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1、酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者 ELISA 法。 它的中心就是让抗体与酶 复合物结合，然后通过显色来检测。 步骤 ELISA 用血清来检测，首先血液要经过至 少半个小时的凝集，然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳性对照， 还有就是质控品（这是严格的要求，它的范围必须在质控范围内） 。经过一个小时的孵育， 然后洗板，加底物，半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分，然后就是读数。由数 值来判断结果的阴性或阳性。 基本原理 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面， 并保持其免疫活性。 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原 或抗体既保留其免疫活性，又保留酶
2、的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或 抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方 法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与 标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物， 产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。 由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有 3 种必要的试剂： 固相的抗原或抗体 酶标记的抗原或抗体 酶作用的底物。根据试剂的来
3、源 和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法说穿了是利用抗体结合的专一性 将容易检测的酶先连接到抗体上 通过抗体的与目标蛋 白的结合来定位目标蛋白 目标蛋白-抗体-联上酶 检测酶促反应的有无以及活性 高低 就可以确定目标蛋白的存在与否以及量的多少了 实践中通常采用多级抗体 可 以提高灵敏度 生产上也更加方便 目标蛋白-一级抗体-二级抗体联上酶 根据实验 具体需要还可以进行灵活的调整 因而有不同的 elisa 设计 基本原理都一样抗体和抗原的区别 抗原可刺激免疫系统产生特异性抗体，而抗体可特异性地结合抗原。具体来说：抗原，是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴 细胞在体外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。抗原的基本特性有两种，一是诱 导免疫应答的能力，也就是免疫原性，二是与免疫应答的产物发生反应，也就是抗原性。抗体指机体的免疫系统在抗原刺激下，由 B 淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产 生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布于组织液 及外分泌液中。
