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1、1美国 FDA 药品质量控制微生物实验室检查指南 1993 年I导言药品质量控制实验室检查指南主要涉及许多有关药品实验室分析的化学方面的问题，对微生物 实验室的检查仅提供了有限的指导，而本指南则是微生物分析检查过程的指导。本指南建议，如同对任 何实验室检查样，在检查微生物实验室时，应有名熟悉检验的分析学家(微生物学家)参与。II非无菌药品的微生物检验由于种种原因，局部药品、滴鼻剂和吸入剂存在许多微生物污染方面的问题.美国药典微生物属 性”章(1111)指出“应该从药品用法、药品性质及时患者的潜在危害等方面评价微生物在非无菌药品中的 重要性” ，除此之外，没有提供具体的指导。美国药典还建议应对某
2、些种类的非无菌药品做常规的总菌数 检验及某些特定的污染指示微生物的检验：例如：植物、动物和某些矿物质中的沙门氏菌属；口服液体 中的大肠杆菌；局部用药品小的金黄色倘萄球菌和绿脓杆菌污染；以及：自肠、尿道、阴道用药中的酵 母菌和霉菌：大量的专题文章还沦及厂微生物的限度。作为非无菌药品受微生物污染的可接受程度和类型的般性指导，美国食品和药品管理局药品分局 的邓尼根博士曾强调其对健康的危害问题。1970 年他提出被革兰氏阴性细菌污染的局部制剂可能引起中 度至重度的健康危害：文献和调查表明，许多感染都源于这种局部药品的革兰氏阴性细菌污染。几年前 马萨诸塞州的家医院就报道过宗络合碘(Povidonelod
3、ine)被洋葱假恤孢菌(Pseudomonas cepacia)污染的 典型病例。因此，每家公司都希望为自己的非无菌药品制订出一种关于微生物限度的标准，美国药典中“微生 物限度”(USP61)提供了检验几种指示微生物的方法，但并末涉及所有有害微生物。例如医药界普遍认为， 洋葱假中孢菌在局部药品或滴鼻剂斗，大量存在是有害的，但美国药典没有提供证明这种微生物存在的 检验方法。间羟异丙肾上腺素硫酸盐吸入剂溶液的收回就是这方面的个例子。美国药典第 X版各论部分没 有要求对这种药品进行微生物检验。药品管理局将其列为一级收回，因为此药受到了洋葱假单孢菌污染。 健康危害评估表明，这种微生物对肺部感染的风险很
4、大，特别是对某些患有慢性气管阻塞、囊性纤维变 性和免疫缺陷等病的患者具有潜在的生命危险。此外，药典的微生物限度部分所描述的检验程度不能鉴 别这些微生物。现行美国药典在“微生物限度”部分(61)做了复检的规定，但是许多建议要求取消这种复检条款。类 似于其他检验，初次检验结果应予以审查与研究。微生物污染并不是均匀地分布在一批药品或样品中的。 如果在一个样品中发现污染而在另次取样样品中没有发现，则不应忽视初次发现的结果。复检的结果 应予以审查与评估，并且应特别注意进行复检的逻辑性和合理性。为了分离出特定的微生物污染物，FDA 实验室和制药工业的许多实验室，使用某些自钝化剂如吐温 或卵磷脂的营养培养基
5、，这对于钝化药品中常有的防腐剂的作用是非常必要的，还能为受损的或生长缓 慢的微生物提供更好的基质；其他生长参数包括降低培养温度以及延长培养时间(至少 5 天)，因为它们可 以为这类微生物提供良好的生存条件。 例如：在细菌学分析手册(BAM)第版中，FDA 实验室采用化妆品的检验方法鉴别非无菌药品 中的污染物。这项检验包括将样品置于改良 Letheen 肉汤中培养。培养结束后，再用血琼脂平皿和麦球凯 琼脂平皿进一步鉴定，然后再鉴别分离出的菌落。FDA 微生物学家用这种方法使所有潜在的病原体的复 活达到最佳，并且测定复活的微生物数量及其类别。FDA 分析学家使用这种方法的另个重要方面就是 要确定所
