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1、四、中草药化学成分一般鉴别方法四、中草药化学成分一般鉴别方法中草药主要来源于植物。植物的化学成分较复杂，有些成分是植物所共有的，如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖类、色素等。有些成分仅是某些植物所特有的，如生物碱类、甙类、挥发油、有机酸、鞣质等。各类化学成分均具有一定的特性，一般可由药材的外观、色、嗅、味等作为初步检查判断的手段之一。如药材样品折断后，断面不油点或挤压后有油迹者，多含油脂或挥发油；有粉层的多含淀粉、糖类；嗅之有特殊气味者，大多含有挥发油、香豆精、内酯；有甜奈者多含糖类；味若者大多含生物碱、甙类、苦味质；味酸者含有有机酸；味涩者多含有鞣质等等。中草药所含化学成分均为多类的混合物，分
2、析时常常互相干扰，不易得到正确结果。因此需根据中草药所含各种化学成分的溶解度、酸碱度、极性等理化性质，再用各类成分的鉴别反应加以鉴别。（一）鉴别注意事项（一）鉴别注意事项1根据各灰成分不同性质，选用适宜的溶剂提取，以保证等成分能被提取出来。2检品提取液的浓度应足以达到各该反应的灵敏度。3检品提取液的酸碱度（pH）值应不致影响鉴别反应中所需要的 pH 值。相差甚大时应事先调节。4提取液较深时，常易影响观察鉴别反应的效果，此时可适当稀释，或进一步提纯。5鉴别反应时应注意防止多类成分的相互干扰，以免出现假阳性，或颜色不正等情况。最好在化学鉴别的同时，做空白试验和对照试验（用已知含某类成分的中草药或纯
3、品做阳性对照）。6在鉴别试验中，如果某一类成分的几个鉴别反应结果不一致时（即有的呈阳性反应，有的呈阴性）则应进行全面分析。首先应注意呈阳性反应的试验是否属于该类成分的专一反应，否则应检查其他类成分能否产生该反应，从多方面加以判断。但也应注意，某些反应只能对某一类成分中的某个化学基团呈性反应，如检查黄酮类的盐酸镁粉试验，它只对黄酮类中的羟基黄酮类（黄酮醇类）反应明显，其余类的黄酮类则不甚明显，但也不能轻易否定不是黄酮类，为了避免孤立和片面的下结论，一定要全面考虑综合分析。中草药化学成分一般鉴别试验屯只是一个初步判断，最后确证尚需进一步提纯，以鉴定后才能予以肯定。（二）鉴别方法（二）鉴别方法蛋白质
4、、多肽、氨基酸（1）加热或矿酸试验：取检品的水溶液 1ml 于试管中，加热至沸或加 5盐酸，如发生混浊或有沉淀示含有水溶性蛋白质。（2）缩二脲试验：取检品的水溶液 1ml，加 10氧化钠溶液 2 滴，充分摇匀，逐渐加入硫酸铜试液，随加摇匀，注意观察，如呈现紫色或紫红色示可能含有蛋白质和氨基酸。凡蛋白质结构中含有两个或两个以上肽键（CONH）者均有此反应，能在碱性溶液中与 Cu2+生成仙络合物，呈现一系列的颜色反应，二肽呈蓝色，三肽呈紫色，加肽以上呈红色，肽键越多颜色越红。（3）茚三酮试验，取检品的水溶液 1ml，加入茚三酮试液 23 滴，加热煮沸 45 分钟，待其冷却，呈现红色棕色或蓝紫色（蛋
5、白质、胨类、肽类及氨基酸）。 氨基酸与茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被还原成仲醇，与所后成的氨及另一分子茚三酮缩合生成有蓝紫色的化合物。【注】茚三酮试剂主要是多肽和氨基酸的显色剂，反应在 1 小时内稳定。试剂溶液 pH 值以 57 为宜，必要时可加吡啶数滴或醋酸钠调整。此反应非常灵敏，但有个别氨基酸不能呈紫色，而呈黄色，如脯氨酸。（4）氨基酸薄层层析检出反应：吸附剂：硅胶 G。展开剂：（1）正丁醇：水（1：1）（2）正丁醇：醋酸：水（4：1：5）显色剂：0.5茚三酮丙酮溶液，喷雾后于 1100 烘箱放置 5 分钟，显蓝紫允或紫色。2皂甙（1）泡沫试验：取检品的水溶
