《地中海富盐菌稳定期基因转录和小染色体复制的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《地中海富盐菌稳定期基因转录和小染色体复制的研究（129页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、密级：中国科学院大学U n i v e r s i t yo fC h i n e s eA c a d e m yo fS c i e n c e s博士学位论文作者姓名：割瞳壹指导教师：囱垡( 班究虽：簋2虫国型堂院邀生物巫究压学位类别：堡堂簋学科专业：遗佳堂培养单位：生国型堂随邀生物研究压2 0 1 3 年5 月I l l lIl l lII III l l l I ll lfY 2 3 8 17 5 4U h a r a c t e r i z a t i o nO IS t a t l o n a I 吖一D n a S eg e n ee X D r e S S l o n _ _
2、 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 一I IIIIB _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 一a n dm i n i c n r o m o s o m er e p l l C a t l O nI l lt l l eH a l o a r c h a e o nH a l o f e r a xm e d i t e r r a n e i_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 一I
3、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 一B yX i a o q i n gL i uAD i s s e r t a t i o nS u b m i t t e dt oT h eU n i v e r s i t yo fC h i n e s eA c a d e m yo fS c i e n c e sI np a r t i a lf u l f i l l m e n to ft h er e q u i r e m e n tF o rt h ed e g r e eo fD o c t o ro fP h i l o s o p h yI n s
4、t i t u t eo fM i c r o b i o l o g yC h i n e s eA c a d e m yo fS c i e n c e sM a y , 2 0 1 3学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文不包含任何其他个人或集体已经发表或未发表的成果、数据或撰写过的科研成果，也不包含为获得任何教育机构的学位或证书已使用过的材料。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。申请学位的论文与资料若有不实之处，本人愿承担1 切责任。学位论文作者签
5、名：灰1 茈青加J 弓年舌月乡同学位论文使用授权声明本人完全了解中国科学院大学及微生物研究所关于提交、保存和使用学位论文的规定。同意研究所保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸制版和电子版，允许论文被查阅和借阅；论文保存单位及借阅人有义务保护论文作者及单位的知识产权。本论文的成果归中国科学院微生物研究所所有；本人离所后发表、使用本学位论文或与本论文直接相关的学术成果时，第一署名单位仍然为中国科学院微生物研究所。( 保密论文在解密后遵守此规定)储签名：斟嫡导师签名：终f日期：7 0J 弓年占月弓日日期：伽J 多年石月多日E l 录目录目录I摘要vA b s t r a e t V I l缩写I
6、X第一章绪论一11 1 课题背景及意义11 2 国内外研究现状一21 2 1 古菌简介21 2 2 古菌D N A 复制31 2 3 古菌的转录61 2 4 细菌的稳定期一1 41 2 5 酵母的稳定期一1 71 2 6 卉菌的稳定期一1 71 3 论文的工作内容及目的1 8第二章实验室常用实验方法l92 1 极端嗜盐古菌总D N A 的提取1 92 2 极端嗜盐古菌总R N A 的提取l92 3S o u t h e r nb l o t t i n g 2 02 3 1S o u t h e r n 转膜2 02 3 2 预杂交一212 3 3 探针标记一2 12 3 4 杂交2 22 3
7、 5 洗膜2 22 3 6 压片2 22 4N o r t h e r nb l o t t i n g 2 2中国科学院博士学位论文地中海甯盐荫稳定期基因转录和小染色体复制的研究2 4 1R N A 样品琼脂糖凝胶制备2 22 4 2R N A 样品电泳2 32 4 2N o r t h e r n 转膜2 32 5 极端嗜盐古菌Hm e d i t e r r a n e iD F 5 0 的转化2 32 6 基于p y r F 的敲除系统的双交换筛选2 5第三章I Lm e d i t e r r a n e i 稳定期的全基因组表达谱芯片分析2 73 1 前言2 73 2 实验材料与方
8、法2 73 2 1 菌株及培养条件一2 73 2 2 总R N A 的提取2 73 2 3D N A 芯片( m i c r o a r r a y ) 分析2 73 2 4K E G GP a t y w a y 富集度分析2 83 3 结果与分析2 83 3 1 差异表达基因分析2 83 3 2 差异表达基因K E G Gp a t h w a y 富集度分析2 93 4 小结3 3第四章且m e d i t e r r a n e i 的小染色体p r i M 3 0 0 稳定期复制分析3 54 1 前言3 54 2 实验材料与方法3 74 2 1 菌株及培养条件一3 74 2 2 引物
9、3 74 2 3 基因组D N A 的提取和S o u t h e r nb l o t t i n g 3 74 2 4p r i M 3 0 0 和染色体的拷贝数的检测3 84 3 实验结果3 94 3 1p r i M 3 0 0 基因功能分析3 94 3 2 整个生长时期中p r i M 3 0 0 与染色体含量比例的检测4 04 3 3 整个生长时期中p r i M 3 0 0 和染色体拷贝数的检测4 24 4 小结与讨论4 3目录第五章嗜盐菌素H 4 基因启动子的研究4 55 1 前言4 55 2 实验材料和方法4 65 2 1 菌株和培养条件一4 65 2 2 质粒4 75 2
10、3 引物一4 85 2 4 转录起始位点的确定一4 95 2 5P 删肘b g a H 报告质粒及5 缺失突变体的构建5 05 2 6 扫描突变体的构建一5l5 2 7N o r t h e r nb l o t t i n g 一515 3 结果与分析5 25 3 1h a l H 4 启动子序列分析5 25 3 2B 一半乳糖甘酶报告系统构建5 35 3 3h a l H 4 启动子5 端截短突变研究5 45 3 4h a l H 4 启动子6 3 1 区域扫描突变研究5 65 4 ，J 、结5 7第六章稳定期高表达的基础转录因子T F B 2 、T F B 4 和T F B 6 功能研究5 96 1 前言5 96 2 实验材料和方法5 96 2 1 菌株一5 96 2 2 质粒5 96 2 3 引物6 06 2 4 基础转录因子基因咖2 、咖4 和咖6 的敲除6 06 2
