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1、哈尔滨医科大学硕士学位论文中文摘要目的研究5 一 1 00蛋白在冠状动脉旁路移植术静脉桥中的表达。方法2 5只健康新西兰大耳白兔随机分五组，每组 5只。将颈外静脉移植到同 侧颈总动脉， 分别在术后6h， Zd，7d， 14 d ， 2 8d取材。 应用免疫组化和形态学分析观察不同时间 5 一 100蛋白阳性细胞数的表达， 采用计算机图象分析法钡 d 量静脉桥管腔内膜， 中膜厚度及其比值。结果实验过程无实验动物死亡。吻合完成时各吻合口均通畅。在 7d时内 膜和中 膜厚度较6 h 明 显增厚， 有显著性差异 ( p 0 刀 5 ) 。 移植后6 h 至7 d ， 在血管平滑肌细胞 ( v s M
2、c )中，5 一 1 0 0 蛋白 逐渐增多，于7 d 达高峰( p 0 刃 5 )S t a i n i n g fo r S 一 1 0 O w a s s i g n i fi c a nt l y h i ghe r ( a n a i y s i so fv a r i 如c eP 0 . 0 5 ) 。移植后各组静脉桥内膜、中膜厚度、及内膜中膜厚度比值见表1 。表1 各组内膜、中膜厚度、n 二5 )内膜厚度 u m )3 . 0 9 士0 . 3 1内膜中膜厚度比值( x士5中膜厚度( 叮)3 8 . 7 7 士3 . 3 06 . 0 8 士0 . 6 2 4 2 . 2 0 士
3、6 . 1 8内膜/ 中膜比值0 . 1 5 士7 . 5 80 . 1 8士4 . 5 76 9 . 1 2 士4 . 8 35 0 . 8 0 士3 . 1 21 . 4 0 士7 . 8 5洲 ，0月以 q一了1 4 d2 8 d7 6 . 7 士6 . 5 05 6 . 1 0 士6 . 4 21 . 3 2十0 . 2 37 2 . 4 1 士2 . 6 95 8 . 0 8 士4 . 6 41 . 3 9士0 . 1 2注:* 与611相比P0 0 1 ;1 4d 、2 8d至 件 二二4 诱摹 鬓蚤谁 咬、 理币洛 巍 漏蒸一 _ _柑 茸 一 布 一 吟一，代 ， 一续 考乌竹
4、一 份: 公 户狐 蒸箭颤 曰夔口艾年洲偏 -;蒙网黔!聋 考_ 三 颧一矍犷-嚷 月攀丁 习嘿狂翼芬 万鬓塌困 鬓一泣嘟_ 分-蘑 黔靡 霎六哗夔履 夔队翼喘口内膜困外Jl莫nU门们n日门门Un曰Un八UC a曰八一厂吕5斗n乃勺占1(11一1铡助9鹜图1不同时相1 / M哈尔滨医科大学硕士学位论文二、免疫组化正常血管平滑肌细胞中未测及5 一 100蛋白表达。移植后6h ，于吻合口处出现少量5 一 1 0 0 阳性细胞，光镜 F 见VS M C细胞核呈棕黄色( 见图8 ) 。移植后6h至7 d ， 5 一 1 0 0 蛋白V S M C逐渐增多( 见图9 )， 7 d s 一 1 0 0蛋白
5、V S M C数与移植后6 h相比差异有显著意义( P0 .0 1 ) 在移植后1 4d 、2 8ds 一 1 0 0蛋白V S M C开始下降( 见图1 0 ，图1 1)， 5 一 1()O蛋白V S M C数与移植后7 d相比差异有显著意义( 只0.0 1 ) 。5 一 1 0 0阳性细胞数的表达见表2 。表2 5 一 1 00 阳性细胞数(%犷士s n= 5)时间均数标准差6 h2 _ 9 门门 闷 47 . 4 01 4 . 6 00 . 1 58 . 3 0冲 J口J曰 q山了! 4 d 衅2 8 d 冲 *7 . 4 8 04 . 8 理4 . 1 2 02 . 8 4注:* 与6
