自动生化分析仪应用中校准、维护和SOP文件准备要求

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1、自动生化分析仪应用中校准、维护和SOP 文件准备要求 天津医科大学第二医院李忠信 天津市儿童医院沈永明 管卫 这是经典的检定报告， 检定合格可以投入使用。 某些仪器也报告过他们的性 能指标， 但没有提供检定方法。 目前国家行政管理部门尚没有开展这方面的检定， 国外大公司在中国的机构也不提供这方面的服务。药品食品监督管理局正在着手 制定有关的技术标准。 ( 二 ) 用户对检测系统精密度和准确度的核实 实验室期望核实检测系统 （为完成一个检测项目所涉及的仪器、试剂、标准 品、校正品、质控品、操作程序和维护程序等的组合称为检测系统）已被认可的 性能所进行的评估为核实（Demonstration ）实

2、验。 1. 使用校正物对检测系统进行校准 一个检测系统在质控在控的条件下，检测校正物的值， 若与校正物给定值的 相对偏倚在 2% 之内。表明所测结果准确并具有溯源性。 在初始校准未通过或质控未通过或更换试剂时应执行再校准。 仪器在更换 光源灯，反应槽清洗， 更换比色杯， 调整项目参数等维护保养程序之后亦应执行 再校准。 检测系统设有校准程序。 各项目在各系统中的校准周期不尽相同，应按各自 配套的试剂盒说明书进行。 项目确定后将其记录于 “ 日校准记录表 ” 中。校准结果 的确认依据 “ 试剂说明书 ” 中的判断指标。 若超出允许范围， 应查找原因或与厂家 联系。 2. 精密度核实 （ 1 ）

3、实验设计天数和重复次数 以 s 批内 和 s 总 各表示为厂商提供的批内和总精密度水平。以s 批 内 和 s 总 各表示为实验室核实实验的批内和总精密度水平。在进行以下标 准差大小比较时，厂商的s 批内 和 s 总 对应的各个均值（批内均值和总均 值）大小应相同或极其相近， 只有在这样的条件下， 才可以对标准差进行大小的 比较。如果厂商按照美国的临床实验室标准委员会的EP5 文件进行的批内和 总精密度估计时， 它们的均值采用总 均值表示。 在这样的情况下， 进行标准差 大小比较时可以直接使用变异系数（CV ）作比较。 如果 s 批内 2/3 s 总 ，实验至少要做5 天，每批每个水平作4 次重

4、复 检测。 这个方案针对天间变异是总精密度的重要组份的情况。 如果 s 批内 2/3 s 总 ，实验至少要做3 天，每批每个水平作3 次重复 检测。 这个方案针对天间变异不是总精密度的重要组份的情况。 如果如果s 批内 和 2/3 s 总 的关系不清楚，实验至少要做5 天，每批每 个水平作4 次重复检测。 （ 2 ） 实验程序 每天做1 批 a . 如果 s 批内 2/3 s 总 ， 5 天内，每天做2 个浓度水平，每个水平作4 次重复检测。 b . 如果 s 批内 2/3 s 总 ， 3 天内，每天做2 个浓度水平，每个水平作3 次重复检测。 实验时，仍然每天进行控制品的检测。如果控制值失控

5、，或操作有问题，弃 去数据，重做。 可以在同一批内进行准确度实验样品的检测。 按照厂商说明要求进行校准。如果厂商强调，它的精密度数据是经过多次校 准后产生的，操作人员也应在实验中进行重校准。 （ 3 ） 数据记录 附录 A 为记录数据表格样张，便于归纳数据和统计。计算表见附录A （略） 。 如何使用和计算示例见附录B （略） 。 每个浓度水平应分别计算。 （ 4 ）精密度数据计算 批内精密度 按下列公式计算：此主题相关图片如下：式中： S 为总和记号。在记号右侧数据求总和。 D 总天数（3 或 5 ） 。 n 每天重复检测总数（3 或 4 次） ， x di 每天重复检测结果（3 或 4 个）

6、 ， 在第 d 天内所有结果的均值。应注意的是，如果实验方案不是完全按上述方式进行（应该在不同天，所有批 进行 相同的重复），估计 的批内精密度将不正确。 将 s 批内 除 以所有结果的均值的百分值为下的 CV 批内 （） 。 总精密度 用下列公式进行总精密度的计算5 。 计算方差B ，这是每天均值的方差。公式如下：此主题相关图片如下：式中：为第 d 天所有 结果均值，为所有结果的均值。按以下公式计算s 总 ：此主题相关图片如下：式中 n 每批重复数。 将 s 总 除以 所有结果的均值的百分值为下的 CV 总 （） 。 （ 5 ） 将估计的批内精密度和提供的批内精密度作比较如果厂商的批内精密度

