组织G S H P x活力，1 d 和3 dG S H P x 活力较B 组为高，比较有统计学意义( P O 0 5 ) 。3 百草枯中毒大鼠肾组织学变化：苏木素伊坌- I - ( H E ) 染色结果( F i g 4 - 6 )A 组：光镜下观察肾小球、肾小管、肾间质及血
16、管结构正常。B 组：( 1 ) 大体标本观察，可见肾脏体积增大，色暗红且不均匀，呈点片状淤斑和或出血点；( 2 ) 光镜观察：肾小球内可见红细胞轻度增多，肾间质水肿、充血伴炎性细胞浸润。肾小管：染毒后1 d 肾小管上皮细胞水肿、空泡变性，肾小管管腔变窄，偶见肾小管上皮细胞坏死脱落；3 d 肾小管上皮细胞均见水肿渗出、坏死；7 d 肾小管上皮细胞重度水肿、坏死，并可见核碎裂、溶解、胞浆脱失，坏死的上皮细胞脱落入管腔；1 0 d 后肾小管水肿减轻，坏死物逐渐减少。C 组：褪黑素干预后明显减轻了肾脏病理改变，1 d 时可见肾小管上皮细胞水肿减轻，3 d 时部分肾小管上皮细胞出现坏死，7 d 时肾小管上皮细胞仍有呈重度水肿、坏死，但管腔内坏死物较B 组少，1 0 d 后肾小管水肿明显减轻，管腔中坏死物逐渐减少。4 百草枯中毒大鼠肾组织突变型P 5 3 、F a s F a s L 免疫组织化学检测结果4 1 突变型P 5
