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1、高中生物实验【全】.txt 爱人是路,朋友是树,人生只有一条路,一条路上多棵树,有钱 的时候莫忘路,缺钱的时候靠靠树,幸福的时候别迷路,休息的时候靠靠树!实验一:使用 高倍显微镜观察几种细胞 一、实验目的: 1、学会如何使用显微镜观察细胞; 2、了解细胞的结构; 3、学会制作临时装片。 二、实验材料:(实验材料可换)松针、动物血液、动物神经细胞永久装片 三、实验用具: 载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜(物镜 5X、10X、40X) 四、方法步骤: 1、制作松针的临时切片: (1)取干净的载玻片一个平置于试验台上,用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。 (2)将土豆切成条状(截面
2、约:0.5X0.5cm)取两条,将一根松针夹在两个土豆条之间,用 刀片削成尽量薄的薄片,削时,手腕不动,靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取 较薄的切片,置于载玻片的水滴上。 (3)从一侧轻轻盖上盖玻片,不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴,即完 成临时切片的制作。 2、观察切片: (1)取出显微镜,置于试验台上靠左的位置,打开光源。 (2) 将上步制作好的切片置于显微镜的载物台上,调整载物台位置,使盖玻片对准光源。 (3)使用 5X 物镜观察切片,使松针切片在视野中心,换成 10X 物镜,观察松针叶面横切结 构。 (4)换成 40X 物镜观察,注意细胞及细胞内物质结构,画图。
3、 3、 动物血液临时装片的制作及观察(除了不用切片,其他类似) 4、 动物神经细胞永久装片的观察。 五、考点提示: 1、松针的叶面结构是什么样的? 2、动物细胞的结构是什么样的?与植物细胞又什么不同? 3、显微镜的物镜倍数愈大,视野的亮度如何?物体的大小如何? 4、如何调节焦距? 5、如何才能使切片尽量的薄?切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。实验二:检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 一、实验目的: 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,阐明实验原理颜色反应,识记和区 分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色,初步掌握鉴定上述化合 物的基本方法,学会描述实验
4、现象,掌握 NaOH 溶液和 CuSO4 溶液的使用方法。 二、实验原理: 某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物,产生特定的颜色反应。 1、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多,有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的 分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原糖;蔗糖分子内没有,为非还原 糖。实验中所用的斐林试剂,只能鉴定生物组织中可溶性还原糖,而不能鉴定可溶性非还原 糖。可溶性还原糖(如葡萄糖、果糖、麦芽糖)与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的 Cu 2O 沉 淀。如:葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH 加热 葡萄糖酸 + Cu 2O(砖红色)+ H 2O 即 Cu 2+被还原
5、成 Cu 2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。 用斐林试剂鉴定还原糖时,溶液变化过程为:浅蓝色棕色砖红色沉淀 淀粉遇碘变蓝色(直链)或紫(红)色(支链) 。 2、脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分,不 溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上,脂类属于脂肪酸的酯或与这 些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。 在病理检验中,脂类染色法最常用以证明脂肪变性,脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使 用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹,苏丹,苏丹黑及油红 O 等。脂肪被染色, 实际上是苏丹
6、染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液 态时,对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理,适当提高温度(37-60)对组织切片 染色效果是有好处的。 脂类染色,用冰冻或石蜡切片,以水溶性封固剂封固,如甘油、明胶和阿拉伯糖胶等。 脂肪可以被苏丹染液染成橘黄色或橙红色(或被苏丹染液染成红色) ,胆脂素呈淡红色, 脂肪酸不着色,细胞核呈蓝色。 3、蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应。 (蛋白质分子中含有很多肽键,在碱性 NaOH 溶液中能与双缩脲试剂中的 Cu2+作用,产生紫色反应。 )三、实验材料: 1、做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为白色的植物组织,如苹
7、果、梨。 (因为 组织的颜色较浅,易于观察。 )经试验比较,颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘 蓝叶、白萝卜。 2、做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡 34 小时(也可用蓖麻种子) 。 3、做蛋白质的鉴定实验,可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。 4、淀粉的鉴定:马铃薯匀浆。 四、实验用具:双面刀片、试管(最好用刻度试管) 、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、 滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜 五、实验试剂: 1斐林试剂(包括甲液:质量浓度为 0.1g/ mL NaOH 溶液和乙液:质量浓度为 0.05g/ mL C
8、uSO4 溶液) 2苏丹或苏丹染液 3双缩脲试剂(包括 A 液:质量浓度为 0.1g/ mL NaOH 溶液和 B 液:质量浓度为 0.01g/ mL CuSO4 溶液) 4体积分数为 50%的酒精溶液 5碘液 6蒸馏水 六、方法步骤:一、可溶性糖的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 1. 制备组织样液。 (去皮、切块、研磨、过滤)苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量 高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖。 2. 取 1 支试管,向试管内注入 2mL 组织样液。 3. 向试管内注入 1mL 新制的斐林试剂,振荡。应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、 储存,使用前