7、为变异系数（CV 厂商批内） ，在均值水平相同 （严格讲是及其接近）的条件下，可以将估计的批内精密度（ CV 批内 ）和 厂商 的批内精密度（ CV 厂商批内）作比较。 如果核实实验估计的CV 批内 小于 厂商的 CV 厂商批内，实验室已经 核实 了批内精密度和 厂商批内精密度的一致。若核实实验的批内 CV 批内 大于厂商提供的CV 厂商批内，注意：实验室的CV 可以大于厂商的，但是 可能在统计上差异是不显著的。所以若核实实验的CV 批内 大于 厂商提供的 CV 厂商批内，应进行统计检验，确定是否在统计上差异是显著的（真的有差 异） 。本方案目前建议不作统计上的显著性检验，如果出现核实实验的C

8、V 批内 大于 厂商原有的批内 CV 厂商批内，就判断：该实验室条件下具有的批内 精密度 水平超出了厂商的批内精密度水平，厂商提供的批内精密度不能被 确认，实验室应和厂商联系，解决问题。 （ 6 ）将核实实验估计的总精密度和厂商提供的总精密度作比较 如果厂商的总精密度为变异系数（CV 厂商 总 ） ，在均值水平相同（严格 讲是及其接近）的条件下，可以将核实实验估计的总精密度（CV 总 ）和厂商 的总精密度（CV 厂商 总 ）作比较。 如果核实实验估计的总CV 总 小于厂商的总精密度水平（CV 厂商 总 ） ，用户已经核实了总精密度和厂商总精密度的一致。若核实实验的总精密度 CV 总 大于厂商提

9、供的总精密度水平（CV 厂商 总 ） ，注意：用户的核实实 验总 精密度 CV 总 可以大于厂商提供的总精密度水平（CV 厂商 总 ） ，但 是可能在统计上差异是不显著的。所以若核实实验的CV 总 大于厂商提供的总 精密度（CV 厂商 总 ）水平，应进行统计检验，是否在统计上差异是显著的 （真的有差异）。 和批内精密度的做法一样，目前建议不作统计上的显著性检 验，如果出现核实实验的总精密度 CV 总 大于厂商原有的总精密度水平（CV 厂商 总 ） ，就判断：该实验 室条件下具有的总精密度水平超出了厂商的总精密度水平，厂商提供的总精密度 不能被确认，实验室应和厂商联系，解决问题。 （三） 非检测

10、系统利用临床项目进行校准： 1. 临床项目的批内精密度 对项目浓度范围满足表3 的新鲜病人血清，重复测定20 次，计算均值和变异 系数（ CV ） 。变异系数应满足表3 的要求。 表 3 临床项目批内精密度要求项目名称测试名称浓度范围要求ALT （丙氨酸基转移 酶）零级动力学法60 70 U/L CV 5% UREA （尿素）一级动力学法9 10 mmol/L CV 2.5% TP ( 总蛋白 ) 终点法60 65 g /L CV 2.5% 2. 临床项目准确度 与已通过注册、具有相同预期用途、原理与结构相似的检测系统进行方法学比较， 其相对偏倚满足表4 的要求。 表 4 临床项目准确度要求项

11、目名称测试类型要求ALT （丙氨酸氨基转移酶） 零级动力学法相对偏倚不大于 10% UREA （ 尿素 ）一级动力学法相对偏倚不大于 5% TP （总蛋白）终点法相对偏倚不大于 5% 3. 临床相目可报告范围 对丙氨酸氨基转移酶（ALT ） 、尿素（UREA ）和（ TP ） 3 个项目的 可报告范围评估，实验的可报告范围的差异在 10% 内。 目前北京市临床实验室管理办法第十五条6 ，内蒙古自治区临床实验室 管理暂行办法第十八条7 和黑龙江省临床实验室管理暂行办法第十五条8 均规定： “ 实验室必须对需要校准的检测设备和对检测结果有影响的辅助设备进 行校准 ” 。天津市临检中心於 2003

