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1、发酵工程综合性实验发酵工程综合性实验 2：青霉素的发酵：青霉素的发酵一、目的与要求通过实验，以具体的青霉素发酵生产工艺流程为例，掌握发酵原理，掌握种子制备、发酵过程控制、与发酵相关参数的检测，掌握效价测定方法，为学生提供理论联系实际的机会。二、材料和用品菌种：产黄青霉、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌仪器：灭菌锅、培养箱、超净工作台、大三角瓶、烘箱、水浴锅三、实验内容（一）（一） 、发酵过程控制、发酵过程控制1.培养基配制培养基的组成（）：玉米浆3.8，蔗糖2，硫酸铵0.2，碳酸钙0.1，硫酸亚铁0.02，泡敌0.03，pH 4.74.9。2培养基的分装及其灭菌将配好的培养基分装到 250mL 摇瓶中
2、，每瓶 100mL，最后将培养基置于 121灭菌20min。3接种将已经活化的斜面种子（产黄青霉）接种到摇瓶中 30摇床中培养。4观察和取样观察发酵过程中是否存在异常情况，如发酵液颜色、气味等是否异常等情况。每 12h取样一次，每次 10mL 左右。4培养时间及镜检一般培养需要 3-4d 左右，然后利用镜检来检测发酵过程是否染菌。（二）（二） 、 发酵过程中生理生化指标的检测发酵过程中生理生化指标的检测1.利用称重法测定生长曲线将每批次的样品（5-10mL）离心后称重，测得不同时间菌体的质量，以时间为横坐标，质量为纵坐标，得到曲线。2.测糖利用 DNS 法，测定每批次的样品（5-10mL）离心
3、后的发酵液的还原糖的含量，以时间为横坐标，含量为纵坐标，得到曲线。（三）（三） 、 青霉素效价测定（利用抑菌圈的实验方法测定青霉素效价）青霉素效价测定（利用抑菌圈的实验方法测定青霉素效价）1.培养基配制 LB 培养基2.指示菌的培养选取指示菌金黄色葡萄球菌、枯草杆菌接种到灭过菌的液体培养基中，在 300C 左右培养 24-36h。3.抑菌试验步骤a.取 0.2mL 培养好的指示菌于平皿中，每种菌做 2-3 个平行样。b.用涂棒将指示菌在平皿中涂布均匀。c.用打孔器在涂布均匀的平皿中央打孔。d.取 0.1mL 不同时间取样的发酵液于孔中。e.最后将平皿放置于 300C 左右培养箱中培养并观察。四、实验结果分析实验结果分析1.绘制 pH-t（时间）曲线；2.绘制生长曲线（即干重-t 曲线） 。 ；3.绘制残糖变化曲线；4.绘制青霉素效价（透明圈直径表示）变化曲线
