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1、王艳山奈酚抗胃癌及调节树突状细胞功能的实验研究山奈酚抗胃癌及调节树突状细胞功能的实验研究。 摘要背景胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其病死率较高。近几年来，中药抗肿瘤的研究已经成为国内外的研究热点。研究发现，黄酮类化合物能够有效的抑制肿瘤的发生发展，我校中西医结合实验室多年来致力于半枝莲药物的抗肿瘤的研究，发现半枝莲的有效成分能够通过多种机制抑制肿瘤的生长。本研究选取的研究对象为中药单体山奈酚，是半枝莲的活性成分之一。已有报道山奈酚具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡的作用，但山奈酚在胃癌中的研究较少见。目的l 、观察山奈酚对胃癌S G C 一7 9 0 1 细胞的增殖及凋亡方面的影响，并初步探
2、讨其机制；2 、探讨山奈酚对胃癌患者外周血来源的树突状细胞的功能的影响。方法结果M T T 法检测山奈酚对S G C 7 9 0 1 细胞的增殖的影响，流式细胞术检测山奈酚对S G C 一7 9 0 1 细胞凋亡的影响及其诱导凋亡的机制；酶联免疫吸附实验( E L I S A ) 及细胞免疫荧光实验检测山奈酚对胃癌细胞分泌和表达V E G F 的影响；流式细胞术检测山奈酚对S G C 7 9 0 1 细胞表面M H CI 类相关抗原( M I C A ) 的表达的影响；用淋巴细胞分离液( F i c o l l ) 分离胃癌患者，获得外周血单个核细胞( P B M C ) ，加入G M C S
3、 F 、I L 4 诱导出树突状细胞( D C ) ；流式细胞术检测山奈酚对D C 表面H L A D R 分子、C D 8 6 分子的表达的影响，以及对未成熟D C ( i D C ) 吞噬能力的影响。山奈酚能够抑制S G C 一7 9 0 1 细胞增殖：不同浓度的山奈酚，均能抑制S G C 7 9 0 1 细胞的增殖，与溶媒组比较有显著差异性( P 材料与方法1 2结果1 8 讨论2 4第二部分山奈酚对胃癌患者外周血分离单核细胞诱导来源的D C 活性的影响2 8 材料与方法2 8 结果3 1 讨论3 5结论4 1乌亲主盎“4 2致谢4 8攻读硕士期间完成的论文4 9扬州大学学位论文原创性声
4、明和版权使用授权书5 0王艳山奈酚抗胃癌及调节树突状细胞功能的实验研究引言胃癌( g a s t r i cc a n c e r ，G C ) 仍然是世界上最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内，胃癌在癌症病死率中排列第二位，在国内胃癌发病率与病死率仍居首位。目前胃癌的发生发展机制仍然不是很清楚，有研究表明，肿瘤的发生与细胞增殖分化及异常凋亡有关，抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡是化疗药物的重要作用机制之一。另外有研究报告，胃癌的发生发展与机体的抗原提呈细胞( a n t i g e np r e s e n t i n gc e l l ，A P C ) 不能有效地呈递胃癌抗原，导致T 细胞的活化受
5、阻有关。树突状细胞( D C ) 是目前发现功能最强大的A P C ，能有效地激活和诱导初始细胞的活化，引发机体的免疫应答和免疫耐受业3 。胃癌组织可以通过分泌各种细胞因子，如血管内皮生长因子( V E G F ) 、血管活性肠肽( V I P ) 等，引起D C 发功能生障碍，使得抗原递呈受阻，进而诱发胃癌的免疫逃逸。大量研究表明，D C 与胃癌的进展、分期、侵袭、转移和预后密切相关口3 。因此积极探寻增强D C 功能的药物或以D C 为基础的抗肿瘤疫苗进行胃癌的免疫治疗己成为近年的研究热点。近几年来，国内外对中药抗肿瘤的研究已成为热点，我校中西医实验室多年来致力于半枝莲黄酮类化合物抗肿瘤作
6、用的实验研究。在前期研究中发现，半枝莲能够有效抑制肿瘤血管生成，阻断内皮细胞迁移，下调V E G F 蛋白表达f 4 1 。半枝莲能够抑S U s i 8 0肉瘤的作用，并能增强荷瘤小鼠的免疫力，有下调V E G F 和上调D C 的作用1 5 1 。半枝莲黄酮类化合物有抑制体外肿瘤血管生成的作用，抑制肿瘤细胞血管生成相关因子的表达，抑制内皮细胞迁移、形成管样结构【6 】。我们已发现半枝莲活性成分中汉黄芩素能有效抑制人胃癌S G C 7 9 0 1 细胞的增殖，通过提高细胞内活性氧水平，增力 1 C a s p a s e 3 的表达等途径诱导细胞凋亡【7J 。山奈酚( K a e m p f
7、 e r o l ，分子结构式为C ，。H ，。0 。) 又名山奈黄酮醇、四羟基黄酮，属于黄酮类化合物，主要来源于姜科植物山奈的根茎，是半枝莲的有效活性成分之一，广泛存在于各种水果、蔬菜及中草药中，人们已经从茶叶、柚子、银杏叶、仙人掌、红景天以及其他绿色植物提取到它的纯品随。10 1 ，因其具有防癌、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒等多种功效而得到人们的关注。有研究报道山奈酚通过不同作用机制抑制结直肠癌细胞1 、人乳腺癌细胞n 、人宫颈癌H e L a 细胞n 明等多种肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞的凋亡。它作为最常见的黄酮类化合物，长期膳食能够降低患癌的风险。有学者称高摄入山奈酚可以减少晚期大肠腺瘤的
