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1、发酵罐的实消及接种发酵发酵罐的实消及接种发酵 一、实验目的一、实验目的 1、学习发酵过程中培养基的添加、实消、接种等一般操作过程。 2、对发酵罐进行参数设定并对发酵罐进行自动化控制, 完成培养、取料、罐的清洗等步 骤。 二、实验原理二、实验原理 (一)培养基的添加 按工艺要求配制培养基原液。 打开排气阀 F14,关闭进气阀 F13,卸去罐内压力;将校验好的 pH、DO 电极装入 发酵罐内。注意:传感器的坡面要放置正确,使得罐壁平滑;防止出现死角灭菌不 彻底。 打开罐盖上的加料口,将培养基原液加入发酵罐内,并加水至所配培养液总量的 7585左右(视环境温度、蒸汽压力及接种量而定,其余 2515为
2、蒸汽冷凝 水和种子量) 。 拧紧加料口螺母,但不要太紧以免损坏密封圈。 (二)培养基的实消 检查夹套排水阀 F33 是否打开,夹套水是否排尽。 夹套预热:打开 F2、稍开 F33,接通电源,开电源开关,手动开启搅拌电机,调节 电机转速至 150rpm 左右,进行慢速搅拌。注意:F2 不要太大,防止产生内压而损 坏罐体。夹套预热是为了防止进入罐内的水蒸气冷凝成水后改变培养基浓度。 当发酵罐内的温度达到 80左右时,打开 F4、F22,排尽蒸汽罐中冷凝水后即关闭 F22;稍开 F21,使蒸汽徐徐进入发酵罐;继续升温 关闭进气阀 F13,并将排气阀 F14 调为微开 当培养液养液温度达到 95100
3、后可停止搅拌。当发酵罐内温度达到灭菌要求温 度时,关闭阀门 F4 和 F14。在灭菌过程中,应时刻注意罐压,并控制在 0.10.11MPa 之间,严禁超压。罐压的控制通过调节阀门 F2 和 F33 来实现。 注意在升温过程中,要关闭冷却水,否则当温度设定值设定在培养温度时,冷却水 管中会自动通冷却水,不仅会影响升温速度、浪费水蒸气,更重要的是会引起冷凝 水过多,引起培养液浓度变化或不能达到灭菌效果。 实消时间一般为 30 分钟。到时间后,关闭 F2、F14。自然冷却 10 分钟左右。 通冷却水进行冷却,操作如下:关闭夹套排水阀 F33,按冷却键,至手动冷却状态; 或调整温度设定值(调节方法见“
4、DF-B1C 控制系统的操作说明”),按冷却键至自动 状态;此时起即进入控温状态。 当蒸汽阀门关闭后以及通入冷凝水,罐内温度会迅速下降,当压力降至 0.03Mpa 时, 必须间隙开启进气阀 F13,让空气进入发酵管内,并保持内压力在 0.030.05MPa 之间。 当罐内温度降至 70以下时,调节搅拌电机的调速器,慢速搅动培养基,加快冷 却速度;同时可稍开进气阀 F13 和调节排气阀 F14,使罐压保持在 0.030.05 MPa 之间。 注意在各操作过程中,必需保持空气管道压力大于发酵罐压,否则会引起发酵液倒 流进过滤器中,堵塞过滤器而失去过滤能力。 (三)接种当发酵液温度降到接种温度时即可
5、进行接种。 准备合格的摇床菌种。 用酒精棉擦洗罐顶接种口,并在接种口四周围上酒精棉。接种者的双手也需用酒精 棉擦洗消毒、晾干。 调进气阀 F13,减少进气量(不能关闭,否则罐压跌零,引起污染) ,拧松接种口 螺母;检查罐内压力是否在 0.01MPa 以下(如不在应开大排气阀 P14 或调进气阀 F13,减少进气量) ,点燃接种口四周的酒精棉;拧下接种口螺母,并将其放入预先 准备的盛有酒精的培养皿中。 将菌种瓶的瓶口在火焰上烧一会儿,并在火焰下拔下瓶塞,迅速将菌种倒入发酵罐 内。 盖上接种口螺母,灭火焰,拧紧螺母;并用酒精棉将接种口擦洗干净。 调节进气阀 F13 及排气阀 F14,达到工艺要求的通气量及保持罐压。 (四)培养 (五)取样 (六)出料 (七)发酵罐的清洗 (八)发酵罐的维护与保养