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1、1氯霉素滴眼液含量测定方法验证氯霉素滴眼液含量测定方法验证巴红娟，王红然，刘士峰（石家庄格瑞药业有限公司，河北 石家庄 050801）【摘 要】参考中国药典 2010 年版氯霉素滴眼液含量测定方法，对 HPLC 梯度洗脱时间程序进行调整并进行方法验证，结果表明该方法分离度好、准确度高。【关键词】氯霉素滴眼液；高效液相色谱法；含量1 材料与方法材料与方法1.1 仪器仪器液相色谱仪：SHIMADZU LC-20A；色谱工作站：Lcsolution；检测器：SPD-20A 紫外检测器。1.2 试剂试剂庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸等均为分析纯；甲醇为色谱纯；氯霉素对照品（批号：130555-2
2、00602） 、氯霉素二醇物对照品（批号：130436-200704） 、对硝基苯甲醛对照品（批号：130562-200902） 、羟苯乙酯对照品（批号：100847-200501）均由中国药品生物制品检定所提供；氯霉素滴眼液由本公司车间提供。1.3 色谱条件色谱条件色谱柱：SHIMADZU VP-ODS（250mm*4.6mm，5m） ；流动相A：0.01mol/L 庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾 6.8g，用 0.01mol/L 庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至 1000ml，再加三乙胺 5ml，混匀，用磷酸调节 pH 值至2.5） ，流动相 B 为甲醇；检测波长为 277nm，按下表进行线性
3、洗脱。表表 1 时间程序表时间程序表时间（分钟） 流动相 A(%) 流动相 B（%）0 62 3820 62 3840 43 5755 62 3860 62 381.4 系统适用性测试系统适用性测试2取氯霉素二醇物对照品、对硝基苯甲醛对照品、氯霉素对照品、羟苯乙酯对照品各适量，加甲醇适量（氯霉素每 10mg 加甲醇 1ml）使溶解，用流动相A-B（68:32）定量稀释制成每 1ml 中含氯霉素 0.25mg、氯霉素二醇物 20g、对硝基苯甲醛 1.5g、羟苯乙酯 25g 的混合溶液 20l 注入色谱仪，记录色谱图。图图 1 系统适用性测定图谱系统适用性测定图谱表表 2 系统适用性测定结果系统适
4、用性测定结果保留时间（min） 峰面积 拖尾因子 理论塔板数 分离度氯霉素二醇物 9.835 1321753 1.171 11621.502 -对硝基苯甲醛 15.880 152613 0.903 3161.018 8.088氯霉素 17.447 10515525 1.095 12981.438 1.799羟苯乙酯 35.241 1395143 1.014 58685.111 29.7951.5 对照品溶液的配制对照品溶液的配制精密称取 25mg 氯霉素对照品置 50ml 量瓶中，用流动相 A-B（62:38）溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 1.0ml 上述溶液至 10ml 量瓶中，用流动相
5、 A-B（62:38）稀释至刻度，摇匀即得。1.6 供试品溶液的配制供试品溶液的配制精密量取本品 1ml（8ml:20mg）置 50ml 量瓶中，用上述流动相稀释至刻度，摇匀即得。32 结果结果2.1 专属性试验专属性试验取除氯霉素外的其他各辅料，按处方比例称取，加水溶解后摇匀，作为空白溶液，按“1.6”项下方法制备空白供试品溶液，进样 20l，结果表明：辅料对氯霉素含量测得无干扰。2.2 线性关系考察线性关系考察精密称取 25.0mg 氯霉素对照品置 50ml 量瓶中，加流动相 A-B（62:38）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液，精密量取0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml
6、、1.4ml 对照储备液至 10ml 量瓶中，用上述流动相稀释至刻度，摇匀，各精密量取 20l，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积积分值（Y）与进样浓度（X：g/ml）进行线性回归，回归方程为Y=50356.91X-9470.5，r=0.9998（n=5） 。结果表明：氯霉素进样浓度在 60-140g/ml 范围内，与峰面积线性关系良好。2.3 精密度试验精密度试验精密吸取线性 3 号液 20l，重复进样 6 次，测得峰面积 RSD 为0.16%（n=6） 。2.4 重复性试验重复性试验取批号为 100110 的样品 6 份，按“1.6”项下方法制备供试品溶液，进样20l，测定峰面积 RSD
7、 为 1.08%（n=6） 。2.5 溶液稳定性试验溶液稳定性试验取同一供试品溶液，每隔 2 小时进样测定峰面积，测得峰面积 RSD 为0.70%（n=5） 。2.6 回收率试验回收率试验取除氯霉素外的其他各辅料，按处方比例称取，加水溶解后摇匀，作为回收率试验的空白溶液。精密称取氯霉素对照品适量置10ml量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml上述溶液到50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，备用；精密量取20l注入液相色谱仪，记录色谱图。计算回收率，结果如下：表3 回收率测定结果4加入量（mg） 计算量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD%18.7 18.5
8、5 99.20 99.29 0.9020.5 20.79 101.4120.0 19.77 98.8628.3 28.20 99.6427.8 27.59 99.2428.1 27.72 98.6632.5 31.98 98.4032.3 31.88 98.6932.0 31.85 99.542.7 含量测定含量测定取3批氯霉素滴眼液样品按照“1.6”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各20l，注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法（以峰面积计算） ，即得，结果见表4.表表4 氯霉素滴眼液含量测定结果氯霉素滴眼液含量测定结果序号 1 2 3 含量（标示量%） 99.2% 98.9% 99.0%3讨论讨论本方法将2010版药典氯霉素滴眼液含量测定方法进行调整，使得组分之间分离度高、含量测定准确可靠。参考文献参考文献1 中国药典S.2010年版.二部.1031-1032
