《羊膜细胞外基质和结膜细胞外基质重建结膜的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《羊膜细胞外基质和结膜细胞外基质重建结膜的实验研究（25页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、山西医科大学硕士学位论文羊膜细胞外基质和结膜细胞外基质重建结膜的实验研究姓名：张勤申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：王丽聪20060518山西医科大学磺士学位论文羊膜细胞外基质和结膜细胞外基质重建结膜的实验研究摘要目的本实验通过将羊膜细胞外基质和结膜细胞外基质植片移植于结膜缺损区，观察两种细胞外基质( e x t r a c e l l u l a rm a t r i x ，E C M ) 进行结膜重建的效果，探讨二者在结膜结构和功能重建中的作用，为临床治疗相关疾病提供实验依据。方法取1 2 只家兔，每只家兔双眼均制成结膜缺损模型，随机将已制备好的羊膜E C M 和结膜E C M 植片
2、分别移植于同一只家兔的左右眼结膜缺损区，隔日观察术后结膜成形情况。并将这1 2 只家兔随机分为4 组，分别于1 、2 、3 及5 周进行移植区结膜印迹细胞学检查及光镜、电镜检查。对于两种E C M 移植术后杯状细胞数目的差异采用裂区设计资料的方差分析。结果1 实验中羊膜E C M 组和结膜E C M 组均没有发生植片溶解、脱落及感染，所有植片均成活，恢复结膜正常外观，无睑球粘连、瘢痕组织形成。2 裂隙灯检查结果羊膜E C M 组于术后1 5 天时植片略水肿，可透见植床血管，周围结膜轻度充血水肿；7 天时植片发白、透明度下降，明显水肿；1 0 天时植片水肿减轻，色变红；3 周时移植区被周围上皮完
3、全覆盖，水肿消失，但植片仍有小区域充血。结膜E C M组术后l 3 天时植片灰白水肿、半透明：5 天时植片明显苍白水肿、周围结膜充血水肿；7 天时上述反应仍较明显；1 2 天左右植片开始变透明，呈淡红色：3 周时移植区充血。5周时两组移植区外观上与周围结膜相似。3 结膜印迹细胞学检查随着术后时间的延长，两组杯状细胞数目逐渐增多，结膜上皮鳞状化生程度逐渐减轻。不同时点两组比较，结膜E C M 组上皮鳞状化生程度较羊膜E C M 组轻、级别低，杯状细胞数目多( F = 1 4 8 1 6 8 ；P 2 4 c m 2 ) s u b s t i t u t i o ni nap o r c i n
4、 em o d e l B rJU r 0 1 2 0 0 0 ；8 5 ：8 9 4 5 M e l l e rD ，T s e n gS C G C o n j u n c t i v a le p i t h e l i a lc e l ld i f f e r e n t i a lo na m n i o t i em e m b r a n e I v e s to p h t h a l m o lV i sS c i 1 9 9 9 ；4 0 ：8 7 8 6 】S c h w a b1 R C u l t u r e dc o r n e a le p i t h e l
5、i af o ro c u l a rs u r f a c ed i s e a s e T r a n sA mO p h t h a l m o lS o c 1 9 9 9 ；9 ( 7 ) ：8 9 1 7 孙兴才细胞外基质对角膜创伤修复的作用国外医学眼科学分册1 9 9 7 ：2 1 ：1 1 5【8 杨勇，夏照帆，葛绳德细胞外基质与创面愈合中华整形烧伤外科杂志1 9 9 7 ；1 3 ：2 1 2【9 】F t a u m e n h a f tR ，R i f k i nD B E x t r a c e l l u l a rm a t r i xr e g u l a t