8、复发n4 | ，并且，相对于其他日常饮食的黄酮类物质，高摄入山奈酚还会明显降低患胰腺癌的风险n “。由此可以看出，山奈酚在预防肿瘤的发生、干预肿瘤的发展方面有重要作用。扬州大学硕士学位论文在胃癌的治疗上，如何控制胃癌的发生发展已经成为多年来的研究目标。胃癌的发生与细胞增殖分化、异常凋亡及机体的免疫功能受损有关。目前，临床上胃癌的治疗途径主要有放疗、化疗、手术治疗等，近几年胃癌的病死率虽然有所下降，但仍处于较高的水平。中药治疗因其具有低毒高效等功能，而在近几年来广受关注。本研究选取山奈酚为研究对象，探讨山奈酚是否同其他半枝莲活性药物一样具有抗肿瘤的作用。关于山奈酚是否可以抗胃癌的研究报道较少，因
9、此，本研究通过观察山奈酚对人胃癌S G C 7 9 0 1 细胞增殖及凋亡方面的影响，从而初步探讨山奈酚对胃癌S G C 一7 9 0 1 细胞的影响及其机制。同时初步研究山奈酚在调节免疫方面是否有一定的功效，主要观察其对胃癌患者外周血诱导来源的D C 的生物活性影响，探索其能否通过调节D C 的活性来发挥抗胃癌的作用。参考文献 1 张永亮化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡和相关因子的调控 J 国外医学：遗传学分册2 0 0 2 ，2 5 ( 3 ) ：1 2 卜1 2 6 2 B a l l e s t r e r oA ，B o yD ，M o r a nE ，e ta 1 I m m u n o
10、 t h e r a p yw i t hd e n d r i t i cc e l l sf o rc a - n c e r J 】A d vD r u gD e l i vR e v ，2 0 0 8 ，6 0 ( 2 ) ：1 7 3 1 8 3 3 W uY ，W a n gL ，Z h a n gY D e n d r i t i cc e l l sa sv e c t o r sf o ri m m u n o t h e r a p yo ft u m o ra n di t sa p p l i c a t i o nf o rg a s t r i cc a n c e
11、 rt h e r a p yl - J C e l lM o lI m m u n o l ，2 0 0 4 ，1 ( 5 ) ：3 5 1 - - 3 5 6 4 张妮娜，卜平，朱海杭等半枝莲抑制肿瘤血管生成的作用及机制研究【J 】癌症2 0 0 5 2 4 ( 1 2 ) ：1 4 5 9 1 4 6 3 5 宋增芳，廖月霞等半枝莲水提取物调节肿瘤V E G F D C 实验研究 J 实用临床医药杂志2 0 1 1 ，1 5 ( 1 9 ) ：卜5 6 徐敏，卜平等半枝莲黄酮类化合物对体外肿瘤血管生成的影响 J 世界华人消化杂志2 0 0 7 ，1 5 ( 2 0 ) ：2 2 1 5
12、2 2 1 9 7 吴克艳，肖炜明等汉黄芩素诱导人胃癌细胞凋亡中活性氧水平和半胱氨酸蛋白酶一3活性变化 J 中华消化杂志2 0 1 2 ，3 2 ( 7 ) ：4 7 7 - 4 7 9 8 邱鹰昆，窦德强等仙人掌的化学成分研究 J 中国药科大学学报2 0 0 5 ，3 6 ( 3 ) 2 1 3 2 1 5 9 顾少君，姚彤炜等银杏黄酮山奈酚的体外葡醛酸结合反应 J 中国药理学与毒理学杂志2 0 0 3 ，1 7 ( 6 ) ：4 5 卜4 5 6 1 0 刘瑞凝，王伟等雪白睡莲花中黄酮类成分抗氧化及拟缺血对神经细胞作用的研究王艳山奈酚抗胃癌及调节树突状细胞功能的实验研究二坠 J 世界科学技
13、术一中医药现代化基础研究2 0 0 6 ，8 ( 5 ) ：3 3 3 6 11 N a k a m u r aY ，C h a n gCC ，M o r i t ，e ta 1 A u g m e n t a t i o no fd i f f e r e n t i a t i o na n dg a pj u n c t i o nf u n c t i o nb yk a e m p f e r o li np a r t i a l l yd i f f e r e n t i a t e dc o l o nc a n c e rc e l l s J C a r c i n o
14、g e n e s i s ，2 0 0 5 ，2 6 ( 3 ) ：6 6 5 - 6 6 71 1 2 K a n gGY ，L e eER ，K i mJ H ，e ta 1 D o w n r e g u l a t i o no fP L K le x p r e s s i o ni nk a e m p f e r o l i n d u c e da p o p t o s i so f M C F - 7c e l l s 【J 】E u r J P h a r m a c o l ，2 0 0 9 ，6 11 ( 1 3 ) ：1 7 2 1 13 S z l i s z
15、k aE ，C z u b aZP ，J e m a s k ，et a l D i e t a r yf l a v o n o i d ss e n s i t i z e H e L ac e l l st ot u m o r n e c r o s i sf a c t o r r e l a t e da p o p t o s i s i n d u c i n gl i g a n d ( T R A I L ) 【J I n t J M o l S c i ，2 0 0 8 ，9 ( 1 ) ：5 6 6 4 1 4 B o b eG ，S a n s b u r yLB ，A l b e r tPS ，e ta 1