9、才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂;切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定,甲、乙液混 合保存时,生成的 Cu ( OH ) 2 在 70 900C 下分解成黑色 CuO 和水; 甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应,无 Cu OH 生成。 4. 试管放在盛有 50-650C 温水的大烧杯中,加热约 2 分钟,观察到溶液颜色:浅蓝色 棕色 砖红色(沉淀)最好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管 口不朝向实验者。 也可用酒精灯对试管直接加热。防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤;缩短实验时间。 二、脂肪的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 花生
10、种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片,将薄片放在载玻片的水滴中,用吸水纸吸去装片 中的水。干种子要浸泡 34 小时,新花生的浸泡时间可缩短。因为浸泡时间短,不易 切片;浸泡时间过长,组织较软,切片不易成形。切片要尽可能薄些,便于观察。 在子叶薄片上滴 23 滴苏丹或苏丹染液,染色 1 分钟。染色时间不宜过长。 用吸水纸吸去薄片周围染液,用 50%酒精洗去浮色,吸去酒精。 酒精用于洗去浮色,不 洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂 肪颗粒溶解成油滴。 用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上 12 滴蒸馏水,盖上盖玻片。 滴上清水可防止盖 盖玻片时产生气泡。 低倍镜
11、下找到花生子叶薄片的最薄处,可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。 装片不宜久放。时间一长,油滴会溶解在乙醇中。 三、蛋白质的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 制备组织样液。 (浸泡、去皮研磨、过滤。 ) 黄豆浸泡 1 至 2 天,容易研磨成浆,也可购新鲜豆浆以 节约实验时间。 鉴定。加样液约 2ml 于试管中,加入双缩脲试剂 A,摇匀;再加入双缩脲试剂 B 液 34 滴, 摇匀,溶液变紫色。A 液和 B 液也要分开配制,储存。鉴定时先加 A 液后加 B 液。CuSO4 溶液不能多加。 先加 NaOH 溶液,为 Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B 液 混装或同时加入
12、,会导致 Cu2+变成 Cu ( OH ) 2 沉淀,而失效。 否则 CuSO4 的蓝色会遮盖反应的真实颜色。 可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀释。如果稀释不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并且试管也不易洗干净。 附:淀粉的检测和观察 用试管取 2ml 待测组织样液,向试管内滴加 2 滴碘液,观察颜色变化。碘液不要滴太多 以免影响颜色观察 七、考点提示: 1、常见还原性糖与非还原性糖有哪些? 答:葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、 蔗糖、纤维素都是非还原性糖。 2、还原性糖植物组织取材条件? 答:含糖量较高、颜色为白色或近于白色,如:苹果、
13、梨、 白色甘蓝叶、白萝卜等。 3、研磨中为何要加石英砂?不加石英砂对实验有何影响? 答:加石英砂是为了使研磨更充 分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少,使鉴定时溶液颜色变化不明显。 4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法?混合的目的?为何要现混现用? 答:混合后使用;产 生氢氧化铜;氢氧化铜不稳定。 5、还原性糖中加入斐林试剂后,溶液颜色变化的顺序为? 答:浅蓝色 棕色 砖红色。 6、花生种子切片为何要薄? 答:只有很薄的切片,才能透光,而用于显微镜的观察。 7、转动细准焦螺旋时,若花生切片的细胞总有一部分清晰,另一部分模糊,其原因一般是 什么? 答:切片的厚薄不均匀。 8、脂肪鉴定中乙醇作用?
14、 答:洗去浮色。 9、双缩脲试剂 A、B 两液是否混合后用?先加 A 液的目的怎样通过对比看颜色变化? 答: 不能混合;先加 A 液的目的是使溶液呈碱性;先留出一些大豆组织样液做对比。实验三:观察 DNA 和 RNA 在细胞中的分布 一、实验原理: 1、真核细胞的 DNA 主要分布在细胞核内,RNA 主要分布在细胞质中。 2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对 DNA 和 RNA 的亲和力不同,甲基绿对 DNA 亲和力强,使 DNA 显现出绿色,而吡罗红对 RNA 的亲和力强,使 RNA 呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混 合染色剂将细胞染色,可同时显示 DNA 和 RNA 在细胞中的分布。 3、盐酸的
15、作用 盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输; 盐酸使染色体中的 DNA 与蛋白质分离,便于 DNA 与染色剂的结合 二、实验材料:人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞 三、实验用具:大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、 石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜 四、方法步骤: 1、取材 滴:在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为 0.9%的 NaCl 溶液; 刮:用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下; 涂:将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中; 烘:将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。 2、水解 解:将烘干的载玻片放入装有 30ml 质量分数为 8%的盐酸的
16、小烧杯中,进行材料的水解; 保:将小烧杯放入装有 30温水的大烧杯中保温 5 分钟。 3、冲洗涂片 冲:用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片 10 秒钟; 吸:用吸水纸吸去载玻片上的水分。 4、染色 染:用 2 滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上,染色 5 分钟; 吸:吸去多余染色剂; 盖:盖上盖玻片。 5、观察 低:在低倍物镜下,寻找染色均匀,色泽浅的区域,移至视野中央,将物像调节清晰; 高:转到高倍物镜,调节细准焦螺旋,观察细胞核和细胞质的染色情况。 五、考点提示: 1、取口腔上皮细胞之前,应先漱口,以避免装片中出现太多的杂质; 2、取洋葱表皮细胞时,尽量避免材料上带有叶肉组织细胞; 3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢,切忌直接用水龙头冲洗; 4、用酒精灯烘烤载玻片时,不要只集中于材料处,而应将载玻片在火焰上来回移动,使载 玻片均匀受热,以免破裂; 5、烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中,最好先自