《Sramin联合DDP对人鼻咽癌细胞株及其裸鼠移植瘤生长的抑制作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Sramin联合DDP对人鼻咽癌细胞株及其裸鼠移植瘤生长的抑制作用（149页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、Y | 9 0 3 蓦2 l广西医科大学G u a n g x iM e d i c a lU n i v e r s i t y 博士学位论文S r a m i n 联合D D P 对人鼻咽癌细胞株 及其裸鼠移植瘤生长的抑制作用学科专业：肿瘤学研究方向：鼻咽癌导师姓名：黄光武教授学号：2 0 0 1 1 0 1 4 4：o o 六年六月缩略语A P英文伞称主要缩略语A d i n o s i n eT r i p h o s p h a t e。1 ，文全称三磷酸腺苷A T PT C AA T PT u m o rc h e m o s e n s i t i v i t yA s s a
2、yA T P 肿瘤体外药敏试验A RC VA p o p t o s i sR a t eC o e f f i c i e n to fv a r i a t i o n凋亡率变异系数C N E 2H u m a nn a s o p h a r y n g e a lc a r c i n o m ac e l ll i n e 人鼻咽低分化鳞癌细胞株D D PC i s p l a t i nD M S OD i m e t h y ls u lf o x i d eE D T AF C MH E E t h y l e n ed i a m i n et c t r a a c e t
3、 i ca c i dF l o wc y t o m e t r yH e m a t o x y l i na n dE o s i nH U V E CH u r n a nu m b i l i c a lv e i nE n d o t h e l i a lc e l l顺铂二叶J 基亚砜乙二胺四乙酸流式细胞术苏木精伊红人脐静枨内皮细胞H E P E SN 一2 一h y d r o x y e t h y lp i p e r a z i n e N 一2N 一2 一羟乙基嗪N 一2 一乙磺酸e t h a n e s u l f o n i ca c i dM e d i a
4、ni n h i b i t o r yc o n c e n t l l a t i o n数抑制浓度I n h i b i t o r yc o n c e n t l a t i o nn i n e t y酉分之九十抑制浓J 妾I n h i b i t i o nr a t eM a x i m u mI n h i b i t o rC o n t r o lm u l t i d r u gr e s i s t a n c e最人抑制对照多药酬药3 一( 4 ，5 一d i m e t h y l t h i a z o l 一2 一y 1 ) 一2 ，5 一 H 丛嚷叫苯基叫
5、忡溴# Rrr、9n uIb 撒帅 mN P CP B Sd i p h e n y l t e tr a z o d i u mb r o m i d en a s o p h a r y n g e a lc a r c i n o m aP h o s p h a t e b u f f e r e dS a l i n e鼻咽癌磷酸缓冲液R P M II6 4 0R o o s e v e l tP a r kM e m o r i a lI n s t i t u t em e d i u mR P M I16 4 0 培养基l r i sT r i s ( h y d r o x
6、y m e t h y l ) a m i n o l n e t h a n e三羟甲基氨基甲烷T U N E LT e r m i n a l d e o x y n u d e a t i d y lt r a n s f e r a s e脱氧核糖核苷酸末端转移酶T C AV E G Fb i o t i n d U T Pn i c ke n dl a b e l i n ga s s a y介导的缺口末端标记法T u m o rC h e m o s e n s i t i v i t yA s s a y肿瘤化疗药敏试验V a s c u l a re n d o t h e l
7、 i a lg r o w t hf a c t o r血管内皮生长凶子S u r a m i n 联合D D P 对人鼻咽癌细胞株及其裸鼠移植瘤生长的抑制作用前言鼻咽癌( N a s o p h a r y n g e a lc a r c i n o m a ，N P C ) 是一种常见的恶。H 珊F 瘤，约I i头颈恶性肿瘤的7 8 。在东南业及我国的香港、台湾、广东、广西、福建及湖南等地发病率较高，l 阿在世界其他地区则罕见1 1 I 。绝人多数N P C 分化程度低，浸润7 卜跃快，容易发q ：癌细胞的早期远处转移和局部治，的不彻底，冈此，化疗作为全身性治疗的手段，在恶性肿瘤的治疗叫
8、J 具有不可替代的地位，也足N P C 最卡要的辅助治疗手段。尽管放化疗技术的提高及其联合应用，肿瘤的局部控制抉得J 明显的改善，但N P C 患者的生存期并没有得剑明显的提高。N P C 治疗失败的t 要原凶是局部复发和远处转移，特别是晚期患者，治疗后局部复发和远处转移多见，是难以治愈和病人死T L = 的重要原因。临床实践证明，以顺铂( C i s p l a t i n ，D D P )为寸：的联合化疗方案是日前N P C 化疗的最有效方案。然而D D P 在有效剂量时机体却具有胃肠道反心、骨髓抑制和神经毒。r k 等严蕈毒剐作用，f 支大地限制了其临床应J 。据统计约有4 6 的N P
