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1、20-05-201112011 Waters Corporation1Ultra Performance LC 实验技术与仪器维护实验技术与仪器维护实验技术与仪器维护实验技术与仪器维护Waters Solution Center 袁汉成袁汉成袁汉成袁汉成, , , ,黄倩黄倩黄倩黄倩2011.5.18 / 20 / 242011 Waters Corporation2内容提要内容提要内容提要内容提要? 对对对对UPLC理念的理解理念的理解理念的理解理念的理解ACQUITY UPLC 7年回顾年回顾年回顾年回顾要点要点要点要点: 如何实现小颗粒填料的益处如何实现小颗粒填料的益处如何实现小颗粒填料
2、的益处如何实现小颗粒填料的益处? ACQUITY UPLC实验技术要点实验技术要点实验技术要点实验技术要点仪器启动与操作注意事项仪器启动与操作注意事项仪器启动与操作注意事项仪器启动与操作注意事项采样参数设置采样参数设置采样参数设置采样参数设置常见问题与故障排除常见问题与故障排除常见问题与故障排除常见问题与故障排除20-05-201122011 Waters Corporation32011 Waters Corporation420-05-201132011 Waters Corporation52011 Waters Corporation67年来不断丰富和完善年来不断丰富和完善年来不断丰富
3、和完善年来不断丰富和完善UPLC 扩展应用领域扩展应用领域扩展应用领域扩展应用领域20-05-201142011 Waters Corporation72010年推出年推出年推出年推出ACQUITY UPLC H-Class 系统系统系统系统? 四元溶剂管理器四元溶剂管理器四元溶剂管理器四元溶剂管理器 (QSM)? 样品管理器样品管理器样品管理器样品管理器 流路通过进样针流路通过进样针流路通过进样针流路通过进样针 (SM-FTN)? 色谱柱柱温箱色谱柱柱温箱色谱柱柱温箱色谱柱柱温箱 (CH-A)? 支持所有现有的支持所有现有的支持所有现有的支持所有现有的 ACQUITY 检测器检测器检测器检测
4、器PDA 和和和和 PDAeTUVFLRELSDSQD 和和和和 TQD2011 Waters Corporation820-05-201152011 Waters Corporation9UPLC 溶剂管理器对比溶剂管理器对比溶剂管理器对比溶剂管理器对比ACQUITY UPLCACQUITY UPLC H-Class溶剂管理器设计溶剂管理器设计溶剂管理器设计溶剂管理器设计二元二元二元二元 2 solvents四元四元四元四元 4 solvents溶剂总数溶剂总数溶剂总数溶剂总数Solvents A1或或或或A2 和和和和 B1 或或或或B2Solvents A, B, C, D (Solve
5、nts D 1-6 ,使用使用使用使用 SSV 选件选件选件选件)溶剂混合模式溶剂混合模式溶剂混合模式溶剂混合模式高压混合高压混合高压混合高压混合低压混合低压混合低压混合低压混合系统体积系统体积系统体积系统体积400%在在在在 UPLC分离中最大化分离中最大化分离中最大化分离中最大化: 超低扩散系统超低扩散系统超低扩散系统超低扩散系统 小颗粒小颗粒小颗粒小颗粒 (5%的强酸的强酸的强酸的强酸2011 Waters Corporation32推荐使用的添加剂推荐使用的添加剂推荐使用的添加剂推荐使用的添加剂/ / / /改性剂改性剂改性剂改性剂? 0.2% 甲酸甲酸甲酸甲酸? 0.1% TEA?