6、有用过的培养暴促进微生物生长的性能。选择适当的中和剂很大程度上取决于防腐剂的性质和被评价药品所智的配方：如果在营养肉汤出现 微生物生长，那么下一步的鉴别就可将样品转到更有选择性的琼脂培养基或适当的增菌琼脂上。微生物检验可包括对在需氧菌总数检验小发现的菌落的鉴定。另外上述鉴定不应仅限于美国药典中 的指示微生物。鉴别从微生物总数检验或(和)富集培养检验中分离的各种菌落的重要性，将取决于药品的种类及共其2途。很明显，如果检验个口服固体制剂如片剂，当检验显示微生物污染量很大时，就可以考虑对分离 出的菌落进行鉴别，然而对其他被微生物污染后易引起危害的药品，如局部用药品、吸人剂、滴鼻剂， 应鉴别从前落计数
7、及富集检验中分离的菌落。III设备、器材和培养基首先审查正在进行的分析，并检查培养中的培养皿和试管(操作过程中不要疏忽大意而污染检验中 的培养皿和试管)。特别注意那些没有文字记录的复检和经凋查已经鉴别出有污染问题的“特殊项目” 。这 种评价可以通过审查正在进行的分析是否有阳性结果来实现。如有可能要审查前一天的培养皿和培养基， 还要把观察结果与实验记录本中的记录进行比较。检查用于培养基灭菌的高压蒸汽灭菌器。高压蒸汽灭菌器可能缺少以无菌过滤的空气来代替蒸汽的 能力。对于密封的培养瓶，不会出现这种问题；然而对于不密封的培养瓶，非无菌的空气会导致培养基 的污染。此外，如高压灭菌的时间少于要求的时间，也
8、会使培养基中的污染物生长，并得出错误的阳性 结果。在任务繁重的实验室里，这些问题可能更容易出现。要检查高压蒸汽灭菌器的温度，温度过高会使必需的营养素变性甚至炭化，这可能使受到抑制的微 生物达不到最佳复活。潜在的假阳性结果带来的明显问题，是无法区别因疏忽大意而产生的培养基污染 和直接来源于被检验样品的真正的污染。无菌检验1991 年 10 月 11 日，药品管理局颁布了关于经无菌加工艺和最终灭菌生产药品的规定，并列出份 经无菌加工工艺生产的受污染或潜在污染而致收回的药品清单。许多对收回药品的调查或检查都起因于 初次无菌检验不合格。FDA 对生产厂的生产、质控、调查及其缺陷进行中核的结果以及最初无
9、菌检验不 合格的证据最终导致厂对这些药品的收回。美国药典规定，用于进行无菌检验的设施与用于制药的设施应该是一致的，并规定，用于无菌检验 的设施不应比无菌加工生产设施造成更多的微生物污染机率。因此，合理的设计应该包括更衣区域和通 过气闸。环境的监测和着装应该与药品生产中相一致。由于无菌检验中包括大量药品和培养基的操作，因此检查应包括对无菌检验的实地观察；即使有些 公司曾借口实地检查可能会使分析人员紧张而试图阻止，检查组应注意此问题，使实地观察能以尽可能 不干扰正常操作环境的方式进行。然而这种考虑不足以成为放弃这部分检查的充分理由。检查无菌检验程序最重要的方面之一就是审查元菌检验初次阳性结果的记录
10、。要求列出不合格的检 验结果以便于审查生产、质控记录和调查报告，特别是对于风险性很大的无菌分装的药品，应审查无菌 检验初次阳性结果和调查结果。对于生产厂来说，如果无菌分装的产品在初次无菌检验时出现阳性结果， 但无菌检验中的对照未发现异常，则很难决定是否发放该种产品。应检查是否设立阴性对照品，设立阴性对照对高质量的无菌检验儿为重要；无菌检验规范的做法包 括使用已知的最终灭菌或经辐射灭菌的样品作为系统对照，或者使用培养基模拟分装试验中分装的安瓿 或西林瓶。要特别注意生产无菌分装药品的厂家从未发现初次阳性无菌检验结果的情况，尽管这种情况可能发 生，但毕竟少见。曾经有一个案例，某生产厂的记录表明没有阳
11、性结果，实际上他们的记录被改动了。 不存在初次阳性结果，还说明这项检查未通过验证来显示有没有来自于药品或防腐剂的残留抑制物的存 在。检查自动化无菌检验系统或无菌隔离技术，如用于无菌检验的 La Calhene 装置，这些装置保证了不 需要人直接移取样品。如果被检样品在此系统中检验发现初次检验不合格，很难根据次复检决定药品 是否发放，特别是检验对照是阴性的时候。评价无菌检验样品的培养时间。该问题已被阐明，美国药典提出样品至少需要培养 7 天，而项提 议要求美国药典将其改为 14 天；希望诸位能评价项具体的分析过程和产品以确定其最适培养时间。7 天可能不够充分，特别是发现有生长过程缓慢的微生物存在