6、液 2ml 于带塞试管中，用力振摇 3 分钟，即产生持久性蜂窝状泡沫（维持 10 分钟以上），且泡沫量不少于液体体积的 13。【注】常用的增溶剂吐温、司盘，振摇时均能产生持久性泡沫，要注意区别。（2）溶血试验：取试管 4 支，分别加入滤液 0.25、0.5、0.75 ml，然后依次分别加入生理盐水2.25、2.0、1.75、1.5ml，使每一个试管中的溶液都成为 2.5ml, 再将各试管加入 2的血细胞悬液2.5ml，振摇均匀后，同置于 370 水浴或 25270 的室温中注意观察溶血情况，一般观察 3 小时即可，或先滴红细胞于显微镜下，然后滴加检液看血细胞是否消失。如有溶血现象示正反应。【注
7、】鞣质对血红细胞有凝集作用，干扰溶血试验的观察，应事先除去（可用取胜酰胺粉吸附或用明胶沉淀）。检液应为中性溶液。（3）醋酐浓硫酸试验（Liebrmann Burchard 反应）取检品的水溶液置蒸发皿中，于水浴上蒸干，残渣加入少量冰醋酸使溶解，再加入醋酐浓硫酸（19：1）试液，呈现红紫色并变成污色绿色（甾类、三萜类成分或皂甙）（4）区别甾体皂甙和三萜皂甙：取带塞试管两支，各盛检品的水溶解 1 ml，1 支加 0.1N 盐酸溶液2ml，另一支加 0.1N 氢氧化钠溶液 2ml 用力振摇 1 分钟（需左右手交替振摇各半分钟），观察两管泡沫的多少，若两管泡沫体积相同或酸管多，示含三萜式皂甙；若加碱管
8、泡沫多于加酸管示含甾示含甾体皂甙。三萜皂甙为酸性皂甙在酸性水溶液中形成较稳定的泡沫；甾体皂甙为中性皂甙在碱笥溶液中能形成较稳定的泡沫。3糖、多糖或甙类（1）碱性酒石酸铜试液：取检品的水溶液 12ml（如为醇溶液须将醇蒸发除去），加入碱笥酒石酸铜试液 1ml，于沸水浴上加热 5 分钟，产生棕红色或砖红色氧化亚铜沉淀，示有还原糖。还原糖能使二价铜盐（蓝色）还原成氧化亚铜，醛糖的醛基氧化成羧基：【注】如检液呈酸性，应先碱化。此反应所产生的沉淀由于条件不同，其颜色也不同，质点上的呈黄色，质点大的呈红色。有保持性胶体存在时，也常产生黄色沉淀。职样品中含有其他醛、酮及还原较强的其他成分，或中划药制剂中附加
9、的抗氧剂、；葡萄糖等均可显阳性反应。（2） 萘酚试验（Molisch 紫环反应）：取检品的水溶液 1ml，加 5萘酚试液数滴振摇后，沿管壁滴入 56 滴浓硫酸，使成两液层，待 23 分钟后，两层液面出现紫红色环（糖、多糖或甙类）。多糖类遇浓硫酸被水解成单糖，单糖被浓硫酸脱水闭环，形成糠醛类化合物，在浓硫酸存在下与 萘酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。【注】甙的分子结构中含有糖基，一般属于单糖类，如葡萄糖，鼠李糖、半乳糖，但也有含二分子糖（双糖）或多分子糖（多糖）。在上述反应条件下，甙被水解成单糖，因此甙萘酚试验，系分子中糖部分的反应。由于此反应较为灵敏，如有微量滤纸纤维或中草药粉末存在于溶
10、液中，都能产生上述反应。故滤过时应加注意。（3）多糖的确证试验：取检品的水溶液 5ml 于水 蒸发至干，加入 1ml 蒸馏水，再加入乙醇 5ml，如出现沉淀，滤过收集后用少量热乙醇洗涤，再将沉淀物溶于 3ml 蒸馏水中，做下例试验。碘试验：取检品的不溶液 1ml，加碘试液 1 滴，观察颜色变化，如呈蓝黑色为地衣糖；紫黑色为糊精；蓝色加热消失，冷后蓝色再现为淀粉。多糖水解：取检品的水溶液 1ml，加入稀盐酸 5 滴，置沸水浴中加热 1015 分钟，然后用 10氢氧化钠液中和至中性，再加新配制的碱性酒石酸铜试淮 4 滴，另取检液 1ml，不加酸水解直接加入上述试液 4 滴，两管同置水浴上煮沸 56
11、 分钟。如果水解后生成棕红色常常物的量比未经水解的多，则示有多糖。多糖水解后产生单糖，利用单糖的还原性，使铜离子还原成氧化亚铜。4鞣质及酚类（1）三氯化铁试验：取检品的水溶液 1ml，加三氯化铁试液 12 滴，呈现绿色、污绿色、蓝黑色或暗紫色（可水解鞣质显蓝一蓝黑色，缩合鞣显绿色一污绿色）。鞣质均是多羟基酚的衍生物，即多元酚，能和三价铁离子发生颜色反应生成复杂的络盐。【注】此反应如遇有矿酸或有机酸、醋酸盐等存在，能阻碍颜色的生成。硝基酚类对三氯化铁试剂无明显反应。（2）明胶试验：取检品的水溶液 1ml，加氯化钠明溶液 23 滴，即生成白色沉淀物。鞣质有凝固蛋白的性能。（3）溴试验：取检品的水溶
