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1、中山大学硕士学位论文三氧化二砷、艾叶油吸入防治哮喘机理的动物实验研究姓名：雷艳申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：张孔20060501氧化一砷、笠叶油吸 防治哮喘的动物实验研究中山大学硕上学位论丘三氧化二砷、艾叶油吸入防治哮喘机理的动物实验研究专业：内科学研究生：雷艳导卿：张魏副教授中I 大学附属第一医院呼吸内科中文摘要一、背景和目的支气管哮喘( 箍称哮喘) 是一种由多种细胞( 嗜酸性粒细胞、镕2 大细胞和T 细胞等) 和细胞组分参与的气道慢性炎症一降疾病。这种炎症可以引起气道对各种刺激的高反应性，并导致不同程度的广泛丽逆的气道疆豢症状。I 强床表现为反复发作性喘息、呼吸困难、胸闷、咳嗽，
2、这些症状在夜间和( 或) 清晨明显，并常常自行或经治疗丽缓解。哮喘是仝世界最常见的慢性疾病之，给儿童和成人郯带来沉重的负担。以表孺激素应用为代表的抗炎治疗是目前治疗哮喘的主要方法，并在i 蠢球上得到了广泛的应用，取得了良好的效果。然而哮喘的发病率和死亡率并未有I 低的趋势，反而在币断的上井：吸入糖皮质激素控涮哮喘症状包有哪能导致全身翮作用，而且有部分患者是激素抵抗犁哮喘及激豢依赖性哮喘。因此，应用雾化吸入疗法寻找新的有效的药物治疗哮喘，更好的控制哮喘戆必要的。祖国传统的医药治疗哮喘已经有一千多年的历史，其中用砒霜( 主要成分为三氧化二砷，A r s e n i ct r i o x i d e
3、 ) 有平喘作用甲就为人们所认识，但既往由于三氧化二砷采用口服形式，临床应f = 受到其副作用的限制。随着对哮喘发病机制的进一步研究以及雾化吸入疗法的应用，三氧化二砷的平喘作用藁新为人们所认识。现代药理学的研究证实艾叶油具有平喘、镇咳、祛痰的作用。由于艾叶油与三氧化二：= 砷、苴月I 油吸入防描哮喘的动物实验研究中山大学碗士学位论文三氧化二砷样，对哮喘具有防治作用，因此将_ ：= 者共用，作用可能是协同或相加。目d 目人们虽然已观察到三氧化二砷、艾叶油有一定| 穹治疗哮喘的作用，但列两者联合雾化吸八应用的疗效观察及二者平喘机制盼研究较少。凶此，本研究翻的是：观察雾化吸入不同剂量i 氧化二砷及联
4、合吸入不同剂量艾叶油对哮嘣豚鼠嗜酸性粒细胞、T M T h 2 大街、白三烯C 4 以及形态学的影晌，探讨三氧化二砷、艾时浊治疗哮喘的机制；观察骞纯吸八l i 阉剂量三氧化二砷及联合吸入不同剂量艾叶油对哮喘豚鼠心、肝、肾形态的彭响。= 、材料与方法l 实验动物体重约( 3 0 0 _ + 5 0 ) g 的雄性豚鼠6 0 只，随机分为以下6 组：i 氧化二砷单倍剂量组( A 组) ，三氧化二砷烈倍剂量婀( B 组) ，联合用药单倍剂量组( c 组) ，联合用药双倍剂量组( D 组) ，阳性对照组( E 组) ，正常对照组( F 组) 。2 实验方法2 1 哮喘动物模型的制备实验第1 天以生理盐
5、水l m l ，卵自蛋白( O V A ) l O O m g ，氢氧化铝( A l ( o H ) 。) J O O m g配威的效敏液腹腔注射致敏A 组、B 组、C 组、D 组、E 缝豚鼠，F 缎则仪以生理盐水l m l ，A I ( 0 H ) 。l O O m g 配成的混悬液腹腔注射。实验第1 5 天A 组、B 组、C组、D 组、E 组豚鼠雾化吸入1 0 7 A 进行引喘。每天一次，连续8 天。F 组则仅以生理盐水雾化吸入。22 药物处理实验第1 6 天开始A 组、B 组、C 组、D 组分别以不问的雾化帮量于g f 喘前3 0 m 佃雾化给药；E 组、F 组雾化吸入生理盐水。2 。3
6、 电镜改变于末次抗振激发2 4 小射后，处死豚鼠，随机取2 只，取左上肺做电镜，观察嗜酸细胞的凋亡和薪泡上皮的修复。2 4 收集支气管肺泡漓洗液( B A L F )每组另外的8 只豚鼠处死后进行支气管肺泡灌洗，收集B 乩F 。将收集的B A F混匀，离心( 2 0 0 0 r p m ，44 C ) l O m i n ，L 清液分装于一8 0 。C 法箱中待测细胞困予I L4 、I F N Y 及L T C 4 。用E L I S A 法测定上清中IL _ 4 、I F NY 及L T C 4 水平，严格按试剂I I三氧化二砷、艾叶油吸入防治哮喘的动物实验研究中山火学硕士学位论文盒说明书操
7、作。采用白细胞计数法计数B A L F 中细胞总数。瑞氏染色后每片计数2 0 0 个有核细胞，计数嗜酸细胞( E O S ) 的个数，获得E O S 的百分比。2 5 病理学检查支气管肺泡灌洗后，取左下肺，做H E 染色，观察E O S 在肺内浸润的情况及支气管平滑肌和基底膜的改变。每组随机取2 只，取心、肝、肾，做H E 染色，观察心、肝、肾形态的变化。3 统计学处理各组数据以均数标准差( 2 - + S ) 表示，所有数据均用S P S S l 3 0 统计学软件处理，以P ( O 0 5 认为差异具有统计学意义。三、结果1 各组豚鼠B A L F 中细胞总数的变化E 组B A L F 中
8、细胞总数与其余各组比较均有统计学意义( p O 0 5 ) 。4 各组豚鼠B A L F 中I L 一4 的变化E 组B A L F 中I L 一4 水平与其余各组比较均有统计学意义( p O 0 5 ) ，B 组与D 组比较无统计学意义( p O 0 5 ) 。5 各组豚鼠B A L F 中I F N Y I L 一4 比值的变化E 组B A L F 中I F N Y I L 一4 比值与其余各组比较均有统计学意义( p 0 0 5 ) ，B 组与D 组之闯比较无统计学意义( p O 0 5 ) 。6 各组豚鼠B A L F 中L T C 4 的变化E 组B A L F 中L T C 4 水
