《临床分离铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床分离铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性的研究（66页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、福建医科大学硕士学位论文临床分离铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性的研究姓名：房丽丽申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：宋秀宇20090301福建医科大学临床检验诊断学2 0 0 6 级硕士研究生房丽丽毕业论文 临床分离铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性的研究目的：中文摘要了解我院临床分离铜绿假单胞菌产金属p 内酰胺酶情况及亚胺培南西司他丁钠对其的抗生素后效应，为临床抗感染治疗及医院感染的监测和控制提供循证医学依据。方法：2 0 0 7 年7 月至2 0 0 8 年1 0 月我院住院患者送检标本分离铜绿假单胞菌3 3 5株( 同一患者同类标本分离菌株不重复计入) 。采用V I T E K2C
2、o m p a c t 自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药敏测定，同时测定M I C 。对于亚胺培南不敏感的铜绿假单胞菌，采用双纸片协同试验和P C R 技术检测金属酶，并对P C R 产物进行测序；对于亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌，采用菌落计数法和流式细胞术检测亚胺培南西司他丁钠对其的抗生素后效应。结果：1 铜绿假单胞菌的分离率为9 2 ( 3 3 5 3 6 5 3 ) ，I C U 患者铜绿假单胞菌分离率居全院之首，其感染部位主要分布于呼吸道( 8 0 6 ) 。2 对亚胺培南不敏感的铜绿假单胞菌对氨曲南、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星、哌拉西林他唑巴坦的耐药率均显著高于对亚胺培南敏感的铜绿
3、假单胞菌( 户 3 9 6 ) 1 4 1 , 4 3 1 ，给药后定时取脑脊液进行药物浓度测定和菌落计数。豚鼠肺感染模型，先给豚鼠肺组织中注入菌悬液，给药后定时监测药物浓度并对肺组织匀浆进行菌落计数，按公式计算P A E 。兔及大鼠的心内膜炎模型，向兔心腔中注入菌悬液后给予抗生素，定时取心脏内血液进行药物浓度测定和菌落计数，然后按公式计算P A E 。家兔感染的组织支架模型【4 1 1 ，在兔皮下植入2 “ - - 4 个钢网或塑料支架，待其中渗满组织液后进行实验。小鼠皮下感染棉条模型，采用浸有细菌的感染棉条种植于小鼠背部小切口的皮下，植入皮下的棉条可于给予抗生素前后不同时间，进行细菌计数的
4、同时还可测定感染部位的抗生素浓度，因而这模型比小鼠股部感染模型有更大优点。本研究根据临床分离铜绿假单胞菌对亚胺培南的敏感性情况，把P A 分为两部分，即对亚胺培南不敏感的铜绿假单胞菌和对亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌。对于亚胺培南不敏感的铜绿假单胞菌，通过采用双纸片协同试验和P C R 技术检测金属酶并对P C R 产物进行测序，以了解本地区铜绿假单胞菌中金属酶基因型的流行情况和耐药性变化情况，为临床抗感染治疗以及医院感染的监测和控制提供循证医学依据，并对铜绿假单胞菌产金属酶检测方法进行评价分析，初步探讨在临床实验室中建立一种及时、准确的金属酶检测方法；对于亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌，采用菌落计数
5、法和流式细胞术检测亚胺培南西司他丁钠对其的抗生素后效应，以初步探讨建立流式细胞术检测P A E 的方法，最大程度发挥亚胺培南一西司他丁钠的抗生素后效应，延长其使用年限，制定合理、安全有效的给药方案，达到良好的抗菌作用和临床疗效，降低不良反应的发生率，提高患者的依从性，减轻患者的医疗负担。1 3福建医科大学临床检验诊断学2 0 0 6 级硕士研究生房丽丽毕业论文 临床分离铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性的研究第一部分临床分离铜绿假单胞菌病区分布及耐药性分析材料与方法1 实验菌株收集2 0 0 7 年7 月至2 0 0 8 年1 0 月我院临床分离标本，经法国B i oM e r i e u xV I
