一、标本的采集一、标本的采集(一)标本采集人员医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照《与禽流感病禽密切接触者个人防护指导原则（试行）》做好个人防护二) 采集对象禽流感病人，疑似病人，根据需要可采集病禽以及人禽流感密切接触者三）标本采集种类和时限1. 采集标本的种类疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血清、粪便以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物、其它脏器2 .采集标本时间1）咽、鼻拭子或含漱液、粪便在发病的头 3 天采集2）急性期血清在发病后 7 天内采集，恢复期血清在发病后 2-4 周采集3）尸检标本尸检时采集3. 标本的运送采集的标本若不能在 24 小时内送达，则应尽快在－70 ℃以下保存无－70 ℃条件的需在－20 ℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本4. 标本采集的方法4.1 病毒分离标本应采集发病后 3 天内相关标本进行分离病毒标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存，常用的采样液为：普通肉汤，pH7.4-7.6 的 Hanks，Eagles 或水解乳蛋白液在采样液中需加入抗菌素，抗菌素多用青、链霉素（1000U/ ml），庆大霉素（其终浓度为每 ml 采样液中加入 0.1 ml 的 10mg/ ml）和制霉菌素（终浓度为 50ug/ ml）。
主要的采集样本的方法有以下几种：1）鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出以同一拭子拭两侧鼻孔将棉签浸入 4-5 ml 采样液中，尾部弃去2）咽拭子：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签头浸入 4-5 ml 采样液中，尾部弃去3）鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器3 次4）鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将 1-1.5 ml 洗液注入一侧鼻孔，嘱患者同时发 K 音以关闭咽腔然后让患者低头使洗液流出，用平皿或烧杯收集洗液重复此过程数次洗两侧鼻孔最多可用 10-15 ml 洗液5）漱口液：用 10 ml 洗液漱口漱时让患者头部微后仰，发“噢声”，让洗液咽部转动然后，用平皿或烧杯收集洗液注：取鼻洗液和漱口液时，需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史，如有洗液和含漱液中不应含有抗菌素6) 肺活检材料：肺活检组织在无菌条件下，用灭菌过的乳钵磨碎，用生理盐水配成 20%悬液，2000rpm 离心 10min，取上清加入上述提到的抗菌素7）粪便标本：采集 10-20g 粪便（或用塑料杆人造纤维头的肛拭子两支）放入含有10ml PBS 或生理盐水无菌的 50ml 有螺旋盖的塑料瓶内，密封，4℃条件下立即送至有关实验室4.2 血清标本血清标本应包括急性期和恢复期双份血清 5～10ml。
急性期血样应尽早采集，一般不晚于发病后 7 天恢复期血样则在发病后 2-4 周采集血液标本 2000-2500rpm 离心15min收集血清，血清可在 4℃存放一周，长期保存置-20℃二、标本包装、运送二、标本包装、运送1、禽流感病例（包括疑似禽流感病例）标本必须放在大小适合的带螺旋盖内的有橡胶圈的塑料管里（一级容器），拧紧2、将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本3、直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名，同时也将标本有关信息填在禽流感人体标本送检表（见附表），连同一级容器封于塑料袋内4、将装标本的密封袋放入二级带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器内，拧紧盖，在容器上标明有关信息5、将二级容器摆放在专用运输箱内（或疫苗运输箱），放入冰排，然后以柔软物质填充，并密封1）同一患者 2 份以上的密封标本，可以放在同一个二级容器内2）二级容器要承受不少于 95Kpa 的压力，内衬具吸水和缓冲能力的物质3）若进行病毒分离，可将密封好的装有标本的一级容器直接 放入液氮运输罐内运输4）所有容器必须印有生物危险标注5）标本需由专人（2 人）运送，不得邮寄，最好使用专车。
三、标本的接收三、标本的接收1.广州、深圳、佛山、韶关、汕头、云浮、湛江和珠海市疾病预防控制中心为本辖区内标本接收指定单位，并开展相关的实验室检测工作对病毒分离物的血凝实验阳性和血清 H5N1 抗体阳性的标本连同送检表一起送省疾病预防控制中心进行复检2、广东省 CDC 负责其它地级市样本的接收和实验室检测工作并对复核样本的检测、鉴定和上送国家流感中心3、以上指定实验室实行 24 小时标本接收制四、病毒的检测和相关程序四、病毒的检测和相关程序1、病毒分离和鉴定用组织培养（MDCK 细胞）和鸡胚分离法，细胞和鸡胚培养物进一步用 HA 和 HI 实验鉴定（具体方法见《广东省流感监测工作规范》）经 HI 实验（用 H5 抗血清）检测阳性者报送国家流感中心经特异性 H5 RT-PCR 病毒核酸检测阳性的采样标本的病毒分离及鉴定工作必须在生物安全Ⅲ级（BSL-3 级）实验室里操作2、血清抗体检测方法见《广东省流感监测工作规范》3、禽 H5 病毒核酸检测对疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液，死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物采用 RT-PCR 的方法快速检测禽 H5 亚型流感病毒及排除工作4、微量中和试验对部分疑似病例的急性期和恢复期的双份血清进一步做微量中和试验。
该实验必须在生物安全Ⅲ级 (BSL-3 级)实验室里操作五、检测结果的确认五、检测结果的确认1．各流感监测实验室对血凝实验（HA）阳性或 H5 血凝抑制试验（HI）阳性的标本，上送进行复核2．省 CDC 流感实验室对血凝（HA）阳性、H5 血抑（HI）阳性、RT-PCR 检测阳性、微量中和试验阳性的标本，上送国家流感中心复核检测及确认六、检测结果报告六、检测结果报告一般情况下， 实验室收到的样本立即进行实验，并于收到标本后 48 小时内出具RT-PCR 检测报告，3～5 天出具病毒分离培养结果，于分离到病毒后的 3～5 天出具流感病毒的血凝抑制结果，微量中和实验须 3～5 天后完成当实验过程中出现不可预测情况或意外事件，影响了按时出具报告时，应及时报告和说明流感实验室检测中应注意的若干问题1、初期病毒分离标本的处理可以在二级生物安全柜中进行；如标本确认为 H5N1 阳性后，此标本的有关实验应在 P3 实验室中操作血清学实验操作二级生物安全柜中或生物安全二级实验室进行2、禁止在同一实验室，更不能在同一接种柜中，同时处理接种未知临床标本和已知阳性标本3、禁止在同一实验室，同一时间处理，接种采自不同动物的标本；动物标本（如禽、猪等）必须与人的标本分别保存。
4、接种后剩余原始标本，尤其分离出病毒的标本需暂时冻存，有条件的应置-70℃或以下保存，以便需要时可进行复查，待分离物经国家流感中心鉴定完后方可处理掉分离阴性的标本应随时弃之5、严禁实验室交叉污染：在病毒分离时严禁设阳性对照及操作在人群中已消失的流感病毒6、流感病毒在-20℃～-40℃时不稳定，故长期保存应在-70℃温度以下。