9、甲与其余各组比较均有统计学意义( p O 0 5 ) ，A 组与c 组比较有统计学意义( p 0 0 5 ) T h e r ew a sn os t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c ei nt h em e a nI F N Yl e v e l si nB A L Fb e t w e e ng r o u pCa n dg r o u pA ( p 0 0 5 ) T h e r ew a sn os t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c ei nt h em e a nI F N - Yl e v
10、 e l si nB A L Fb e t w e e ng r o u pBa n dg r o u pD ( p 0 0 5 )4 T h em e a nI L 一4l e v e l si nB A L Fo fg r o u pEw e r eh i g h e rt h a nt h eo t h e rg r o u p s 0 O 0 5 、T h e r ew a sn os t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c ei nt h em e a nI L 一4l e v e l si nB A L Fb e t w e e ng r
11、o u pBa n dg r o u pD 0 0 5 )5 T h em e a nI F N - Y I L 一4l e v e l si nB A L Fo fg r o u pEw e r el o w e rt h a nt h eo t h e rg r o u p s ( p O 0 5 ) T h e r ew a sn os t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c ei nt h em e a nI F N Y I L - 4l e v e l si nB A L Fb e t w e e ng r o u pBa n dg r o
12、u pD ( i o 0 0 5 )6 T h em e a nL T C 4l e v e l si nB A L Fo fg r o u pEw e r eh i g h e rt h a nt h eo t h e rg r o u p s ( p 0 0 5 ) T h e r ew a ss t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c ei nt h em e a nL T C 4l e v e l si nB A L Fb e t w e e ng r o u pCa n dg r o u pA ( p O 0 5 ) ，A s 2 0 3 双
13、倍剂量组与联合用药双倍剂量组比较无统计学意义( p O + 0 5 ) 。( 见图8 )圈7 各组豚鼠B A L F 中l L _ 4 水平图8 不同剂量下豚鼠B A L F 中I L - 4 水平二氧化二砷、艾叶油吸入防治哮喘的动物实验研究中山人学硕士学位论文3 3 各组豚鼠B A L F 中I F N Y I L 一4 比值的变化3 3 ，1 各组豚鼠与阳性对照组豚鼠B A L F 中I F N Y I L 4 比值的比较阳性对照组B A L F 中I F N Y I L 4 比值与其余各组比较均有统计学意义( p O 0 5 ) ，A s 2 0 3 双倍剂量组与联合用药双倍剂量组之间比
14、较无统计学意义( p O 0 5 ) 。( 见图1 0 )图9 各组豚鼠B A L F 中I F N Y I L 4 比值图1 0 不同剂量下豚鼠B A L F 中I F N Y I L - 4三氧化二砷、艾叶油吸入防治哮喘的动物变验研究中山大学硕士学位论史4 。各组豚鼠B A L F 中L T C 4 的变化4 1 各组豚鼠与阳性对照组豚鼠B A L F 中L T C 4 的比较阳性对照组B A L F 中L T C 4 水平与其余各组比较均有统计学意义O 0 0 5 ) ，A s 2 0 3 单倍剂量组与联合用药单倍剂量组比较有统计学意义( p 0 0 5 ) 、三氧化二砷4 m g k
15、g d 和联合用药大剂量组相比较无差异( p 0 0 5 ) ，表明艾叶油对B A L F 中I L 一4 、I F N - Y 水平无影响。实验结果表明，哮喘豚鼠存在明显的T h l T h 2 失衡的情况；三氧化二砷通过抑制I L 一4 ，增加I F N Y 的表达来调节T h l T h 2 失衡，从而抑制I g E 的产生；而且随着剂量增大作用增加。实验结果还表明艾叶油对B A L F 中I L - 4 、I F N Y 水平无影响，对T h l T h 2 失衡无影响。三、三氧化二砷、艾叶油对哮喘豚鼠L T C 4 的影响白三烯( L T s ) 是由花生四烯酸通过5 脂肪氧化酶途径
16、由肥大细胞、嗜酸粒细胞和肺泡巨噬细胞合成的脂质。它通过与气道平滑肌上的白三烯受体结合参与哮喘的炎症反应而引起支气管收缩旧”。白三烯是一种过敏性慢反应物质( S R S A )【6 4 1 ，它来自肥大细胞、中性粒细胞和单核细胞的细胞膜磷脂( p h o s p h d i p i d e ) 。L T s 的细胞来源广泛，甚至上皮细胞、内皮细胞等均可参与L T s 的合成。不同细胞通过信息传递、细胞因子释放等机制相互影响L T s 的合成【6 5 。L T s 包括了L T B 4 及硫肽白三烯( L T c 4 、L T D 4 、L T E 4 ) 等两大类，L T B 4 主要引起气道变应性炎症，L T B 4 主要由中性粒细胞产生，对中性粒细胞有很强的趋化作用；硫肽白三烯是强烈的支气管平滑肌收缩剂 6 6 1 。L T C 4 是哮