6、 T E K2C o m p a c t 自动细菌鉴定仪鉴定出病原菌3 6 5 3 株( 同一患者同类标本分离菌株不重复计入) ，其中，铜绿假单胞菌3 3 5 株。保存于甘油肉汤保存液中，2 0 保存备用。2 质控菌株大肠埃希菌A T C C 2 5 9 2 2福建省临床检验中心铜绿假单胞菌A T C C 2 7 8 5 3福建省临床检验中心金黄色葡萄球菌A T C C 2 5 9 2 3福建省临床检验中心3 主要试剂M H 培养基：牛肉浸出粉6 0 9 L ，酸水解酪蛋白1 7 5 9 L ，可溶性淀粉1 5 9 L ，琼脂粉1 3 0 9 L 。营养琼脂培养基：蛋白胨1 0 0 9 L ，
7、牛肉膏3 0 9 L ，氯化钠5 0 9 L ，琼脂粉1 5 O 2 0 0 9 L 。4 主要仪器V I T E K2C o m p a c t 自动细菌鉴定及 法国生物梅里埃公司 药敏测定仪及其专用鉴定卡及药敏卡B a c T A L E R T3 D 自动血培养仪法国生物梅里埃公司H E P AC L A S S1 0 0 二氧化碳孵育箱美国T h e r m o 公司V I T E X 比浊仪法国生物梅里埃公司5 统计学分析所有数据采用S P S S l 4 0 统计软件包进行统计分析，P O 0 5 ) 。福建医科大学临床检验诊断学2 0 0 6 级硕士研究生房丽丽毕业论文 临床分离
8、铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性的研究表l临床分离铜绿假单胞菌病区分布1 6福建医科大学临床检验诊断学2 0 0 6 级硕士研究生房丽丽毕业论文 临床分离铜绿假单胞茵对亚胺培南耐药性的研究3 临床分离铜绿假单胞菌的标本分布3 3 5 份铜绿假单胞菌感染标本中，痰液、中段尿和分泌物的铜绿假单胞菌分离率居前三位( 表2 ) 。比较痰液、血液、尿液和粪便标本分离非发酵菌属细菌情况，经，检验，痰液标本比血液标本更易检出铜绿假单胞菌妒 O 0 5 ) 。表2 临床分离铜绿假单胞菌标本分布4 临床分离铜绿假单胞菌的耐药性分析3 3 5 株铜绿假单胞菌中有4 4 株对亚胺培南不敏感，占1 3 ：1 。有3 0
9、对亚胺培南不敏感的铜绿假单胞菌对美罗培南敏感。1 8 株( 5 4 ) 铜绿假单胞菌对p一内酰胺类抗生素耐药同时对氨基糖苷类和喹诺酮类交叉且多重耐药。3 3 5 株铜绿假单胞菌对丁胺卡那霉素敏感性为9 4 9 ，对庆大霉素有8 7 5 敏感。替卡西林和哌拉西林他唑巴坦对铜绿假单胞菌有较强的抗菌活性，敏感率9 1 3 “ - 9 5 2，第三代及第四代头孢菌素、氨曲南、喹诺酮类等抗菌活性差，敏感率为1 4 91 7福建医科大学临床检验诊断学2 0 0 6 较硬士研究生J l 丽丽毕韭论文 临床分离铜绿龊单胞蕾对王胺培南酎药性的研究6 0 0 。具体药敏情况见图l 、2 。耋i 翔i jj 口萱1
10、 0 0 ，、8 0 琶舰藿4 0 霉2 0 0 A M KA T MC A ZC I I C R O1 1 ，G E NI P ML V XS X Ln CI I ) Hl 什抗生素图1 临床分离铜绿假单胞菌药敏情况 洼：A M K ：丁歧卡那霉素：删：氟曲南；C A Z “ 岳孢饱嚏：C I I ：珲丙沙景： C R O ：头推曲橙：F E R 头孢毗孵O 毗崖大霉誊：删：艘埘南：L V X ：左氧氟沙星；S X T 复方新诺明；T I C “ 替卡西# ：“ r o B ：妥布霉素： 皿碾拉西林，他畦B 坦 口RIS川| | 嚣梦梦毋拿毋毋抗生素图2 对亚胺培南不敏感的锕绿假单胞菌药敏情
11、况 注：A M I C T 睦卡那霉繁：删：氯曲南，c z ：头孢他畦；c 口W 丙沙星：C R O ：头孢曲格：甩R 头孢毗肟：G E M 庆太霉素：L v x 左氧氟沙星： s x t 复方新谱碉：T I C ：普卡西椒“ r o B ：墨布霉索：m 碾拉西柑饱畦E 坦福建医科大学临床检验诊断学2 0 0 6 级硕士研究生房丽丽毕业论文 临床分离铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性的研究比较4 4 株对亚胺培南不敏感的铜绿假单胞菌和2 9 1 株对亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌对常用抗菌药物敏感性的差异，结果显示：丁胺卡那霉素、头孢曲松、头孢吡肟、庆大霉素、复方新诺明、替卡西林、妥布霉素之间无统计学意