12、时，培养基灌装、环境、无菌检验结果和其 他数据应加以审查以确保没有发现生长缓慢的微生物。此外，还应比较各种培养方法，以确定它们是否 符合已被批准或将被批准的申请书中所列的方法。V方法和检验程序的验证3确定检验程序的来源。生产厂的检验程序有几个方面的来源，如美国药典、 细菌学分析手册及其 他微生物参考资料。事实上对各种有害微生物进行的检验程序不可能得到全面验证，但是应确保样品中 的抑制物被中和。在检查过程中，包括批准前的检查中，要评价微生物检验的方法。例如我们希望检验方法可以鉴别 一些微生物的存在，如洋葱假单孢菌或其他有害的假单孢菌属。在进行批准前检查时，要将正在使用的 方法和申请中呈递的方法进
13、行比较，同时证实实验室拥有必要的检验设备，这些设备在进行关键检验时 确实可用并处于良好的运行状态。美国药典规定，如果已经过正确的验证，另一种方法可以得出同样甚至更好的结果，它可以用来代 替法定检验方法。你也许会发现人们已使用脱水的培养基来制备培养基。良好的操作包括定期用极少量微生物去测试 制备好的培养基，包括使用美国药典规定的指示微生物和正常菌群。培养基促进生长的能力可能受到培 养基制备程序、灭菌过程(过热)和储存的影响，它们是对任何实验室进行检查的重要指标，也是实现微生 物实验室优良管理的重要考虑事项。数据储存评价检验结果是记录在实验记录本(logbooks)上还是记录在活页检验单上，由于有
14、些生产厂可能不愿 提供表明微生物检验结果的表格、总结或打印稿，应当审查数据来鉴别生产过程中潜在的微生物。当得 不到此数据的总结时，检验组应审查充分的数据来建立他们自己对于实验室结果和质量控制程序的总结。一些实验室将事先印好的表格用于记录检验数据。有些实验室还指出在检查中审查微生物检验数据 的唯一途径是审查单批记录。然而在大多数情况下，事先印出的表格都是一式几份，而第二，三份总是 存在中心档案中。一些公司以实验记录本记录资料，这些实验记录本也应该被查阅。 另外，很多生产厂装备厂自动化微生物系统，如用于鉴别微生物的 Vitek 装置。这种检验的记录和对 样品来源的鉴别对于识别生产过程中潜在的微土物
15、问题具有同样价值。鉴别微生物的自动化系统比较普 遍地用于制造非肠道药品的生产厂，用于对从环境、水系统、验证过程和人员的分离物的常规鉴别。我们巴尔的摩地区的微生物学家都是自动化微生物分析系统使用方面的专家。他们最先在 FDA 实验 室里使用这种设备并且对于验证这些设备的方法有丰富的经验。关于该系统的情况或有关问题，可以向 巴尔的摩地区实验室查询。另外，大规模使用这类设备的应当接受来自巴尔的摩地区实验室专家的检查。管理审查微生物检验结果是数据评价及解释中一个较难的领域。评价微生物检验结果需要受过微生物学的专 业训练并具备经验。要厂解检验的方法，而且更重要及更难的是要厂解检验的局限性。例如：个生产
16、厂在他们用天然物质生产的口服药品中发现厂大量的阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，因为没有分离出 大肠杆菌，就发放厂产品。FDA 分析学家在该批大多数样品中发现了阴沟肠杆菌，甚至在一个样品中发 现了大肠杆菌。在此例中，管理人员未能发现微生物污染可能是不均匀的，在鉴别过程中，有些微生物 可能掩盖厂另一些微生物的存在，微生物检验远没有达到精确无误的地步。检查必须考虑样品中已发现的和存在其他不利条件的可能性之间的关系。例如从逻辑上设想，如果 生产过程中允许阴沟肠杆菌存在，它也会允许有害的指示微生物存在。微生物学家应该通过考虑检验方 法、样品的生长条件以及与微生物分析有关的其他基本因素来评价这种潜在性。 评价管理项目以便于审计厂外合同实验室(Outsidecontrator)完成实验室工作的质量。合同检验实验室很多生产厂与私人或独立的检验实验室签定合同来分析他们的药品；鉴于这些实验室：降只进行生 产厂要求的检验，应确定厂家给予合同实验室的具体指示，评价这些指示以保证必要的检验。例如：在 近期
