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1、浅谈连接酶链反应与聚合酶链反应检测解脲支原体的异同 解脲支原体（UU）是人类的一种重要病原微生物，是感染泌尿生殖道，口腔，直肠和眼结膜表面的专性细胞内寄生物。UU 既可导致性传播疾病，又可引起女性盆腔炎，肾盂肾炎等疾病，对女性不孕不育及通过血液感染新生儿也有必然的联系。目前 UU 的检测有金标法，酶联免疫法 ，培养法等。随着科技的发展，PCR 法用基因扩增法进行检测 UU，是扩增产物经核酸探针特异检测技术。 LCR 法是依赖靶核酸序列的寡核苷酸探针的连接技术。我们对临床 232 例标本用 PCR和 LCR 进行 UU 的检测，在此对检测结果进行一些比较分析。 1材料和方法 1.1 标本来源 全
2、部标本来源于本院 2010 年 12 月2011 年 3 月泌尿生殖门诊232 例患者，有不同程度的泌尿生殖感染症状，临床怀疑为 UU 感染。 1.2 试剂及仪器 PCR 法试剂采用上海万达生物工程有限公司的 PCR 液相杂交试剂盒。LCR 法试剂采用的是美国 Abbot 公司提供的 UU 诊断试剂盒。PCR 与 LCR 的扩增仪 。2 方法 2.1 标本采集 按照常规方法采集男性尿道和女性宫颈拭子放置于含 1.5 毫升标本保存液的试剂管中立即送检， 2.2LCR 检测 严格按照美国 Abbot 公司提供的 UU 诊断试剂盒说明进行操作，扩增条件：温度 90 度，加热 300 秒进行循环。循环
3、参数：变性：97 度，30 秒 。退火 55度，30 秒，延伸 62 度 60 秒，40 次循环。 2.3 PCR 检测 严格按照上海万达生物工程有限公司的 PCR 液相杂交试剂盒的说明进行操作刘老师论文辅导企鹅号 2043944129，扩增条件：温度 95 度，加热 450 秒进行循环，循环参数：变性：97 度，60 秒 ，退火 60 度，90 秒，延伸 65 度 80 秒，60 次循环 2.4 认证实验 根据扩大金标准，LCR 阳性为阳性，PCR 阴性，PCR 阳性时，应补充用直接荧光抗体实验确认。 3 结果 用 LCR 检测的患者标本中，阳性标本率为 29%。 PCR 检测的标本中阳性率
4、为 23% ，测定结果见表： (X2=30.5 P0.05) 注意 部分标本同时做了直接荧光抗体实验确认 结果显示：LCR 与 PCR 法相比较，X2=30.5 P0.05 ，两者有明显的差异性，LCR 明显优于 PCR，LCR 在检测男性尿道和女性宫颈拭子的 UU 中，敏感性，特异性均高于 PCR。 4讨论 快速，准确的检测 UU 是临床检测不断寻求的方法，以往常用的金标法，酶联免疫法 ，培养法等，误差大，干扰因素多，结果不准确，反应不灵敏。而以往的标本用尿液检测，因为标本的不确定性，保存的不符合检测使用，在检测的过程中容易被污染，其他干扰因素的加大，更是造成了检验结果的不确定，同时尿液标本
5、的 UU 含量较少，也不利于检测。而男性尿道和女性宫颈拭子的 UU 来自病变的接触部位，污染少，而且来自其他部位的污染细菌少，结果更为直接，明确。但是不利的方面是带给患者的损伤和心理有一定的痛苦。本实验结果证明，LCR 具有更高的灵敏性和特异性。 LCR 是在连接酶扩增反应中，引入热稳定的 DNA 连接酶而建立的，类似 PCR 的新技术。LCR 与 PCR 不同，它应用四种寡核苷酸探针，以达到高度敏感性和特异性，反应检测时间也比 PCR 短而且能够进行自动检测而 PCR 无此功能，LCR 与 PCR 检测 UU相比具有以下优点， （1） ，快速，经济，检测标本量大， （2）灵敏度高，漏诊率低，
6、适合检测各种发病人群，包括早期感染者，和无症状的病原携带者。 （3）重复性好，操作与检验人员的经验等主观因素无关。 （4）特异性高，只要引物设计合理，严格操作程序，避免积累性污染，假阳性可以避免的。 总之，用男性尿道和女性宫颈拭子为标本的 LCR 实验是一种适用的，灵敏的，快速的诊断实验。在检测泌尿生殖感染中有着重要的临床意义。 参考文献 1 车雅敏 左氧氟沙星治疗非淋菌性尿道炎，中华皮肤科杂志，1999，32：64 2 吴进曾，高谷音。解脲支原体与不孕不育关系的探讨。男性学杂志，1991，5：27 3 孙红妹，郭章溉，吴连方。解脲支原体与新生儿的感染。中华医学检验杂志，1996，19：364
7、-365【摘要】 目的：LCR 与 PCR 在检测解脲支原体（UU）泌尿生殖感染中的临床意义与差别，方法：用 LCR 法与 PCR 法对论文发表球球 2798419225 尚编辑 ，232 份临床病历进行检测UU，其中 201 份来源于男性尿道拭子和女性宫颈拭子，对两种检测方法的检测结果进行了分析。结果：LCR 检测法检测 232 份标本，UU 阳性率为 29%（69/232） ，PCR 法检测 232 份标本，阳性率为 23%（55/232） 。LCR 与 PCR 检测有明显差异（P0.05 ，结论： LCR 用于临床男性尿道拭子和女性宫颈拭子在诊断泌尿生殖感染中有极其重要意义。 【关键词】 支原体，解尿；基因，扩增；连接酶链反应；聚合酶链反应
