巨噬细胞局部浸润和增殖在狼疮性肾炎中的作用

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1、巨噬细胞局部浸润和增殖在狼疮性肾炎中的作用巨噬细胞局部浸润和增殖在狼疮性肾炎中的作用巨噬细胞局部浸润和增殖在狼疮性肾炎中的作用2009-11-16 陈伟英 杨念生 尹培达 郑智华 梁英杰 关伟明 周飞宇 蓝辉耀 摘 要 目的：观察人类狼疮性肾炎肾组织巨噬细胞浸润和增殖及其与肾脏病理和功能损害的关系。方法：采用微波免疫组织化学双重染色的方法，观察正常肾和狼疮肾组织巨噬细胞浸润和增殖与狼疮肾组织活动指数，肾脏病理和功能损害的相关关系。结果：狼疮性肾炎肾组织有多量的巨噬细胞及浸润和增殖，肾组织中的巨噬细胞数目，尤其是表达 PCNA 的巨噬细胞数目与狼疮肾组织活动指数，肾脏病理与功能损害明显相关。结论

2、：巨噬细胞浸润和增殖在介导狼疮性肾炎的病理损害中起重要作用。 关键词 狼疮肾炎 巨噬细胞 肾脏病理 EFFECTS OF LOCAL MACROPHAGE ACCUMULATION AND PROLIFERATION ON HUMAN LUPUS NEPHRITIS Chen Weiying,Yang Niansheng,Yin Peida,Zheng Zhihua,Liang Yingjie,Guan Weiming,Zhou Feiyu,Lan Huiyao.Renal Research institute,Sun Yat-Sen University of Medical Science

3、s,Guangzhou,510080. Abstract Objective:To investigate the renal local macrophage accumulation and proliferation in lupus nephritis and their correlation with renal injuries.Methods:Using a method of microwave-based double immunohistochemistry labelling,the number of Kpl,and Kpl PCNA cells in normal

4、and diseased kidney and their correlation with LN activity index,renal pathologic and function changes in lupus nephritis were examined.Results:There were marked accumulation and proliferation of macrophage in diseased kidney.The number of macrophage,particularly PCNA-expressing macrophage,showed a

5、strong correlation with LN activity,histological and function changes.Conclusion:This study suggests that local accumulation and proliferation of macrophage play an important role in mediation of progressive renal injuries in human lupus nephritis. Key words lupus nephritis macrophages renal patholo

6、gy 在大多数原发性和继发性肾小球肾炎中，巨噬细胞是肾组织的主要浸润细胞，在介导肾小球肾炎的肾损害中起重要作用1，2 。既往认为，血液中的单核细胞到达炎症组织分化为巨噬细胞后，几乎不再增殖3 。但新近的研究发现，实验性大鼠新月体肾炎的肾脏组织中有相当数量的巨噬细胞增殖，且与肾脏组织学损害、蛋白尿程度及肾功能衰退密切相关，提示巨噬细胞增生在介导新月体肾炎的发展中起重要作用4 。目前有关巨噬细胞增殖在人类狼疮性肾炎中的作用尚未见报道，本研究采用免疫组织化学双重染色的方法，观察人类狼疮性肾炎肾组织巨噬细胞浸润和增殖及其与肾脏病理损害、肾功能改变之间的关系，以探讨巨噬细胞局部浸润和增殖在狼疮性肾炎中的

7、作用。 1 材料与方法 1.1 分组 狼疮性肾炎组：32 例，均符合 1982 年美国风湿病学会 SLE 诊断标准。根据肾活检按 WHO 病理分型再分为型(8 例)、型(6 例)、型(14 例)、型(4 例)，四个亚组。 正常对照组：8 例，来自因组织配型不合不宜移植的供体肾及因肾肿瘤行肾切术但远离肿瘤部分的肾组织。 1.2 观察指标 1.2.1 病人肾穿前一天收集尿、血标本，测定尿 NAG 含量、24 小时尿蛋白定量、尿 Cr 及血 Cr 值并计算肌酐清除率(CCr)以及测定血补体 C3 含量。 1.2.2 肾活检标本行 HE 染色及 PAS 染色：计算肾小球 横切面细胞数目并作半定量评分，