6、 h相比P0 . 0 1 ;* 泳 与了 d相比P(0 . 0 1家兔静脉移植桥血管内膜 5 一 100 蛋白的表达讨 论、家兔静脉桥狭窄模型的评价冠状动脉旁路术( C A B G )是目前外科治疗冠心病的主要手段，但手术后移植静脉桥狭窄是临床上未能圆满解决的问题，冠状动脉旁路术有其自 身的特点，我们取兔颈外静脉，与颈总动脉行端侧吻合，两吻合口之间的颈总动脉予以结扎，以期建立一种与冠状动脉旁路术后移植静脉桥狭窄病理过程相似的动物模型。于兔颈部行动静脉吻合，对动物的全身影响较小，且颈外静脉与颈总动脉解剖位置比较固定，易于衬找。 而骼动静脉吻合由于需要进腹手术，对动物创伤较大。 另外，颈总动脉距离
7、心脏较近动脉压力较高，对移植静脉内膜损伤较大，易真实模拟C A 比 中心脏上的旁路术。 由于兔颈部颈外静脉与颈总动脉血管较细，一般体重2 . 6 k g的新西兰白 兔颈总动脉的直径约为1 . Z mln ，而颈外静脉的直径变化较大，约2 一3mln。为了精确对合血管内皮层，我们使用手术放大眼镜，同时采用四针牵引，牵引针之间间断吻合的方法大大地方便了血管吻合。 当然，如果采用狗的颈部模型，由于颈外静脉及颈总动脉较粗，可以采用连续缝合。 术后1月，取血管桥肉眼见管壁增厚，桥新内膜形成提示该模型是成功的管腔狭窄，病理切片光镜下见吻合口，静脉。 由于新西兰大白兔价格低廉，要求不高，手术操作简单，动物手
8、术麻醉便于管理，结果满意，所需手术器械故该模型能真实反映动静脉旁路术的病理过程，是进一步研究防治静脉桥狭窄的理想模型。二、5 一 100 蛋白与静脉桥5 一 1 0 0 蛋白是神经组织中一种钙结合蛋白质，主要分布于中枢神经系统星形胶质细胞及相应的肿瘤病细胞内， 因能百分之百溶解于饱和硫酸钱溶液中而得 名12 9 5 一 1 0 0 蛋白分子由。 亚基和p 亚基组成， 相又 寸 分子量为2 1 0 0 0 ， P H4 . 1 ，有3 种存在形式;5 一 1 0 0 。 、5 一1 0 0 日p 和5 一 1 0 0 a日 ，f o n o 等 3 0 研究表明，5 一 1 0 0 0。 主要存
9、在于神经胶质细胞内， 5 一 1 0 0 日日 存在于神经胶质细胞和雪旺哈尔滨医科大学硕士学位论文细胞中， 5 一 1 0 0 。日 则立存在于横纹肌、 心肌和肾 肌组织中， w i es m ann 3l 等报道，5 一 1 0 0 蛋白的表达随着神经系统的生长发育呈平行增加，尤其是在胶质细胞内明显，而成年人神经系统内的5 一 1 00蛋白含量极低相对稳定。虽然乳内动脉桥比大隐静脉有更好的远期通畅率， 但大隐静脉桥还是最常用的血管桥， 血栓形成、内膜纤维组织增生和血管的粥样硬化是导致静脉桥较高闭塞率的原因。 近年来通过分子水平研究发现， 抗原表达型树突状细胞在移植血管再狭窄过程中 起重要作用
10、132 一3a， 5 一 1 00蛋白 树突状细胞表达特异性抗原， 可作为识别该细胞的指标， cl er i an等瞬 应用细胞免疫组化方法发现， 5 一1 00 ( +) 细胞不规则的分布在平滑肌细胞间。同时与T 淋巴细胞、肥大细胞共存于狭窄的静脉桥 血 管 内 膜 粥 样 硬 化 斑 块 中 ， 正 常 的 血 管 内 膜 中 未 发 现 任 何 5 一 1 00( + ) 在 另一项研究中，以 c h er i an33等在电子显微镜下 观察到抗原表达型树突状细胞含有发育完好的管粒结构体系，这有别于其它树突细胞。 O z m 即等还发现， 在狭窄或闭塞的静脉桥内膜中，弥漫地散布着一些表达
11、补体C D 4 O 分子的细胞，间或可见一些C D 40( +)细胞簇。 进一步研究发 现， 有一部分c D 4 0( +)细胞同时表达5 一 1 00， 这些细胞散在于血管内 膜、 中层甚至血管外膜。由于C D 40分子在免疫反应中起调节 作用，抗原表达型树突状细胞通过C D 40分子调节T 淋巴 细胞反应， 在桥血管的病变中起作用。本实验结果显示， 移植后6h于吻合口处出现少量5 一100lJ日 性细胞，光镜下见5 一1 00细胞核成棕黄色。移植后6h至7d， 5 一 1 00蛋白V S MC 数逐渐增多， 于7d达高峰。 5 一 1 00蛋白V S MC 数与 移植后6h相比差异有显著意