6、i o no fg r o w t hf a c t o ra n dp r o t e a s ea c t i v i t y C u r rO p i nC e l lB i o t 1 9 9 1 ：3 ：8 1 7 1 0 】罗静聪，李秀群，等脱细胞羊膜的制备及其生物相容性研究中国修复重建外科杂志2 0 0 4 ；1 8 ( 2 ) ：1 0 8 1 1 盂忻，张青巍，等结膜细胞外基质移植的实验研究与I 临床应用中华眼科杂志2 0 0 1 ；3 7 ( 3 ) ：2 0 7【1 2 K u r p a k u sM A ，L i nL T h el a c ko fe x t r a
7、 c e l l u l a rl a m i n i nb e t a 2c h a i nd e p o s i t i o nc o r r e l a t e st ot h el o s so fC O n j u n c t i v a le p i t h e l i a lk e r a t i nK 4l o c a l i z a t i o ni nc u l t u r e C u r rE y eR e s 1 9 9 9 ；1 8 ( 1 ) ：2 8 1 3 】P a s c h i d e sC A ，P e t r o u t s o sG ，P s i l
8、aK C o r r e l a t i o no f c o n j u n c t i v a li m p r e s s i o nc y t o l o g yr e s u l t sw i t hl a c r i m a lf u n c t i o na n da g e A c t aO p h t h a l m o l o g i c a 1 9 9 1 ；6 9 ：4 2 2 1 4 】柯碧莲，邱孝芝，等羊膜移植重建结膜的组织学基础眼科研究2 0 0 4 ；2 2 ( 5 ) ：4 5 9 15 P a s c h i d e sC A ，P e t r o u t
9、s o sG ，P s i l aK C o r r e l a t i o no f c o n j u n c t i v a li m p r e s s i o nc y t o l o g yr e s u l t sw i t hl a c r i m a lf u n c t i o na n da g e ，A c t aO p h t h a l m o l o g i c a 19 9 1 ；6 9 ：4 2 2O山西医辞大学磺士学位论文综述结膜重建的研究进展结膜卜皮作为限表结构的一个重要组成部分，具有参与泪膜形成、维持角结膜t皮完整等的生理功能。相对正常与稳定的结膜组织是
10、维持角膜透明及视功能的重要保证。但由于结膜暴露于外界环境中，很容易因化学烧伤、辐射伤，结膜肿瘤、变性、发育异常以及自身免疫性疾病而引起结膜正常结构的改变，表现为结膜瘢痕形成、睑球粘连、干眼，甚至角膜混浊、进行性角膜结膜化、血管化，导致视力下降。这不仅影响美观，而且也常是致盲的主要原因。随着人们对眼表疾病的进一步认识和临床的广泛研究，提出了许多新的手术方法。现回顾有关文献，综述如下： 1 自体结膜移植自1 9 7 7 年T h o f t 等【1 】首次提出利用自体结膜植片作为眼表上皮来源以来，许多学者对这种方法进行了临床试验研究。V a s t i n e 等口墚 自体球结膜植片用于重建1 4
11、 例因碱烧伤、放射性损伤、肿瘤、退行性病变及进行性异常所致的单侧球结膜睑结膜异常。D a d e y a 等【3 1 采用自体转位移植术和自体结膜瓣移植术分别治疗了1 9 例和2 0 例翼状胬肉患者，发现两种方法均获得了较好效果，有效地降低了复发。自体结膜移植用于治疗翼状胬肉时，游离或转位的自体结膜瓣覆盖于暴露的巩膜可阻止干燥和继发的巩膜溶解。与其它治疗胬肉方法( 如放疗、应用丝裂霉素等) 相比，这种方法更安全、有效，且复发率低、并发症少，已得到了广泛的认可。有些研究者认为f 4 5 I 可以把自体结膜移植作为治疗翼状胬肉的金标准，来评价其它治疗方法的有效性。自体结膜移植不仅可以恢复接近正常结
