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1、1新型生物组织石蜡制片 HE 染色无二甲苯全程处理套液大庆市翔鸿环保科技有限公司 马宪平 赵威常规石蜡制片 HE 染色技术是我们病理科工作中最为广泛使用的基本方法，在临床病理诊断方面具有重要价值和意义。可以说自它诞生和沿用的一百多年来，还没有实质性的改变和突破。许多病理工作者也在试图取缔制片过程中大量使用的二甲苯试剂方面，做了大量的努力，至今还缺少一个成功、成型的方法。或者仅限于在某个环节上替代掉二甲苯，而且方法不统一、不规范。从健康角度着想，有的病理科安装了空气净化装置，可将室内有害气体排到室外，但仍没从根本上解决对生存环境的污染。病理学家陈杰教授多次再会议以上强调：“目前病理技目前病理技术
2、多处于手工阶段，各自配制各自的染液，很难达到统一标准，严重阻碍了病理技术的标术多处于手工阶段，各自配制各自的染液，很难达到统一标准，严重阻碍了病理技术的标准化及质量的提高。我们呼吁诸如试剂、染液能实现标准化、社会化供求。准化及质量的提高。我们呼吁诸如试剂、染液能实现标准化、社会化供求。 ”经过十几年的反复研究，我们已经成功开发出这种“生物组织石蜡制片 HE 染色无二甲苯全程处理套液” 。【全程处理液特点】1 全程制片，包括染色、封片，彻底取缔了二甲苯。基本上从源头控制使用有害物质和使废弃液排放零污染。是对人和环境无害的一组绿色套液。2 作为混合试剂，它提高了单一试剂的固有优点，同时纠正了不足。
3、如组织细胞收缩、膨胀、硬过度、脱水、脱脂不兼顾和不彻底，是组织细胞过硬、胀、脆、裂而影响组织学观察。3 实现产品生产标准化和使用标准化。作为一组全程套液，本套液包括从组织样本固定到封片、防脱片液的全部应用处理用液。不在需要使用者单独调配和制备任何处理液。更利于标准化生产和工业化生产，及质量控制，也利于应用中质量控制和管理的统一性。4 节能、降耗。这组套液无论是机器还是手工操作，全程共用 13 缸。其中用于组织处理的脱水程序，为 6 缸；HE 染色程序为 7 缸。试剂使用量直接减少一半以上，相应的脱水机、染色机也都随之体积减小，缸数减少。节约了制作成本和能源消耗。与之配套的 6 缸脱水机，已在生
4、产制作中。5 制片时间也相应缩短，这尤其对手工操作更有意义微小样本可当日完成，发出报告。大样本同样下午 4 点进行开始操作，在不值班情况下：混合套液可于第 3 日上午 8 点进行包埋、切片、染色、诊断，10 点发出报告；老方法则在下午进行包埋、切片、染色，4 日上午进行诊断和发报告。6 提高制片质量。组织切片切面完整，呈连续蜡带，厚 23m，厚薄均匀，无皱裂，无2收缩，无折叠，无破碎，无过硬或膨胀，展片迅速平整。染色效果优良、透明效果清晰，切片无褪色。蜡块长期保存无退变，蜡块内组织样本平整无缩小、无凹陷，染色制片长期保存不退色。7 作为多用途套液，可满足各种新用途需要。 用于常规活检标本日常切
5、除的组织、器官固定； 用于常规活检标本石蜡制片 HE 染色； 用于细胞学 HE 染色； 用于活检术中，结合超声波快速脱水机技术完成手术中快速石蜡医学病理学制片诊断； 用于法医学大批量、大组织块石蜡全程制片诊断； 用于组织学、胚胎学全程石蜡制作教学片，供科教研使用； 用于动植物组织常规石蜡全程制片需要； 用于免疫组织化学固定，避免出现抗原胶联。提高免疫组化的准确性，更利于组织化学与免疫组织化学染色。 用于分子生物学研究，使 DNA/RNA 保存较多，显示较好，更有利于显示细胞的亚结构。【全程处理液评价】1 符合“绿色环保”的国际化要求，符合“节能、降耗、减排”的基本国策。2 去除了以往老方法应用
6、单一试剂存在对组织不利的化学作用而造成渗透性差、难控制、组织收缩大易过硬或脱水不彻底，影响制片的清晰度。新型混合试剂是由几种试剂不同比例混合构成，能相互混溶，减少了上述单一试剂缺点和不足，制约了对组织作用不利的一面，增强了对组织的渗透性又使组织不会收缩过度或膨胀。3 组织样本固定的同时又有脱水、透明、脱脂作用，脱水的同时又加强了固定兼透明、脱脂作用，透明的关键是与蜡的融合性越强越好，同时又有软化组织不易收缩，其组织样本透明折射率又高于二甲苯的折射率（二甲苯为 1.48，混合透明液为 1.54 左右） ；组织切片透明折射率又高于二甲苯的折射率（切片混合透明液为 1.51 以上） ，因此切片的透明
7、效果更佳。4 组织切片脱蜡采用的混合脱蜡液与石蜡为同源性其脱蜡效果增强，又与水易于结合，因此不用梯度乙醇反复除二甲苯，以往二甲苯清除多不彻底而影响水溶性苏木素染色液着色。仅采用一缸无需清洗液，该液可彻底清除残留的混合脱蜡液兼有初步脱蜡作用。5 改良苏木素染色液仅分化后入水蓝化即可完成蓝化。6 应用的水溶性伊红染液在组织切片完成水洗蓝化后直接完成细胞浆伊红染色，着色力加强。37 组织切片透明液采用中等挥发混合试剂，在透明过程中又有对水的亲和力，使残留微量水分子清除较彻底，杜绝了以往二甲苯与水分子不易亲和致水分子残留使切片透明过程中产生雾状影响透明效果。8 目前我们只能说“基本上”属于对人和环境无
