根系活力与过氧化物酶活性的测定

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1、根系活力与过氧化物酶活性的测定根系活力与过氧化物酶活性的测定丁丽 20050301 喻若颖 20050337 彭婵娟 20050339一一 实验目的实验目的掌握 -萘胺法测定根系活力. 观察重金属胁迫对根系活力的影响. 掌握比色法测定过氧化物酶的活性的原理和步骤.二二 实验原理实验原理植物根系能氧化 -萘胺，可通过测定溶液中未被氧化的 -萘胺含量，定量测定根系 活力。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 OD470nm变化来测定其活性。三三 实验方法实验方法1.-1.-萘胺法测定根系活力萘胺法测定根系活力(萘胺氧化

2、法萘胺氧化法) 取 50ug/ml-萘胺和磷酸缓冲液各 25ml，于三角瓶混匀，须根系洗净吸干，取 12g 浸 入三角瓶，取同样 -萘胺、磷酸缓冲液各 25ml 于另一三角瓶，不放须根系作对照，5 分 钟后，两瓶各取 2ml，按步骤 3 做第一次测定； 将两三角瓶置于 25恒温箱避光保存 60 分钟后，各取 2ml，按步骤 3 做第二次测定； 取 2ml 培养液加 10 水混匀，再顺次加入 1ml 对氨基苯磺酸与 1ml 亚硝酸钠，混匀观察颜 色变化，再定容至 25ml，室温 25 分钟，于 510nm 测 OD 值； 作标准曲线：以 50ug/ml-萘胺为母液，配液 40、30、20、10、

3、5、0ug/ml 溶液各 10ml，各取 2ml，按步骤 3 分别反应，测 OD 值，以 OD 值为纵坐标、浓度为横坐标作标准 曲线，计算回归方程； 分别查对标准曲线，或利用回归方程，计算出实验组与对照组实验前后对应的 -萘胺 浓度。 2.2.过氧化物酶活性的测定过氧化物酶活性的测定(比色法比色法) 提取酶液 现配反应混合液，即 30mlpH6.0 磷酸缓冲液加 28ul 愈创木酚加 19ul 双氧水（30%） 取 2 只比色杯，1 只加 3ml 反应液和 0.2ml 磷酸缓冲液调零。另取一只加 3ml 反应液和 0.2ml 酶液，立即计时开始测量。每隔 10s 读数一次，直至 OD470nm

4、1.000 计算酶活性大小：过氧化物酶活性（u/g FW*min）=A470*Vt/(W*Vs*0.01*t)四四 实验结果实验结果1.1.根系活力测定根系活力测定(gFW.h) -萘胺浓度05102030 OD510nm0.0940.2130.4310.5950.825实验组对照组 5 分钟后60 分钟后5 分钟后60 分钟后 OD 值0.3850.2920.3830.415 -萘胺浓度18.714.218.620.2051015202530354045123456a-萘胺浓度（ug/mL）OD510nm根系活力测定标准曲线 2.2.过氧化物酶活性过氧化物酶活性 时间(s)102030405

5、06070OD 值0.3340.3500.3640.3770.5930.4080.422五五 误差分析误差分析1.-1.-萘胺法测定根系活力萘胺法测定根系活力 由于标准曲线是由其他组做的，其误差就不在此分析了 由公式 C-萘胺萘胺= =(C1-C2)-(C3-C4) 其中 C1 指实验组 5 分钟后 -萘胺浓度， C2 指实验组 60 分钟后 -萘胺浓度 C3 指对照组 5 分钟后 -萘胺浓度 C4 指对照组 60 分钟后 -萘胺浓度 而由所得数据 C3-C4 为负值，可能是由人为误差或机器误差引起的。 误差有可能是以下原因： 仪器不干净；由于当时气温比较高，所以没有在恒温箱中保存，气温的变化也可能影响结 果； 实验组和对照组也存在时间差；实验是小组三人一起配合的，也存在个人的操作误差。 2.2.过氧化物酶活性过氧化物酶活性 首先是取材问题，由于是新鲜叶片，水分不可能完全擦干净，会存在误差； 其次离心后的上清液不可能完全转移； 另外酶保藏液解冻后可能未摇匀，或在测量前加底物与反应物的试管没有摇匀 还有两只比色杯由于不一样，肯定有误差； 并且 10s 后计一次数，也存在时间误差； 最后也是因为个人的操作误差和仪器的误差。