12、膜组织的外观，而且也能保持结膜的正常生理功能，不会发生排斥反应。从理论上讲是最为理想的治疗方法，但其最大的缺点是可用的结膜面积有限。因为存在潜在的健眼结膜失代偿的风险，健眼眼表的稳定性可能会受到影响，且严重的眼表疾病患者，往往双眼均受累，无正常结膜可供移植，这使得此方法的应用受到一定限制。2 同种异体结膜移植由于自体结膜移植的局限性，人们开始探索同种异体结膜移植的可行性。G a e r t n e r 6 I 报道用同种异体结膜代替增厚的结膜治疗木质样结膜炎，恢复了结膜的正常功能。D a n g e l 7 j 也曾用同种异体结膜进行结膜移植，使型粘脂病患者的角膜透明度增高。同种异体结膜移植的
13、优点在于：异体结膜植片中除有2 3 层结膜上皮外，还散布着大量杯状细胞一一一种单细胞黏液腺，有助于移植后的结膜组织从形态及功能上完全复原，达到满意的效果。但与其它器官移植相同，同种异体结膜移植中最棘手的问题也是术后的免疫排斥反应。加之结膜组织血管丰富更易出现排斥反应，大大地阻碍了其在临床中的广泛应用。山西医科大学碗士学位论文为降低同种异体结膜移植排斥反应的发生，许多研究者尝试革新同种异体结膜的保存处理方法及移植术式。K w i t k o 等f 8 】对1 0 例双侧眼表异常患者的1 2 眼行同种异体结膜移植术。8 例患者与其供体均进行了人类白细胞抗原类型的检测及交叉配型。根据临床研究结果，提
14、出术前行H L A 相容性检查，若具有同一性( 1 0 0 ) 或单倍同一性( 5 0 ) 则可大大降低排斥反应的发生。S t r a u b 9 J 应用冷冻干燥的结膜对1 4 1 例化学烧伤及热烧伤的病人行同种异体结膜移植，并对冷冻干燥的结膜进行组织学检查。结果发现所有细胞结构均被破坏，只留下一个单纯的结缔组织支架。R e i m 等| lU J 对这种植片中的多种酶及能量代谢的底物进行了研究，发现所有的能量代谢均己停止，而且所有的特殊蛋白均被异化。因此他认为这种移植片不可能具有抗原性，仅起引导组织生长的作用。我国学者段亚东J 采用无水氯化钙干燥保存的结膜复水后移植给9例睑球粘连和3 例翼
15、状胬肉患者。对植片的病理学检查发现干燥保存复水后的结膜与新鲜的结膜组织病理学无显著变化，术后随访6 月4 年，植片全部存活，且外观与正常结膜相似。尹连荣等【12 j 创新的邮票式同种异体结膜移植术在降低排斥反应方面又前进了- d , 步。这种术式的异体植片不与创面等大，是只为创面面积约1 6 大小的二片穹窿结膜，这样既可减少异体主要组织相容性抗原( M H A ) 含量及其对受体免疫系统的刺激，降低移植排斥反应，而且可以减少对供体的损伤，还能利用结膜干细胞的分化潜能，使成活的植片迅速向外扩展生长，以修补大的结膜缺损。实验结果证明邮票式同种异体移植与常规的同种异体移植均能修补创面，恢复外观，但前
16、者排斥反应明显弱，植片成活率高。同种异体结膜移植虽取得了一定的进展，但免疫排斥反应的问题仍有待进一步深入研究。3 各种粘膜移植口腔颊粘膜、唇粘膜是最为常用的替代结膜的粘膜组织。可分为部分厚度和全厚植片移植。S h o r e 等【1 3 】应用全厚粘膜植片对1 7 例类天疱疮病人的2 3 例的4 2 个眼睑结膜缺损面，进行眼险结膜重建。结果表明对于免疫抑制治疗已控制的病例，口腔粘膜植片可恢复其正常眼睑结构。F o r b e s 等【1 4 j 报道应用部分厚度的V J 腔粘膜联合B 射线照射治疗3 例复发性翼状胬肉。术后发现移植处具有良好的外观，较少的收缩及良好的眼球活动度。一般认为【l “，眼表重建多用部分厚度粘膜，但在化学伤和有过度纤维增殖者，可能选用全厚植片更合适。这种术式也不是完美的，存在有很多并发症，如植片表面角化、角膜上皮持续性缺损、植片下纤维组织增殖、植片收缩及口腔供体部位疼痛、出血、切口感染等。全厚植片移植后