9、 C 病人冈毒副作用而未能完成火剂量D D P 为士I 暇合化疗，J 案三个疗稚i i 9 4 甫助化疗I 二i 最终影响1 rN P C I l 9 治，j j 效粜。l 叫时H f 每昧乐川的经验化疗仔存i 瞠大的阿曰r j ，疗效也 艮1 i 确切。这力而促使人们移 极寻找新的或其他史为有效毒性1 、I ：I A i 较低的化j j 药物：另一方面促使人们研究增加N P C 细胞对D D P 的敏感性，从而降低f 史川利量，减轻毒削作用并增加疗效的方法。冈此，寻求一种简便易仃、准确可靠的f 页测化疗药物敏感1 陀的方法，实i 丁个体化治疗，对于改善晚期N P C 忠者的牛活质量、提高临床
10、疗效，减少化，j j 的 彳L I 性、随从性在晚期N P C 的综合治疗1 1有着重要的临床意义。由于肿瘤是一个异质性、多态性、分化不均的细胞群体，肿痛的发牛具有多阶段、多基因的特点，肿瘤的异质性( 形态异质性、基因异顾性和功能异质性) ，同- 组织类型的肿瘤对同一药物敏感性存在着差异，导致不同病人刈化疗药物存在着明显的个体差异。同时由于肿瘤多药耐药( m u l t i d r u gr e s i s t e n c e M D R ) # 0 普遍存在，也会影响肿瘤化疗效果。个体化治疗是肿瘤化疗成功的关键。肿瘤化疗药敏试验( T u m o rC h e m o s e n s i t
11、 i v i t yA s s a y , T C A ) ；足z 个体化治疗的基础。肿瘤化疗约敏试验可减少化疗的盲卜j 性，从而减少无效化疗药物对机体的毒性损害，提高治疗成功率。肿瘤化疗药敏试验在指导个体化化疗、研究抗癌药物相互作用、研究肿瘤的生物学特性及筛选新药方面有着重要意义。近、F 个世纪以来，相继建立的各种t 休外药敏试验为肿瘤的临床个体化治疗提供了越来越多的选择，寻找与临床相关性好、敏感、标准化、快速、简易的方法是约敏试验的方向。利用细胞培养进行体外抗j j | r 瘤活性试验发展至今已仃儿卜F ，尚无种单的疗法简易、f 投感、琅；确、币复陀妤”得j 、4敛公认的力法，他体外机肿瘤
12、活性牛试验的l 、IJ 受剑j 艮人的限制，f C m t 最重要的原之一是没有种敏感、准确的榆测活细胞数的方；爿引。自19 8 4 年K a 眦a s 首先用A T P 一! 卜物荧光法评价细胞t 引峰效应后，A T P 肿瘤体外药敏试验( A T PT u m o rC h e m o s e n s i t i v i t yA s s a y ，A T PT C A ) _ 4 - ：要在微卜物学及临眯肿瘤化疗药物敏感，r i j 试验巾得到心用，A T P T C A 其自敏感、快速、与临床秆j 天性较女J ，的特点，足H 前最自发展前途的休外约敏试验方法。迄今为止，把A T P-
13、- T C A 作为种常觇的体外抗肿瘤约物筛选试验并应用丁临床，国内外尚未见有文献报道。我们应片jA T P T C A 进行N P C 化疗药物的筛选，以期为临床选择化疗方案提供参考。S u r a m i n 是一种合成的抗锥虫类药物，近年米在对前列腺癌、肿癌、问皮瘤等多种肿瘤的研究中发现其具有抑制肿瘤细胞生长和诱导凋亡的作用5 1 。研究表明S u r a m i n 小仅可以抑制V E G F 等多种牛长因子与其受体结合，还可以抑制多种酶的活性而对肿瘤细胞产生抑制作用。牛物芯片是近几年来发展起来的一项新兴生物技术，用芯片制作的仪器具有体积小、便于携带、无污染、分析速度快、所用样品少等优
14、点，广泛应用丁基因表达分析、新基冈发现、基【天| 组文库作图、基冈突变及多态性分析、基因测序、疾病诊断、药物筛选和个体化给药、药物作片j 机理分析等领域。本研究采用A T P T C A 和M T T 法分j j 0 对人鼻咽低分化鳞癌细胞株( C N E 一2 ) 进行肿瘤体外药敏试验，观察S u r a m i n 单独或联合D D P 对C N E 一2 细胞的爿iK 抑制作用和细胞周期的影响，麻用基冈芯片技术研究S u r a m i n e 联合I ) D P 作用丁C N E 一2 后基因表达谱变化，同时观察S u r a m i n e 联合D D P 对人鼻咽低分化鳞痛B A
15、L B C 裸鼠移f f I 瘸乍K 的抑制作j J 。进步分忻A T P T C Ai法矗叫本外抗t l q_ - , j 物筛选的J 行性及优越性，从细胞捌1 _ ! ：水、 三研究S L U a m i l ! ej 联合D D P 对 J I 瘤细胞生长的影响，并亿基因水、r 探讨化疗药物的抗肿j 南作川机制，为S u r a m i n 运坩丁N P C 的临床治疗和临眯上针对肿瘤忠杵对化j ，药物的敏感性选择用药进行个休化j ，提供依据。本研究分体外试验和体内试验两个部分。第一部分体外试验S u r a m i n 联合D D P 对人鼻咽低分化鳞癌细胞株( C N E 一2 )生
16、长的抑制作用摘要目的：采用肿瘤化疗药敏试验A F P q - 物荧光法肿瘤体外药敏试验( A T P B i o l u m i n e s c e n c eT u m o rC h e m o s e n s i t i v i D , A s s a y ，A T P T C A ) ，探讨S u r a m i n 联合顺铂( C i s p l a t i n ，D D P ) x , j 体外培养人鼻咽低分化鳞癌细胞系( C N E 2 ) 乍长的抑制作用，应用基因芯片技术，分析S u r a m i n 和D D P 作用于肿瘤细胞后基冈表达谱的改变，从细胞凋亡水平研究和基冈水平探讨S u r a m i n 联合D D P 体外抗肿j 留活I 牛_ t 9 作用：J 【l 制。方法：体外培养C N E 一2 细胞并传代，采用阴甲基偶氮唑盐( 3 一( 4 ，5 一d i m e t h y l