8、用细胞数/肾小球横切面(细胞数/gcs)表示。0 分(正常，60 个细胞/gcs)；1 分(轻度增多，60 个90 个细胞/gcs)；2 分(中度增多，90 个120 个细胞/gcs)；3 分(重度增多，120 个细胞/gcs)。计算狼疮肾组织活动指数：活动指数包括重度细胞增多、毛细血管壁破坏、细胞性新月体、白金耳、苏木素小体、纤维素沉积、微血栓形成、间质细胞浸润、小管坏死、小动脉纤维坏死。以上各项按轻、中、重分别评为 1 分、2 分、3 分相加得总分。计算肾皮质出现病理损害的肾小管百分数。 1.2.3 肾活检标本采用新的微波免疫组织化学双重染色技术5作 Kp1 和 PCNA 染色，取 4 m

9、 厚的福尔马林固定的石蜡切片常规脱蜡至水，第一重染色用 LSAB 法，第一抗体为 Kp1(1400)，DAB 显色，阳性物呈棕色。完成第一重染色后，将切片浸入 0.01 mol/L，pH6.0 的枸橼酸缓冲液中置微波炉加热(800 W，10 分钟)，自然冷却至室温后 PBS 洗，接着进行第二重染色，用 APAAP 法，第一抗体为 PCNA(11 000)，Fast Blue 显色，阳性物呈蓝色。切片水洗后用 PAS 套染。(Kp1 为小鼠抗人 CD68 抗体，识别单核巨噬细胞；PCNA 为小鼠抗人增殖细胞核抗原抗体，可识别细胞周期中位于G1，S 和 G2 期中的增殖细胞，两种抗体均由澳大利亚

10、Monash 医学中心提供)。计算平均每个肾小球横切面及每平方米肾皮质间质中Kp1+、Kp1+PCNA+细胞数目，以s 表示。 1.3 统计学处理 狼疮组与正常组之间的细胞数比较用 u 检验。Kp1+、Kp1+PCNA+细胞数与组织学指标的相关分析用非参数 Spearman 等级相关分析；与肾功能指标(蛋白尿、尿 NAG 及 CCr)及补体 C3 的相关分析采用直线相关分析。 2 结 果 2.1 正常肾组织，肾小球及肾间质仅有个别的巨噬细胞浸润，且几乎没有 PCNA 表达(0.010.01 Kp1+PCNA+细胞/gcs；0.70.6 Kp1+PCNA+细胞/mm2 间质)。而在狼疮性肾炎、肾

11、小球及肾小管间质中积聚的巨噬细胞明显增加，且 10%40%的巨噬细胞表达 PCNA，见第 90 页表 1。此外超过 70%的巨噬细胞是聚集在肾组织损害严重部位。 2.2 巨噬细胞浸润和增殖与肾脏组织学指标及肾功能相关分析：狼疮性肾炎肾组织巨噬细胞浸润及增生与肾小球细胞增多，狼疮肾组织活动指数、肾小管间质损害、蛋白尿程度、尿 NAG 水平呈正相关关系，与肌酐清除率呈负相关关系，与血补体 C3 无相关关系，见第90 页表 2。 3 讨 论 近年来，巨噬细胞在肾脏疾病中的重要作用得到越来越多的重视，研究发现在大多数肾脏疾病中，巨噬细胞是肾组织的主要浸润细胞，且与肾脏组织学损害(间质纤维化、新月体形成

12、等)、蛋白尿程度及肾功能衰退密切相关6 ，当用全身放射性照射或用抗巨噬细胞血清耗竭巨噬细胞后则可有效地减少蛋白尿程度、防止肾组织中纤维蛋白沉积及肾组织损害的发生发展7，8 ，而将患抗肾小球基底膜肾炎大白兔的腹腔巨噬细胞被动转输给氮芥治疗后白细胞减少的大白兔体内，可引起受者肾脏出现增生性损害及蛋白尿9 。因此，巨噬细胞在介导肾脏疾病中起着重要的作用。既往认为，血液中的单核细胞到达肾脏组织分化为巨噬细胞后则几乎不再增殖，但 1995 年 LAN 等人4在实验性大鼠新月体肾炎模型中发现，来源于血液中的单核细胞在肾脏炎症部位增殖，是肾组织巨噬细胞积聚的主要机制之一，且巨噬细胞局部增殖与肾脏病理损害及肾功能衰退密切相关，从而提示巨噬细胞增殖对肾炎的发生发展起重要作用。但有关巨噬细胞增殖在人类狼疮性肾炎中的作用尚未有报道。