12、义p 0 0 5 ) ，而氨曲南、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星、哌拉西林他唑巴坦均有显著性差异( P 0 0 5 ) ；2 M P A I M P 协同试验、3 M P A I M P 协同试验及巯基乙酸I M P协同试验之间阳性率无统计学差异( 尸 O 0 5 ) ；E D T A - I M P 协同试验法与P C R 法阳性率有统计学差异，认为E D T A - I M P 协同试验法阳性率显著高于P C R 法( 尸如0 5 ) 。讨论铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性逐年增强给临床感染控制造成严重威胁，因此铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性和耐药机制研究引起国内外学者的广泛关注。据韩国L e
13、 e 等【4 5 】的报道，对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中，1 0 是因为产生获得性金属酶。金属酶可分为固有M B L 和获得性M B L 。固有M B L 广泛存在于临床罕见菌中，大多由染色体基因编码；获得性M B L 主要分布于铜绿假单胞菌和不动杆菌属中，通过质粒或I 类整合子及类整合子介导进行水平传播。金属酶的主要特点是能水解碳青霉烯类及除单环类抗生素以外所有的B 内酰胺类抗生素，其活性不能被克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦等常见的p 内酰胺酶抑制剂抑制，但能被乙二胺四乙酸( E D T A ) 、菲咯啉以及巯基化合物抑制【4 6 】。福建医科大学临床检验诊断学2 0 0 6 级硕士研究生房丽
14、丽毕业论文 临床分离铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性的研究加入E D T A 后再加入金属离子，可恢复金属酶活性。M B L 通常由编码I M P 和V I M 的结构基因突变，导致酶活性中心附近的氨基酸残基的取代衍生而来。M B L虽在活性位点上无丝氨酸，但M B L 的金属离子可与氨基酸残基之间形成配位化合物，从而干预活性位点上的反应。不同的金属酶所含的金属离子数目不固定，这更造成了酶与底物结合方式的多样性D 7 4 8 】。国内张珏【4 9 】在多重耐药铜绿假单胞菌中检测到V I M 型金属酶，甚至发现了同时携带T E M 1 、C A R B I i k e 、V I M 2 三种p 内酰
15、胺酶基因的铜绿假单胞菌【5 0 1 。而唐跃华【5 1 】等发现2 0 株铜绿假单胞菌中I M P 检出率为1 5 ( 3 2 0 ) ；V I M 检出率为2 5 ( 5 2 0 ) 。我们的实验也检测到了V I M 2 型金属酶，检出率为6 8 ( 3 4 4 ) 。未检测到I M P 金属酶基因，不排除还存在其它类型如S P M 、G I M 型的金属酶基因。在研究中，通过E D T A I M P 、2 M P A I M P 、3 M P A I M P 及巯基乙酸一I M P 四种双纸片协同试验组合进行表型检测，经S P S S1 4 0 统计软件F i s h e r S 精确检
16、验，2 M P A I M P 、3 M P A I M P 及巯基乙酸I M P 双纸片协同试验组合的表型检测方法与P C R 法无统计学差异；2 M P A I M P 、3 M P A I M P 及巯基乙酸I M P 双纸片协同组合的表型检测法之间无统计学差异；而E D T A I M P 双纸片协同试验法阳性率显著高于P C R 法，认为E D T A I M P 双纸片协同试验法假阳性率高，不宜采用，与A r a k a w a 等【5 2 】学者的报道相同。本次试验中采用了P C R 方法扩增I M P 1 、I M P 2 、V I M 1 及V I M 2 型金属酶基因序列，只有V I M 2 型有扩增产物，经与G e n b a n k 比对，初步认为V
