《玉米论文：玉米 ZmMKK3 基因分离 功能分析 逆境胁迫》由会员分享，可在线阅读，更多相关《玉米论文：玉米 ZmMKK3 基因分离 功能分析 逆境胁迫（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 玉米论文：玉米玉米论文：玉米 B B 组促分裂原活化蛋白激酶激酶（组促分裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKKMAPKK）基因基因 ZmMKK3ZmMKK3 的分离及功能分析的分离及功能分析【中文摘要】MAPK 级联途径是真核生物中高度保守的信号通路。MAPK 级联途径参与植物生长发育、细胞程序性死亡等的调节,并且能够对不同的环境刺激做出响应,如低温、高温、活性氧、紫外线、干旱和病原菌的侵染等。MAPK 级联途径由三个成员组成,分别是MAPK、MAPKK 及 MAPKKK,此三个信号组分按照 MAPKKK-MAPKK-MAPK 的方式依次磷酸化,将外源信号级联放大向下传递。近年来,从植物中分离到大
2、量 MAPKs,并且对其作用机理的研究也取得了长足进展。不过这方面的研究主要集中在双子叶模式植物,如拟南芥、烟草和紫花苜蓿等,关于玉米 MAPK 方面的研究相对较少。因此,本文以玉米Zheng958 为实验材料,分离到一个 B 组 MAPKK 基因,命名为 ZmMKK3,对其序列特征、表达模式、以及转基因烟草的抗逆生理功能做了初步研究。主要结果如下:(1)玉米 B 组 MAPKK 基因 ZmMKK3 的分离及序列分析通过对 GenBank 中关于玉米 MAPKK 推测的基因信息收集整理,根据整理结果设计特异引物,从玉米幼苗中分离到一段 DNA 序列,该序列具有植物 MAPKK 的序列特征,全长
3、为 1850bp,并且包含有 1686bp的 ORF,编码 561.【英文摘要】MAPK cascades are highly conserved modules in all eukaryotes. In plants, MAPK pathways are involved in the regulation of development, growth, programmed cell death and in responses to a diversity of environmental stimuli including cold, heat, reactive oxygen s
4、pecies, UV, drought and pathogen attack. The MAPK cascade is composed of MAPK, MAPKK and MAPKKK. They transfer signals through phosphorylation of MAPKKK-MAPKK-MAPK in turn.In recent years, numerous MAPKs have been isolated from different plants, an.【关键词】玉米 ZmMKK3 基因分离 功能分析 逆境胁迫【英文关键词】Zea mays L. ZmM
5、KK3 Gene Isolation Functional Analysis Environmental stress 【索购全文索购全文】联系联系Q1Q1：138113721138113721 Q2Q2：139938848139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务. .保过包发保过包发【目录】玉米 B 组促分裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKK）基因ZmMKK3 的分离及功能分析 符号说明 4-9 中文摘要 9-11 Abstract 11-12 1 前言 13-27 1.1 细胞信号转导 13-16 1.1.1 植物细胞信号转导 13-
6、16 1.2 植物 MAPK Cascade 的组成 16-21 1.2.1 植物中的 MAPKKK 16-17 1.2.2 植物中的 MAPKK 17-19 1.2.3 植物中的 MAPK 19-21 1.3 MAPK Cascades 介导的信号转导途径 21-25 1.3.1 MAPK Cascades 参与生物及非生物胁迫的调控 21-23 1.3.2 MAPK Cascades 参与其他信号通路的调控 23-25 1.4 本研究的目的及意义 25-27 2. 材料与方法 27-47 2.1 实验材料 27-29 2.1.1 植物材料 27 2.1.2 菌株与质粒 27 2.1.3 酶
7、及生化试剂 27 2.1.4 PCR 引物 27 2.1.5 培养基 27-29 2.2 材料处理 29-30 2.3 实验方法 30-47 2.3.1 植物材料总 RNA 的提取 30-31 2.3.2 反转录 cDNA 第一链的合成 31 2.3.3 普通 PCR 以及 Overlap-PCR 扩增 31-32 2.3.4 连接反应 32 2.3.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 32-33 2.3.6 大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆筛选 33 2.3.7 质粒 DNA 的提取 33-34 2.3.8 质粒 DNA 的酶切鉴定 34 2.3.9 DNA 序列测定 34 2.3.10 Nor
8、thern Blot 杂交分析 34-37 2.3.11 基因组 DNA 提取（SDS 法） 37 2.3.12 玉米 ZmMKK3 蛋白的原核表达 37-40 2.3.13 原核表达玉米 ZmMKK3 重组蛋白抗体制备及效价测定 40 2.3.14 Western blot 检测蛋白表达 40-42 2.3.15 洋葱表皮亚细胞定位 42-43 2.3.16 转烟草正义表达载体的构建 43 2.3.17 根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备与转化 43-44 2.3.18 农杆菌介导的烟草转化 44 2.3.19 转基因烟草的筛选鉴定 44-45 2.3.20 干旱胁迫下烟草种子萌发
9、实验及幼苗生长实验 45 2.3.21 渗透胁迫下野生型及转基因烟草 H_20_2 积累量的检测 45 2.3.23 植物抗氧化酶活力及丙二醛含量的测定 45-47 3 结果与分析 47-61 3.1 GenBank 中关于 MAPKK 基因信息的收集及整理 47-48 3.2 玉米 B 组 MAPKK 基因 ZmMKK3 的分离 48-49 3.2.1 玉米 MAPKK 基因的系统发生关系 48-49 3.3 玉米 MAPKK 基因 ZmMKK3 的序列分析 49-50 3.3.1 关于 ZmMKK3 的亲水性及跨膜结构分析 49-50 3.3.2 关于 ZmMKK3 的染色体定位 50 3
10、.4 ZmMKK3 的表达特性分析 50-52 3.5 ZmMKK3 在大肠杆菌中的表达及抗体制备 52-54 3.5.1 原核表达载体的构建 52-53 3.5.2 重组蛋白的表达及诱导条件优化 53 3.5.3 pET30a-ZmMKK3 重组蛋白的亲和纯化及抗体制备 53-54 3.5.4 间接 ELISA 测定抗体的效价 54 3.6 ZmMKK3 的亚细胞定位 54-55 3.6.1 植物表达载体 pBI121-ZmMKK3-GFP 的构建 54 3.6.2 关于该重组蛋白的亚细胞定位 54-55 3.7 过表达ZmMKK3 及组成性激活 ZmMKK3 转基因烟草的生理分析 55-6
11、1 3.7.1 转基因烟草表达载体 pBI121-ZmMKK3 的构建 55-56 3.7.2 转基因烟草的筛选鉴定 56 3.7.3 渗透胁迫条件下转基因烟草的萌发率 56-57 3.7.4 渗透（干旱）胁迫下转基因烟草 H_20_2 积累的变化 57-58 3.7.5 OE-ZmMKK3 和 DD-ZmMKK3 改善了转基因烟草的酶促抗氧化系统 58-61 4 讨论 61-65 4.1 玉米中的 MAPKKs 61-62 4.2 玉米 B 组 MAPKK 基因 ZmMKK3 参与ABA、H_20_2 的信号转导 62 4.3 过表达及组成性激活 ZmMKK3 可提高转基因烟草在渗透胁迫下种子的萌发率 62-63 4.4 过表达 ZmMKK3 基因烟草在渗透胁迫下抗氧化能力提高 63-64 4.5 关于 ZmMKK3 的亚细胞定位 64-65 5 结论 65-66 参考文献 66-77 致谢 77-78 攻读硕士学位期间完成的论文 78