12、年底学习北京市的经验按“ 临床实验室调查 内容 33 条” 对尽百家二级甲等医院进行了调查。在用自动生化分析仪种类繁 多，多数实验室对校准程序不够了解，措施不力。 上述三个方法期待与同仁的磋 商与商榷。 二. 自动生化分析仪的维护 为保证仪器的安全运转和效率的稳定，需随时对仪器进行维护和检查。 包括 每日、每周、每月、每季、 每半年的定期检查和消耗部件检查及定期更换部件。 以 TOSHIBA 自动生化分析仪为例，其维护和检查周期是依据工作量决定 的。每天600 个测试（40 个 样品 / 天，平均 15 个项目 / 样品，包括定标和质控 ） ，每天开机时间为 8 小时。如果实测项目较多或开机时

13、间较长时，维护和检查的周期应缩短。 但是 若仪器的利用率低于如上的设定， 则不宜延长维护周期， 否则应取得厂家的确定， 因为某些部件（如老化）必须进行定期保养。 注意！发现仪器存在问题应立即停止使用，进行维护检查时，注意安全！自 己解决不了时应与相应维 修部门 及时联系，以防损坏仪器。 兹以 BECKMAN SYNCHRON CX4 全自动生化分析仪为例， 其维护周期与 内容是： . 每天的维护： （ 1 ）检查冲洗浓缩液和探针漂洗液水平 （ 2 ）检查状态监视器 （ 3 ）检查比色杯滑针 的方向和状态 （ 4 ）检查气压量计 （ 5 ）检查空针活塞头有否磨损 （ 6 ）用 70% 异丙醇清洁

14、所有加样探针和混合棒 . 每周维护： （ 1 ）清洁全部被暴露的工作面 （ 2 ）清洁加样针和加试剂针 . 每二周维护： 换采样空针柱塞头。 每两周或7500 个试验后或注视到磨损的小薄片和裂纹 无论出现哪种情况都应换采样空针柱塞的头。 . 每月维护： （ 1 ）清洁系统中全部的空气过滤器 （ 2 ）替换探针漂洗线上的过滤器（ 3 ） 换加试剂 空针的柱塞头, 若观察到磨损不必等到按月维护. （ 4 ）清洁样品密码读出器的光窗 4. 每二个月维护： （ 1 ）检查所有的冲洗瓶和防污染的浮子传感器 （ 2 ） 换抽比 色杯真空的滑臂 5. 每六个的维护： （ 1 ）换浓缩冲洗液管路中的过滤器 （

15、 2 ）清洁全部稀释的冲洗液瓶和浮子传感器 再以 HITACHI 7170A 维护保养程序为例说明如下： 1. 维护每 周维护 保养程序： （ 1 ）清洗反应杯 （ 2 ）测定杯空白，若杯空白数值超过 800 ，需要将反应杯取出浸泡在 2%HITERGENT 中，过夜。再用清水充分清洗， 再次确认杯空白，若杯空白值 仍过大，或使用超过1 个月以上请更换反应杯。在更换光源灯；光路清扫后； 更换反应杯或反应杯位置 交换后也需测定杯空白。 （ 3 ） 样品针、试剂针、 搅拌棒各清洗槽的清扫，用试管刷蘸2%HITERGRNT 进行洗刷。 2. 每月维护保养程序 （ 1 ）更换反应杯（ 2 ） 清扫试剂

16、冷藏库和样品盘槽（ 3 ） 清洗反应槽 及反应槽排水过滤网（4 ）清洗供水过滤网（ 5 ）清扫散热器过滤网（ 6 ） 参数备份 3. 每季度维护保养程序 （ 1 ）样品吸量器密封垫的更换（ 2 ） 试剂吸量器密封垫的更换（ 3 ） 清 扫冷却风扇 4. 每半 年维护 保养程序 更换光源灯 自动生化分析仪的维护中还应注意： 1. 环境温度：要求15 32 。室温温度低，易致帕易贴元件超负荷，易烧 毁；恒温水浴难升温，仪器报警，易烧电路，为避免不必要的损失应有暖气（此 点在寒冷季节应有保障） 。室温高，样本及反应液易蒸发，应设空调 2. 环境湿度：生化分析仪运转环境的相对湿度最好在3565% 之间，允许相对 湿度范围在2080% 之间。湿度过低，静电反应增强，此点在北方的冬、春季 易出现，影响检测结果；湿度过高，雾滴会影响仪器的电路传导，尤当停机后雾 滴会落到光学元件表面，腐蚀影响干涉滤光片或光栅的性能。 3.