6、10mM 磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液? 50mM 铵缓冲盐铵缓冲盐铵缓冲盐铵缓冲盐? 0.1% EDTA? 0.1% TFA? 0.1% 七氟丁酸七氟丁酸七氟丁酸七氟丁酸? 10mM 碳酸氢铵碳酸氢铵碳酸氢铵碳酸氢铵? 50mM 乙酸铵乙酸铵乙酸铵乙酸铵20-05-2011172011 Waters Corporation33使用使用使用使用SM的一般建议的一般建议的一般建议的一般建议? 使用缺省条件使用缺省条件使用缺省条件使用缺省条件 10 L loop 和和和和 PLUNO (Partial Loop Uses Needle Overfill,部分定量环使用针溢出部分
7、定量环使用针溢出部分定量环使用针溢出部分定量环使用针溢出)进样方式进样方式进样方式进样方式, 在适合在适合在适合在适合2.1 x 50 和和和和 2.1 x 100 mm ACQUITY 柱的进柱的进柱的进柱的进 样体积范围内将得到良好的峰形样体积范围内将得到良好的峰形样体积范围内将得到良好的峰形样体积范围内将得到良好的峰形,良好的回收率良好的回收率良好的回收率良好的回收率, 良好的线性良好的线性良好的线性良好的线性? 对于每一种进样方式和定量环对于每一种进样方式和定量环对于每一种进样方式和定量环对于每一种进样方式和定量环,保持在推荐的限度以内保持在推荐的限度以内保持在推荐的限度以内保持在推荐
8、的限度以内? 若对最佳精密度和最佳准确度有严格要求时若对最佳精密度和最佳准确度有严格要求时若对最佳精密度和最佳准确度有严格要求时若对最佳精密度和最佳准确度有严格要求时,使用满环进样使用满环进样使用满环进样使用满环进样 (Full Loop) ? 当需严格控制样品量消耗时当需严格控制样品量消耗时当需严格控制样品量消耗时当需严格控制样品量消耗时,使用使用使用使用Partial Loop (压力辅助压力辅助压力辅助压力辅助) 进样方式进样方式进样方式进样方式2011 Waters Corporation34使用使用使用使用FTN的一般建议的一般建议的一般建议的一般建议? 使用使用使用使用90:10=
9、乙腈乙腈乙腈乙腈:水作为水作为水作为水作为Wash Solvent(强洗强洗强洗强洗)溶剂溶剂溶剂溶剂? 使用使用使用使用10:90=乙腈乙腈乙腈乙腈:水作为水作为水作为水作为Purge Solvent(弱洗弱洗弱洗弱洗)溶剂溶剂溶剂溶剂20-05-2011182011 Waters Corporation35UPLC SM不同进样方式的比较不同进样方式的比较不同进样方式的比较不同进样方式的比较项目项目项目项目满环满环满环满环 (Full Loop)部分环针溢出部分环针溢出部分环针溢出部分环针溢出 (PLUNO)部分环部分环部分环部分环,压力辅助压力辅助压力辅助压力辅助 (Partial Lo
10、op, Pressure Assist)优点优点优点优点最重现的峰面积最重现的峰面积最重现的峰面积最重现的峰面积进样体积可变进样体积可变进样体积可变进样体积可变只是用户指定的进样体积只是用户指定的进样体积只是用户指定的进样体积只是用户指定的进样体积缺点缺点缺点缺点需要较大的样品体积需要较大的样品体积需要较大的样品体积需要较大的样品体积需要比进样体积多需要比进样体积多需要比进样体积多需要比进样体积多 3uL 的样品的样品的样品的样品峰面积重现性最小峰面积重现性最小峰面积重现性最小峰面积重现性最小样品耗用样品耗用样品耗用样品耗用环体积环体积环体积环体积 x 溢出因子溢出因子溢出因子溢出因子 (Ov
11、erFilles)用户指定的进样体用户指定的进样体用户指定的进样体用户指定的进样体 积积积积 + 3uL 的样品的样品的样品的样品只是用户指定的进样体积只是用户指定的进样体积只是用户指定的进样体积只是用户指定的进样体积适用的定量适用的定量适用的定量适用的定量 环环环环可用于所有的定量环可用于所有的定量环可用于所有的定量环可用于所有的定量环适用于适用于适用于适用于 2-10uL 的定量环的定量环的定量环的定量环适用于适用于适用于适用于 20 到到到到 50uL定量定量定量定量 环环环环,不推荐用于小定量环不推荐用于小定量环不推荐用于小定量环不推荐用于小定量环适用的进样适用的进样适用的进样适用的进