8、害，因为在固定液中还含有很少量的甲醛，而最终的去除将是我们下一步要重点研究的内容。附：生物组织常规石蜡附：生物组织常规石蜡 HE 染色制片技术新老方法比较染色制片技术新老方法比较（表（表 1）新型常规石蜡较大组织标本制备技术名称、用时、用缸数量标本制 备名称编 号品名规格 ml手工操作 用 时手工操作 时间安排脱水机 用时脱水机操作 时间安排固定1固定液500过夜当日下午 16 时 到第二日上午 8 时3h30min当日下午 16 时 19 时 30 分2脱水液5001h30min8 时9 时 30 分1h30min19 时 30 分 21 时3脱水液5001h30min9 时 30 分11
9、时1h30min21 时 22 时 30 分脱水4透明液5002h30min11 时11 时 30 分2h30min22 时 30 分 1 时透明5浸蜡液5002h30min13 时 30 分或 16 时3h1 时 4 时浸蜡6浸蜡液500过夜过夜4h4 时8 时注：1、手工操作在第 3 日上午 8 时包埋、切片；2、自动脱水机操作在第 2 日上午 8 时包埋、切片；3、手工及自动组织脱水机操作用缸数量均为 6 缸；4、组织标本透明不用二甲苯。（表（表 2）新型常规石蜡微小标本制备技术名称、用时、用缸数量（加急制片当日发出报告）编号品名手工操作用时时间安排1固定液60min9 时10 时2脱水
10、液40 min10 时10 时 40 分3脱水液40 min10 时 40 分11 时 20 分4透明液20 min11 时 20 分11 时 40 分5浸蜡液40 min11 时 40 分13 时6浸蜡液60 min13 时14 时注： 当日下午 14 时包埋、切片、染色、阅片。（表（表 3）新型常规石蜡微小标本制备技术名称、用时、用缸数量（常规制片第 2 日上午发出报告）编号品名手工操作用时时间安排1固定液过夜过夜2脱水液1h40 min8 时8 时 40 分3脱水液1h40 min8 时 40 分9 时 20 分4透明液4h40 min9 时 20 分9 时 40 分45浸蜡液过夜9 时
11、 40 分10 时 30 分6浸蜡液1h10 时 30 分11 时 30 分注： 第 2 日上午 11 时 30 分包埋，下午切片、染色、阅片；（表（表 4）新型常规组织切片 HE 染色技术名称、手工操作用时、用缸数量（表（表 5）老式常规石蜡组织标本制备技术名称、用时、用缸数量组织标本 处理 名称缸号试 剂 名 称用 量手 工 操 作 用 时自动脱水机 用 时固定195%酒精 甲醛450 50过夜，值班 120min 完成120min280%酒精 蒸馏水400 10060120min395%酒精50060120min120min495%酒精50090120min120min5无水乙醇5006
12、0min60min6无水乙醇 50060min60min脱水7无水乙醇50060min8二甲苯50030min30min9二甲苯50030min30min透明10二甲苯50030min114550石蜡 50060min30min125658石蜡50060min60min浸蜡135658石蜡50060min 或过夜90min包埋1460石蜡500组织切片处理名称编号品名规格（ml）手工操作用时7脱蜡液5005min8脱蜡液5005min脱蜡自来水缓流水清洗3min9苏木素染色液500810min自来水缓流清洗蓝化5003s10伊红染色液5min自来水缓流水清洗5002s染色11除浮染液5001m
13、in12除水透明液5002min 透明13透明液5005min注：1、min（分钟） 、s（秒） ；2、手工操作用时 3032min；3、用缸数量 9 缸；4、组织切片脱蜡及透明均不用二甲苯。5注：1、总用时手工操作 40h42h30min 完成。2、手工操作在第 3 日下午完成包埋、切片、染色，在第 4 日上午进行诊断；3、常规组织标本用自动组织脱水机操作，总用时 12 小时（第 2 日上午 4 时浸蜡完成，8 时包埋、切片、染色，下午进行诊断） 。4、用缸总数量：手工操作 14 缸，自动脱水机操作 10 缸；5、二甲苯用量 1500ml（表（表 6）老式常规组织切片 HE 染色技术名称、手
14、工操作用时、用缸数量组织切片处理名称缸号试 剂 名 称用 量手工操作用时1二甲苯500510min2二甲苯500510min395%酒精50013min495%酒精50013 min580%酒精5001 min自来水洗1 min脱蜡6蒸馏水洗5001 min7苏木素染色500510 min自来水洗1 min81%盐酸乙醇分化50013s自来水洗12s9碳酸锂饱和水溶液蓝化5001 min自来水冲洗12 min10蒸馏水洗5001 min染色110.5%伊红酒精染色50013 min1280%酒精50012s1395%酒精50023 min1495%酒精50023 min15无水乙醇50035 min16无水乙醇50035 min脱水17无水乙醇50035 min18二甲苯50035 min19二甲苯50035 min透明20二甲苯50035 min注：1、用缸数量 20 缸，总用时 50 分钟1 小时 30 分钟；2、二甲苯用量 2500ml。3、老式方法全程制片引用于上海科学技术出版社出版的病理检验技术人民军医出版社出版的临床技术操作规范病理学分册作者：大庆市翔鸿环保科技有限公司 地址：大庆市红岗区庆南工业园区 邮编：150009 电话：0451-4599991 信箱：
