《实验三 化学因子对细菌生长的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验三 化学因子对细菌生长的影响（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验实验三三 化学因子化学因子对细对细菌生菌生长长的影响的影响实验实验目的目的 1、了解化学因素、了解化学因素对对微生物生微生物生长长的影响，学会用的影响，学会用单单因子分析法确定化学因子影响因子分析法确定化学因子影响微生物生微生物生长长的条件。的条件。2、学会分光光度、学会分光光度计计法法测测定微生物定微生物细细胞生胞生长长数。数。3、学会用、学会用连续连续法法测测定定细细菌的生菌的生长长曲曲线线。 。实验实验原理原理1、微生物生、微生物生长长受到多种因素的影响，其中一些化学因素影响到受到多种因素的影响，其中一些化学因素影响到发发酵液成分，同酵液成分，同时时可能改可能改变变微生物的代微生物的
2、代谢谢途径。本途径。本实验实验采用向培养液中加入一定采用向培养液中加入一定浓浓度中草度中草药药煎煎剂剂， ，观观察枯草芽察枯草芽孢孢杆菌生杆菌生长长情况。情况。2、一定量的微生物接种到合适的新、一定量的微生物接种到合适的新鲜鲜液体培养基中，在适宜的温度下培养，以菌液体培养基中，在适宜的温度下培养，以菌数的数的对对数数为纵为纵坐坐标标，以生，以生长时间为长时间为横坐横坐标标，做出的曲，做出的曲线线呈生呈生长长曲曲线线。 。实验实验材料材料枯草杆菌枯草杆菌悬悬液（培养液（培养 6 小小时时）、牛肉膏蛋白）、牛肉膏蛋白胨胨液体培养基、液体培养基、500ml 三角瓶、三角瓶、5ml 无无菌吸管、无菌生
3、理菌吸管、无菌生理盐盐水、水、计计数板、数板、显显微微镜镜、恒温、恒温摇摇床。床。实验实验方法方法1、 中草中草药药煎液的制煎液的制备备：准确称取扶正解毒散：准确称取扶正解毒散 200g，分，分别别按按 1:5 加入加入 1000ml 蒸蒸馏馏水浸泡水浸泡 1 小小时时，加，加热热煎煮（武火煮沸，文火保持煎煮（武火煮沸，文火保持 90min）后，用）后，用 8 层纱层纱布布过滤过滤得得滤滤液。然后再取液。然后再取滤滤渣加渣加 500mL 蒸蒸馏馏水浸泡水浸泡 30min 后煎煮后煎煮 30min 后，后，过滤过滤得得滤滤液，液，两次两次滤滤液混合后，加液混合后，加热浓缩热浓缩至至 200mL，
4、定性，定性滤纸过滤滤纸过滤，将此，将此浓浓度度视为视为 100%，煎，煎煮煮过过程中不断程中不断搅搅拌使拌使药药液混匀。液混匀。2、 试验试验分分组组与含不同与含不同浓浓度中草度中草药药的液体培养基的制的液体培养基的制备备按表按表 2.1 配制不同配制不同浓浓度的中草度的中草药药液体培养基，每个液体培养基，每个浓浓度分装至度分装至 2 个个 250mL三角瓶中，每个三角三角瓶中，每个三角烧烧瓶装量瓶装量为为 40ml.121加加压灭压灭菌菌 20min，冰箱保存，冰箱保存备备用。用。表表 2.1 不同不同浓浓度中草度中草药药液液体培养基的配方液液体培养基的配方 （ （单单位：位：mL） ）组别
5、组别和中草和中草药药液液浓浓度度配制配制总总量量 ml加加药药液量液量 ml加水量加水量 ml浓缩浓缩培养基量培养基量 ml对对照照组组 0%2000100100第一第一组组 5%2001090100第二第二组组 10%2002080100第三第三组组 15%20030701003、接种接种用无菌接种技用无菌接种技术术接种接种 3ml 已培养已培养 6 小小时时的菌的菌悬悬液于装有液于装有 40ml 液体培养基的液体培养基的摇摇瓶中，每瓶中，每组组接种接种 2 个个摇摇瓶，震瓶，震荡荡使菌种混匀。使菌种混匀。2、培养、培养将接种的将接种的摇摇瓶置于瓶置于摇摇床上，床上，37 度恒温培养，度恒温
6、培养，摇摇床床转转速速为为 180-200rpm 培养，培养培养，培养时间为时间为 24 小小时时。 。 3、生、生长长量量测测定定于培养于培养结结束后，从培养液中吸取束后，从培养液中吸取 2ml 至离心管，用生理至离心管，用生理盐盐水洗水洗涤涤三次，最后用三次，最后用1.8ml 生理生理盐盐水将菌体混匀，以生理水将菌体混匀，以生理盐盐水水为对为对照，照，测测定定 OD600 值值。每个三角。每个三角烧烧瓶瓶取三个取三个样样。洗。洗涤时涤时离心机离心机转转速速为为 3000rpm,离心离心时间时间 5min/次。次。 实验结实验结果果记录记录数据数据记录记录瓶瓶 1 透光率透光率瓶瓶 2 透光率透光率组别组别和中草和中草药药液液浓浓度度样样 1样样 2样样 3样样 1样样 2样样 3对对照照组组 0%第一第一组组 5%第二第二组组 10%第三第三组组 15%实验实验用品用品250ml 无菌三角瓶无菌三角瓶 8*5+2（每瓶含（每瓶含 40ml 培养基）、培养基）、5ml 无菌吸管无菌吸管 5*10 支、干燥离支、干燥离心管心管 5*10 支，可支，可调转调转速速摇摇床三台，离心机床三台，离心机 3 台，紫外分光光度台，紫外分光光度计计 2 台。台。
