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1、安徽医科大学硕士学位论文Her-2/neu、MMP-2在胃癌中的表达状态及临床意义的研究姓名：王消防申请学位级别：硕士专业：外科学（普外）指导教师：刘弋;常家聪20100701安徽医科大学硕士学位论文 2Her-2/neu、MMP-2在胃癌中的表达状态及临床意义的研究 Her-2/neu、MMP-2在胃癌中的表达状态及临床意义的研究 中文摘要 背景背景：胃癌是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一，严重危害人类的健康，我国胃癌的现状是：发病率高、早期诊断率低、手术切除率低、死亡率高，但其发病机制仍不是十分清楚。近年来随着肿瘤发生在分子水平上研究的深入，许多原癌基因、癌基因及表达产物与胃癌关系的相继发
2、现，人们对胃癌的发病机制有了新的认识。Her-2/neu、MMP-2是目前研究较多的两种指标。 Her-2/neu基因又称c-erbB-2基因，是定位于人染色体17q21，编码185KD的跨膜糖蛋白（p185） ，在胃，乳腺，卵巢，肺，肝等十余种癌症中均显示有过量表达，其编码的蛋白P185过量表达提示肿瘤恶性程度高，患者预后较差。HER-2/neu基因异常激活（过度表达或基因突变）后，通过一系列信号传导通路（如Ras-Raf-Mek-MAPK、PI3K-Akt激酶、cAMP、蛋白激酶A、磷脂酶C-a和src等）使细胞的生物学特性发生改变，促使细胞发生恶性转化、发生基因突变，其产物p185被异常
3、激活后发生自身磷酸化,并磷酸化其他底物,引起下游的信号传导,最终导致细胞的增殖、癌变。 基质金属蛋白酶(MMPs)是在自然界进化过程中高度保守的一类酶，它在炎性细胞因子、激素、生长因子刺激下及细胞转化生长过程中表达量上升，在人体多种生理或病理状态，如炎症、血管形成、肿瘤侵袭转移过程中表达增高。而其成员MMP-2是肿瘤侵袭转移过程中最重要最直接的基质金属蛋白酶。它以酶原的形式由结缔组织细胞产生，降解，V型胶原及明胶等，在癌细胞在穿过基底膜和ECM的过程中发挥了重要的作用，主要参与了局部基质的降解，这种局部降解对于癌细胞的迁移具有决定性作用,即胃癌细胞扩散与血管侵犯的关键环节。MMP-2不仅通过降
4、解ECM促进肿瘤侵袭转移，还通过刺激毛细血管内皮细胞增生、新生血管、新生淋巴管形成等促进肿瘤生长和淋巴途径扩散。 目的目的：本研究旨在通过免疫组化法（IHC）检测Her-2/neu和MMP-2在胃癌中和癌灶远隔胃癌组织中的表达情况， 分析Her-2/neu和MMP-2与胃癌的临床病理特征之间的关系， 探讨运用Her-2/neu和MMP-2分子靶向药物为胃癌的进行辅助治疗安徽医科大学硕士学位论文 3的可能性，为胃癌的分子靶向治疗寻求理论基础。 方法方法：采用免疫组化染色方法（s-p法）检测Her-2/neu和MMP-2在60例胃癌组织和30例癌灶远隔胃组织的表达情况， 并分析Her-2/neu和
5、MMP-2与胃癌的病理生物学特性的相关性。 结果结果：Her-2/neu和MMP-2在60例胃癌组织中均有不同程度的表达：Her-2/neu表达率为23.3%（14/60） ，MMP-2表达阳性率为61.7%（37/60） ，而30例癌灶远隔胃组织Her-2/neu未见表达，MMP-2表达率为26.7%（8/30，p0.05）；胃癌组织中Her-2/neu和MMP-2的表达存在关联并有较好的一致性（p0.05);The expression of HER-2/neu and MMP-2 in gastric carcinoma was closely related to TNM stages