12、液 1ml，加溴试液 12 滴，生成白色或沉淀物，示可能含有酚或儿茶酚鞣质。【注】过多的溴会阻碍鞣质的沉淀，因此溴水不宜多加。（4）香草醛一酸试验：取检品的水溶液点于滤纸片上，干后，喷雾或滴加香草醛一盐酸试液，呈现红色斑点（多元酚类物质）。（5）鞣质、酚类薄层层析检出反应：吸附剂：聚酰胺；硅胶；硅胶；石膏：水（5：1：7）调成状，涂成薄板，1050 烘干 45 分钟。展开剂：乙醇：醋酸（100：2）；正丁醇：乙酸乙酯：水（5：4：1）；苯：甲醇（95：5）。显色剂：10三氯化铁溶液；1三氯化铁乙醇溶液与 1铁氰化钾水溶液（1：1）显蓝一紫色斑点。5黄酮及其甙类（1）盐酸一镁（或锌）粉试验：取检
13、品的乙醇溶液 1ml，加放少量镁粉（或锌粉），然后加浓盐酸45 滴，置沸水浴中加热 23 分钟，如出现红色示有游离黄酮类或黄酮甙（以同法不加镁或粉做一对照，如两管都显红色则有花色素存在。如继续加碳酸试液使成碱笥即变成紫色双转变为蓝色，即证明含花色素）。黄酮类的乙醇溶液，在盐酸存在的情况下，能被镁粉还原，生成花色甙元而呈现红色或紫色反应（个别为淡黄色、橙色、紫色或蓝色）。这是由于酮类化合物分子中含有一个碱性氧原子，致能溶于稀酸中被还原成带四价的氧原子即锌盐。本法是鉴别黄酮类的一个反应。但花色素本身在酸性下（不需加镁粉）呈红色，应加以区别。【注】此反庆仅在化学结构中，第三位上带羟基的酮醇类显色较明
14、显，而其它黄酮烷酮类均不甚明显。因此试验呈阴性反庆是不能做出否定的结论，尚需结合其他实验再做结论。试验应在醇中进行，水分多会影响颜色的生成。此反庆较慢，有时需置水浴上加热，以促使反应的进行。（2）荧光试验：三氯化铝试验：取检品的乙醇溶液点于滤纸片上（干后再点 1 次，使其浓度庥中），干后，喷雾1三氯化铝乙醇试液，在紫外光灯下观察，呈现黄色、绿色、橙色等荧光为黄酮类；呈现天蓝色或黄绿色；荧光，则为二氢黄酮类。这是区别二氢黄酮类化合物的一种鉴别反应。硼酸丙酮枸橼酸丙酮试验：取检品的乙醇溶液 1ml，在沸水浴上蒸干加入饱和硼酸丙酮溶液及 10枸橼酸丙酮溶液各 0.5ml，蒸去丙酮后，在紫外光灯下观察
15、，管内呈现强烈的绿色荧光（黄酮或其甙类）。（3）碱液试验：取检品的乙醇溶液点于滤纸片上（干后，再点一次，使其溶液集中），干后，喷1碳酸钠溶液或在氨蒸气中熏几分钟，呈现亮黄、绿或橙黄色。如将氨气熏过的滤纸露置空气中，颜色逐渐裉去而变为原有的颜色（黄酮或其甙类）。试剂一NH3AICI3Na2CO3光线ViS.U.VViS.U.VViS.U.VViS.U.V化合物黄酮淡黄暗棕、红棕、黄棕黄亮黄淡黄亮黄黄酮醇淡黄亮黄、黄绿、棕 黄亮黄、黄绿、绿 黄黄、黄棕、暗蓝异黄酮无色淡黄、紫无色淡黄、紫无色淡绿儿茶精无色无色无色淡蓝黑无色二氢黄酮无色无色*无色无色、淡黄、淡绿无色淡黄、绿花色甙红、橙紫深红、橙紫、
16、淡棕蓝暗蓝查耳酮黄棕、黑、黄棕黄、橙、红橙、红、紫黑黄、橙橙*、棕、红橙、蓝红*示有荧光示在短波紫外线光下为黑色 ViS.系可风光 U.V 系紫外光6蒽醌及其甙类 取检品的乙醇溶液 10ml，蒸去乙醇，残渣加 5氢氧化钠溶液 23ml，在沸水中加 15 分钟，冷后滤过，滤液加稀盐酸酸化，加.提取，取.提取液做下列检查：（1）碱液试验：取上述.溶液，加等量 1氢氧化钠溶液，摇匀，水层呈现红色，加入少许 3过氧化氢溶液，在沸水浴中加热 4 分钟，红色不裉，当加酸酸化后，红色消失。加碱碱化后红色又出现（蒽醌类化合物反应）。1，8 一二羟基蒽醌的酚羟基遇氢氧化钠生成钠盐，而呈现红色，遇酸显黄色。【注】蒽醌和二蒽酮与碱液不显红色，只呈黄色，但以氧化羟基蒽醌后遇碱即显红色。（2）醋酸镁试验：取上述醚溶液 1ml，蒸去.，残渣加入乙醇 1ml 溶解，加入 1醋酸镁甲醇溶液 3滴，显红色（如显橙黄色可能为二氢蒽醌）。羟基蒽醌类与醋酸镁甲醇溶液反应可