12、样 体积体积体积体积100% 环体积环体积环体积环体积, 最少最少最少最少: 3X前后各前后各前后各前后各4uL (默认值默认值默认值默认值)进样体积进样体积进样体积进样体积: 25- 75% 环体积环体积环体积环体积2011 Waters Corporation36UPLC SM进样方式总汇进样方式总汇进样方式总汇进样方式总汇? 满定量环进样满定量环进样满定量环进样满定量环进样当准度当准度当准度当准度/回收率和精度是主要目标时回收率和精度是主要目标时回收率和精度是主要目标时回收率和精度是主要目标时进样方式的第一选择进样方式的第一选择进样方式的第一选择进样方式的第一选择? 部分定量环进样部分定
13、量环进样部分定量环进样部分定量环进样 针溢出针溢出针溢出针溢出为宽范围样品提供最好的部分定量环进样准度为宽范围样品提供最好的部分定量环进样准度为宽范围样品提供最好的部分定量环进样准度为宽范围样品提供最好的部分定量环进样准度, 精度和线性精度和线性精度和线性精度和线性o 推荐使用推荐使用推荐使用推荐使用 2, 5 和和和和10 L 定量环定量环定量环定量环部分定量环进样是第一选择部分定量环进样是第一选择部分定量环进样是第一选择部分定量环进样是第一选择? 部分定量环进样部分定量环进样部分定量环进样部分定量环进样 压力辅助压力辅助压力辅助压力辅助当分析时间是主要目标和样品体积有限时当分析时间是主要目
14、标和样品体积有限时当分析时间是主要目标和样品体积有限时当分析时间是主要目标和样品体积有限时当进样体积非常大时当进样体积非常大时当进样体积非常大时当进样体积非常大时o 推荐使用推荐使用推荐使用推荐使用 20 和和和和 50 L 定量环定量环定量环定量环20-05-2011192011 Waters Corporation37对于某一固定的定量环设计对于某一固定的定量环设计对于某一固定的定量环设计对于某一固定的定量环设计, 部分定量环进样模式的准度和部分定量环进样模式的准度和部分定量环进样模式的准度和部分定量环进样模式的准度和 回收率取决于体积参数回收率取决于体积参数回收率取决于体积参数回收率取决
15、于体积参数/范围以确保最大准确度范围以确保最大准确度范围以确保最大准确度范围以确保最大准确度/回收率回收率回收率回收率推荐的定量环和进样体积推荐的定量环和进样体积推荐的定量环和进样体积推荐的定量环和进样体积定量环进样体积范围定量环进样体积范围定量环进样体积范围定量环进样体积范围样品进样体积样品进样体积样品进样体积样品进样体积 (L)定量环体积定量环体积定量环体积定量环体积部分定量环方式部分定量环方式部分定量环方式部分定量环方式2 L5 L10 L20 L针溢出针溢出针溢出针溢出进样范围进样范围进样范围进样范围(L)0.2 1.50.5 - 3.81.0 - 7.52.0 15.0压力辅助压力辅
16、助压力辅助压力辅助进样范围进样范围进样范围进样范围(L)N.R.N.R.2.0 5.02.0 - 10.0满定量环方式满定量环方式满定量环方式满定量环方式2 L5 L10 L20 L压力辅助压力辅助压力辅助压力辅助进样范围进样范围进样范围进样范围(L)251020标准标准标准标准R2 0.999面积面积面积面积 % RSD 1.02011 Waters Corporation38使用使用使用使用SM的一般建议的一般建议的一般建议的一般建议? 当循环周期成为一个问题时当循环周期成为一个问题时当循环周期成为一个问题时当循环周期成为一个问题时,使用提前进样使用提前进样使用提前进样使用提前进样(Load Ahead) 方式方式方式方式? 当更换过弱洗针溶剂以及定量环和进样针时当更换过弱洗针溶剂以及定量环和进样针时当更换过弱洗针溶剂以及定量环和进样针时当更换过弱洗针溶剂以及