6、, lympha node metastasis and encroaching the serous membrane(p0.05） ，差别无统计学意义，而二者与肿瘤的是否侵及浆膜组间的差距有显著统计学意义，p值均小于0.05.具体见表7、8。 安徽医科大学硕士学位论文 21表7.Her-2/neu与肿瘤患者其他临床病理特征的关系 Tab7.Relation between expression of Her-2/neu and other clinical pathology features of gastric carcinoma Her-2/neu 特征参数 例数 阴性 阳性 比率
7、2 p 年龄 60岁 35 29 6 17.14% 2=1.799 P=0.180 0.05) （见表6、 7） ，说明HER-2/neu和MMP-2表达不受上述因素的影响，可能是胃癌发生、发展过程中相对较独立的影响因素。 在观察HER-2/neu和MMP-2表达水平与是否侵及浆膜的关系时我们发现，侵及浆膜和未侵及浆膜组它们的表达水平有显著性差异（p0.05），提示HER-2/neu和MMP-2阳性表达的胃癌的局部侵袭性更强，更易侵安徽医科大学硕士学位论文 26犯周围组织，这也提示HER-2/neu和MMP-2阳性表达的胃癌恶性程度更高，患者的预后较差。 4.6 Her-2/neu和MMP-2
8、在胃癌中表达之间的关联性 4.6 Her-2/neu和MMP-2在胃癌中表达之间的关联性 胃癌患者中Her-2/neu和MMP-2的表达关联性尚未见报道，La Rocca 等人第一次报道在乳腺癌中MMP-2的水平与HER-2/neu基因增殖相关， 而后者是肿瘤具有高侵袭性的标记物33,34,35,36。有数据显示活性MMP-2水平与Her-2/neu过度扩增和雌激素受体表达有关联。一种理论认为，表达HER-2的肿瘤患者HER-2基因增殖或者过度表达会通过特定的信号肽途径导致MMP-2生成增多，产生高转移风险。Decock和coworkers33,34提供了相似的理论，他们认为肿瘤患者中血浆中明
9、胶水解酶水平可能与Her2/neu基因扩增有关。 在Her2/neu过度表达的肿瘤里血清中活性MMP-2浓度会显著增加，这就提示Her2/neu有通过特定的信号肽途径影响癌组织中MMP-2活性。这种机制具体怎样发挥效应目前还不十分清楚，有待进一步研究。本实验中在胃癌组织中Her-2/neu和MMP-2的表达的阳性率分别为23.3%（14/60）和61.7%（37/60） ，二者同时阳性率为18.3%，同时为阴性率28.3%，二者表达差异率为43.3%。通过22配对资料的关联性分析，Pearson列联系数=0.496（0.01） ，说明在胃癌中Her-2/neu和MMP-2的表达存在关联性。故此
10、，我们推测Her-2/neu表达阳性的胃癌患者之所以相对表达阴性的患者有较差的预后，原因之一可能是通过特定信号途径增强了患者体内MMP-2表达及活性，导致癌细胞转移率增高。该特定途径的具体机制将是我们下一步要研究的主要课题。 4.7 Her-2/neu和MMP-2在胃癌中表达给肿瘤的分子靶向治疗打下了基础 4.7 Her-2/neu和MMP-2在胃癌中表达给肿瘤的分子靶向治疗打下了基础 分子靶向治疗技术是近年来研究的热门课题， 它给肿瘤尤其是失去手术指征的中晚期肿瘤的治疗带来了福音。靶向治疗技术应用于胃癌的治疗，给胃癌的治疗打开了崭新的一页，它有望提高进展期胃癌的远期疗效，延长患者生存时间。现
11、在靶向治疗技术的应用主要依赖于对靶向分子状况的评估37,38包括靶向分子的作用、表达程度和稳定性等。 4.7.1 HER-2/neu的靶向治疗机制及现状 4.7.1 HER-2/neu的靶向治疗机制及现状 本研究结果显示，随机抽取的60例胃癌患者中，HER-2/neu阳性表达14例，阳性率为23.3%，说明我国胃癌患者中存在HER-2/neu的表达，为下一步的安徽医科大学硕士学位论文 27HER-2/neu靶向抗体Herceptin应用于胃癌辅助治疗，提供了理论依据。 Herceptin是通过转基因技术获得的单克隆抗HER-2/neu抗体，主要机制是特异性结合HER-2/neu的细胞外部分，下