12、义 ( p 0 刀 1 ) 移植后1 4 d ，2 8 d s 一 1 0 0 蛋白 v S MC 数开始下降， 5 一 1 0 0 蛋白 v S M C 数分别为与移植后7h相比 差异有显著意义 ( p 0 o 1 ) 。 在本研究结果表明，在移植静脉中: 一 100 蛋白表达与内膜增值有显著的关系，表达愈强，内膜增殖愈明显。另外在对照组正常血管中未发现5 一 1 00蛋白的表达。三、移植静脉桥与内膜增生内膜增值是静脉移植物再狄窄的病理基础。平滑肌细胞增殖和移行是血管内膜增值的关键。正常生理状态下，血管的各种收缩/ 促生长因子与 扩张/抑生长因子处于动态平衡。在血 _ 管受损，内皮功能失调的
13、状杰下，这种平衡家兔静脉移植桥血管内膜 5 一 100蛋白的表达被打破，内皮细胞来源的抑制因子产生减少，而促进内膜增生的因子增加，静脉管壁内膜局部内皮源性生长因子相对浓度则高，就产生了浓度梯度，引起中层平滑肌沿浓度梯度向内膜层移行和增生。血管平滑肌细胞增殖由收缩型向合成型转化，产生大量细胞外基质，堆积于细胞间隙，致血管壁增厚，管腔狭窄。同时静脉桥内膜的过度增生可使移植物血管变得僵硬，从而影响静脉桥血管壁的弹性及柔韧性，反过来影响移植物血管的重构。而且新生内膜可视为动脉粥样硬化的土壤，其内可结合致动脉粥样硬化的脂蛋白，导致静脉桥的退行性改变，影响静脉桥的寿命及远期疗效。本实验结果显示，术后第7d
14、，1 0d各有 1 例静脉桥阻塞。静脉移植后6d，有少量内膜出血。炎性细胞Z d后勃附与内皮，平滑肌细胞交错排列，其间为胞外基质。在7d 时内膜和中膜厚度较6d 明显增厚， 而在 14d ， 2 8d 时内膜和中膜厚度较7d 没有明显变化，提示7d 是血管重朔的高峰期。本实验结果证明，5 一 100 蛋白表达与内膜增殖有密切联系，可做为一个早期指标反应血管损伤后内膜的增殖是否通过抑制 5 一 1 00 蛋白的表达从而抑制平滑肌细胞增殖，也为在分子水平上治疗冠状动脉旁路移植术后再狭窄提供了前景。哈尔滨医科大学硕十学位论文结论1 5 一 1 00 蛋白的表达与内膜增殖有密切联系，叮 做为一个早期指
15、标反应血管损伤后内膜的增殖的指标。2 是否可以通过抑制5 一 100 蛋白的表达而抑制V S MC的增殖， 成为分子水平上治疗冠脉搭桥术后再狭窄的新课题。家兔静脉移植桥血管内膜5 一 100蛋白的表达致谢感谢尊敬的席振山导师在我攻读硕士学位三年期间， 在学习、 工作和生活诸多方面给予我的无微不至的关怀， 感谢席振山老师对本课题的全面指导和大力帮助。导师渊博的学识、 严谨的科学作风、 精湛的医术和真诚的品德将使我终生受益，导师敢为人梯的精神是我毕生效仿的楷模。感谢哈医大一院心外科王柏春博士对本课题的大力支持及二年来对我本人的关心与爱护。感谢哈医大一院张东华教学院长及全体老师的关心和培养。感谢哈医
16、大一院心外科陈厚坤教授、 禹亮教授及全体心外科老师和同学的关心与帮助哈尔滨医科大学硕士学位论文参考文献1 . G r u b e r gL， W a k s用 a nR ，S a t l e rL F ，e ta l .N o v e lf () 下 t h ep r e v e : t l o n o fr e s t e n o s i s J E x p e r tD r 口 9 5， 2 0 0 0 ， 9 : 2 5 5 5 一 2 5 7 8 .a P P r o a c h e sO p i nI n v o s t i 只2 . B a r t o r e l l iA ， T r a b s t t o 门 iD .C o n 七 m p o r a r u ya n t i t h r o m b o t l es t r a t e 只 i c s上 n P a t l e n t sC a r d i o a n g i ou n d e r g o i n gC a r d i o
