《酵母rna的提取和组分鉴定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《酵母rna的提取和组分鉴定（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、酵母 RNA 的提取 一、实验目的 1、掌握酵母 RNA 提取的方法。 2、了解核酸的组成。 3、掌握鉴定核酸组分的方法和操作。 二、实验原理 三、实验步骤 1、 用托盘天平称 1g 干酵母于研钵中，加入少许石英砂，再加入 2ml 0.04mol/LNaOH 溶液，在研钵中充分研磨至少 5min。 2、 再加 4ml 0.04mol/LNaOH 溶液于匀浆液中，混匀后，将匀浆液转移到大试管中， 再用 4ml 0.04mol/LNaOH 溶液洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中。 3、 将大试管小心在沸水浴中加热 30min，冷却后倒入离心管中，与另一组同学的离心 管在托盘天平上平衡，然后两组的离心管对
2、称地放入离心机中，2000r/min 下离心 15min。 4、 吸取 10ml 酸性乙醇溶液于小烧杯中，将离心管上清液小心倒入小烧杯中，边倒入 边搅拌，直到 RNA 沉淀完全。 5、 将小烧杯中的液体倒入 2 个干净的离心管，平衡、离心（2000r/min）3min。 6、 弃去两离心管上清液，各离心管中加入 95%乙醇 2.5ml，振荡、混匀、平衡、离心 （2000r/min）3min。 7、 弃去两离心管上清液，各离心管加入 3ml 1.5mol/L 硫酸，混匀、倒入同一个大试 管中，贴上标签，放在试管架上，备用。 8、 将水解液在沸水浴中加热至少 10min，使沉淀 RNA 充分水解。
3、 9、 取一支试管 A，加入 1ml 0.1mol/L 硝酸银溶液，再逐滴加入浓氨水至沉淀消失， 然后加入 1ml 水解液放置片刻，观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。 10、另取一支试管 B，加入水解液 1ml，三氯化铁浓盐酸溶液 2ml 和地衣酚乙醇 溶液 0.2ml（约 4 滴） ，混匀，用试管夹夹好后放到沸水浴中 35min，注意观察溶 液是否变成绿色，说明核糖的存在。 11、再取一支试管 C，加入水解液 1ml 和定磷试剂 1ml，混匀，在沸水浴中加热， 注意观察溶液颜色的变化，溶液变蓝，说明磷酸存在。 注意事项：离心一定要平衡对称放入离心机中，离心机达到设置转速时才能离开。 四、实验
4、结果 第 6 步中离心管底部有不少的 RNA 沉淀。 试管 A：出现白色浑浊现象。有嘌呤碱存在。 试管 B：加热后，出现鲜绿色，且随着加热时间延长，颜色越来越深。有核糖存在。 试管 C：加热后，出现蓝色，且随着加热时间延长，颜色越来越深。有磷酸存在。 说明 RNA 的组分中有嘌呤碱、核糖、磷酸。 分析： 本实验选用酵母，是因为酵母中 RNA 含量较多，且价格便宜。RNA 可溶于碱性 溶液，所以本实验用 0.04mol/LNaOH 溶液来提取。RNA 不溶于乙醇，可用酸性乙醇 使 RNA 从溶液中沉淀出来，再用乙醇洗涤沉淀，可得到 RNA 粗制品。 研磨和 NaOH 使酵母细胞破裂，RNA 主要
5、存在于细胞质中，所以 RNA 被释放出 来，同时，NaOH 使蛋白质变性。 加入酸性乙醇，一方面可以中和 NaOH，另一方面，使 RNA 从溶液中沉淀下来。 RNA 含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸等组分，加入硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 （1） 、强酸使核酸分子的有机磷消化为无机磷，使之与钼酸铵结合成磷钼酸铵 （黄色沉淀） PO43- + 3NH4+ + 12MoO42- + 24H+ =(NH4)3PO4.12MoO3.6H2O + 6H2O 当有还原剂（如维生素 C）存在时，Mo6+被还原成 Mo4+，再与试剂中的其它 MoO42-结合成 Mo（MoO4）2，呈蓝色，称钼蓝。所以试管 C 中会出现蓝色。 （2） 、RNA 与硫酸共热，生成的核糖进而脱水转化为糠醛，三氯化铁作为催化剂， 可与地衣酚反应，生成绿色化合物，所以试管 B 中出现绿色。 （3） 、嘌呤碱可与硝酸银反应产生白色的飘零银化合物沉淀。所以试管 A 中出现 浑浊现象。 （4） 、不检测嘧啶碱，是因为与嘌呤碱相比，它难以被水解下来，同时它难检测 且现象不明显。