12、调HER-2/neu，拮抗HER-2/neu的促生长作用，介导抗体依赖性细胞毒作用及抗血管生成，增强化疗的细胞毒性39,40,41。许多临床实验证实， Herceptin对于表达HER-2/neu阳性的尤其是出现转移的乳癌患者，能克服她们对化疗、放疗、内分泌治疗的耐受，增强辅助化疗的效果，提高化疗的有效率和缓解率42,43。胃癌与乳腺癌中的HER-2/neu基因具有高度的同源性44，作为胃癌的预后的独立影响因素，针对HER-2/neu的单克隆抗体是有实用价值的45，HER-2/neu高表达的胃癌患者也适用于Herceptin治疗。TOGA实验是Herceptin应用于胃癌治疗的实验，在国外已经
13、大规模开展29，取得令人满意的效果，因此，目前国内亟待开展该项实验。 4.7.2 MMP-2的分子靶向治疗机制及现状 4.7.2 MMP-2的分子靶向治疗机制及现状 本研究结果显示，60例患者中，MMP-2 表达阳性的37例，阳性表达率61.7%（37/60） ；在30例对照组中，MMP-2表达阳性的8例，占26.7%（8/30） 。MMP-2的分子靶向治疗机制主要是：竞争性结合MMP-2；减少MMP-2分泌；抑制MMP-2活性等几个方面。 Bramhall SR46等研究认为，胃癌是少数几种使用基质金属蛋白酶抑制剂后患者生存率有明显提高的肿瘤之一。因此，本研究结果的MMP-2高表达，为MMP
14、-2作用途径的阻滞剂和抑制剂用于胃癌的辅助治疗，奠定了基础，其降低和减少MMP-2的活性，减少肿瘤转移和复发，可望提高胃癌患者尤其是进展期患者的生存率。 常用的主要有唑来膦酸（zoledronic acid），它减少循环中的MMP-2，表现出较强的抗血管生成能力和降低肿瘤细胞对骨的侵袭力47，二碳磷酸盐化合物(BPs)，如氯屈膦酸盐（clodronate）通过抑制MMP-2的分泌，抑制肿瘤生长和转移。氯屈膦酸盐也抑制激活MMP-2的关键蛋白MT1-MMP 的活性。阿屈膦酸盐（alendronate）通过时间和剂量依赖的方式下调 mRNA和细胞的MMP-2水平来抑制细胞侵袭48。人工合成的MMP
15、-2抑制剂有素拟肽MMP抑制剂，非肽类的MMP-2抑安徽医科大学硕士学位论文 28制剂， 和四环素衍生物39,49,50,51。 MMP-2的阻滞剂有BMS-2752291 （抑制血管生成） ，MMI 270B/CGS27023A和ONO-4817（抑制淋巴结转移），ABT-518（抑制细胞增殖作用），A-177430（干扰环氧化酶-2的功能），FYK-1388 和Ro-28-2653, BAY-12-9566,AG3340（增加细胞凋亡）和BMS-275291等。国内，这些药物用于胃癌的治疗效果还有待开展大规模临床实验。 安徽医科大学硕士学位论文 295 结论 5 结论 5.1 HER-2/
16、neu和MMP-2在胃癌组织中有较高表达，推测上述指标可能参与了胃癌的发病过程。 5.2 HER-2/neu和MMP-2阳性表达与胃癌的某些病理生物学特性有关， 肿瘤的TNM分期越高、有淋巴结转移和侵犯浆膜，HER-2/neu和MMP-2的表达就越高，提示二者在胃癌的进展过程中起着某种作用。 5.3 HER-2/neu和MMP-2在胃癌中的表达存在关联并有较好的一致性，提示在胃癌的发生发展过程中二者可能起相互诱导或者协同效应。 5.4 我们推测：作为肿瘤发生、发展过程的重要参与者，HER-2/neu和MMP-2在胃癌中的表达，使得HER-2/neu单克隆抗体Herceptin和作用于MMP-2的相应的阻滞剂和抑制剂用于胃癌的辅助治疗成为选择，可望提高患者生存率。 安徽医科大学硕士学位论文 306 进一步研究方向 6 进一步研究方向 6.1 HER-2
