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1、基因工程中为什么要建立基因文库?基因文库是如何建立的?基因工程中为什么要建立基因文库?基因文库是如何建立的?基因文库是指一个包含了某一生物体全部 DNA 序列的克隆群体。 目的:目的:当我们要对某一基因结构和功能进行研究时,首先要获得此基因,最简便的方法就是直接从基因文库中获取。 构建过程:将纯化的细胞基因组 DNA 用限制性内切酶消化,获得一定大小的 DNA 片段,将这些片段克隆到载体中,从而获得含有不同 DNA 片段的噬菌体,这就是基因组文库。 打个比方让你建图书馆,你就得把所有书分门别类放,以便于找。这么多书你一个人又搞不定,所以你得找一群人,一个人负责一部分,各自干各自的,然后最后一汇
2、总就行了。基因组文库和 cDNA 文库 一.基因组文库用限制性内切酶切割整个基因组 DNA,把所得的大量基因组DNA 片段与载体连接,然后转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。由此而得的克隆中每个细胞的载体上都包含有特定的基因组 DNA 片段。这样的一套克隆便称作基因组克隆,而这些克隆中的一套基因组 DNA 片段则叫做基因组文库(genomic library)。二.cNDA 文库的构建及应用cDNA 基因文库(cDNA library)是指以 mRNA 为模板,在反转录酶及其他一系列酶的催化作用下所获得的双链 cDNA,经与适当载体连接并转化到寄主细胞内进行扩增,由此而构成包含着相应基因编码序列
3、的一群克隆。与基因组 DNA 克隆不同,用作 cDNA 克隆的真核 mRNA,其间隔序列早已在拼接过程中被删除,而由这种成熟mRNA 为模板转变而来的 DNA 基因,自然也不含有非编码序列。cDNA 克隆除以 mRNA 为起始材料这一优点外,其构建比较简易可行,而且由于每一个 cDNA 克隆都只含有一种 mRNA 序列,这样在选择中出现假阳性的概率也就较低。随着分子克隆研究在理论和技术上的进步,cDNA 基因文库的构建不仅是分离基因的重要手段,也是当前真核分子生物学研究的强有力工具。首先,在基因工程的操作中,以 cDNA 为探针可从基因组文库中分离出相应的特异基因;其次,cDNA 序列只与基因中的编码序列有关,有助于对真核生物 mRNA 结构和功能的认识;再者,cDNA 克隆还可以有效地分析真核基因的结构和功能。cDNA 文库(cDNA library):指只包括在特定组织或细胞类型中已经被转录成 mRNA 的所有的基因序列。基因组文库(genomic DNA library):指将基因组 DNA 通过限制性内切酶部分酶解后所产生的基因组 DNA 片段随机的同相应的载体重组、克隆,所产生的克隆群体代表了基因组 DNA 所有的序列。