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1、湖北中医药大学学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文储张葱之滔夕口I 二年f 月乒留日u关于学位论文使用授权的声明本人完全了解湖北中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部份内容，可以采用复印、缩
2、印或其他手段保留学位论文；学校可以根据国家或湖北省有关部门的规定送交学位论文。同意中国优秀博硕士论文全文数据库出版章程的内容。同意授权中国科学技术信息研究所将本人学位论文收录到中国学位论文全文数据库。( 保密论文在解密后遵守此规定)、 论文储签名德之两黝签簟少严u 年月日fjJ I I IrII PJI I r llFII IIIIJ Y 210 0 618目录31 病名及病因病机32 辨证论治“83 常用治法94 中西医结合治疗1 35 针灸等其他治法及调护1 46 结语1 7第二部分实验研究”2 0实验一加味白头翁汤对溃疡性结肠炎大鼠一般情况及结肠粘膜形态的影响2 0l 材料与方法2l1
3、1 动物2 11 2 主要仪器2 11 3 药物与试剂2 11 4 造模方法2 21 5 分组设计及给药2 21 6 标本采集及处理2 31 7 光镜观察2 31 8 统计方法2 42 结果2 42 1 一般情况2 42 2 大鼠结肠粘膜形态学的变化2 43 讨论2 6实验二加味白头翁汤对溃疡性结肠炎大鼠N F K B 的影响2 91 材料与方法2 91 1 材料2 91 2 方法3 01 3 统计方法一3 32 结果- 3 33 讨论3 4实验三加味白头翁汤对溃疡性结肠炎大鼠p 防御素2 基因表达的影响3 71 材料与方法一3 71 1 材料”3 71 2 方法3 81 3 统计方法”4 0
4、2 结果4 13 讨论4 2实验四加味白头翁汤对溃疡性结肠炎大鼠T F F 3 基因表达的影响4 61 材料与方法4 71 1 材料4 71 2 方法4 71 3 统计方法4 92 结果5 03 讨论5l实验五加味白头翁汤对溃疡性结肠炎大鼠T G F 3 1 、E G F 表达的影响5 51 材料与方法5 61 I 材料5 61 2 方法5 6I 3 统计方法5 72 结果5 75 86 26 26 371结肠炎防治中的研究进展“7 2附图”81在校期间科研成绩”8 3致谢8 5结构和功能的损伤，肠粘膜损伤与溃疡性结肠炎发病密切相关。肠粘膜不仅是营养物质消化、吸收的重要场所，同时也是致病微生物
5、和毒素侵入的主要门户。生理情况下，机体可通过肠粘膜屏障来有效地阻止致病微生物和毒素的侵入，以保证机体处于健康状态。当肠粘膜屏障损伤时，肠道中的微生物和毒素便可突破肠粘膜屏障，进入门静脉和淋巴系统引起细菌移位，甚至发展为溃疡性结肠炎。为明确炎性细胞调控因子N F 1 cB 、p 防御素2 、T F F 3 、E G F 及T G F p l 在肠道自我保护和损伤后修复机制中的重要地位，本课题采用高脂高糖饮食加上T N B S 灌肠法复制湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型，在结肠粘膜损伤方面“寻本溯源“ ，把研究的重点放在炎性细胞调控因子N F KB及p 防御素2 上。在肠道修复作用方面，则重点探讨T F
6、 F 3 、E G F 、T G F 1 3 1在溃疡性结肠炎发生发展及粘膜修复过程中的变化及相关调节机制。通过观察加味白头翁汤对N F KB 活化及D 防御素2 、T F F 3 、X G F l 3 l 、E G F表达的影响，进而探讨加味白头翁汤对溃疡性结肠炎肠道损伤修复的作用机理。从而为加味白头翁汤应用于溃疡性结肠炎临床提供理论基础，同时对中医治则治法的现代化研究作有益探讨。方法将4 0 只S P F 级健康S D 大鼠，雌雄各半，随机分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、加味白头翁汤组，每组1O 只。采用三硝基苯磺酸O 小n 3 s ) 局部灌肠加高脂高糖法建立U C 大鼠模型，动
7、物模型制作成功后，中药治疗组给予加味白头翁汤灌胃，西药对照组给予柳氮磺胺吡啶( S A S P ) 灌胃，模型组及正常对照组给予等容积的生理盐水灌胃，每天1次，连用1 5 d 。治疗结束后将大鼠固定于鼠解剖台上，腹腔注射2 0 氨基甲酸乙酯麻醉，剖取整个结肠组织，先行肉眼仔细观察各组大鼠结肠粘膜的充血、水肿、伪膜、溃疡和糜烂数目及面积病理改变情况，然后再取少量结肠粘膜组织石蜡包埋，H E 染色，光镜观察大鼠结肠组织病理形态学变化。剩余结肠粘膜标本运用蛋白免疫印迹( W e s t e mb l o t ) 法检测N F KB 的蛋白表达水平，用R e a l t i m eP C R 方法测定
8、p 防御素2 、T F F 3 的基因表达变化，免疫组化法观察T G F l 3 1 、E G F 蛋白表达的变化。结果l 加味白头翁汤方组与模型组相比较：大鼠的一般情况明显好转，大鼠脓血便和粘液便消失，大便成形，活动灵活，食欲好转，大鼠体重明显增高。加味白头翁汤方可使结肠粘膜组织损伤和病理组织学评分降低，与模型组比较，差异显著( P 0 0 5 ) 。3 与正常组比较，模型组大鼠结肠粘膜D 防御素2 表达显著增高，差异显著( P O 0 5 ) 。4 与正常组比较，模型组大鼠结肠粘膜T F F 3 略有降低，但没有显著差异( P o 0 5 ) ；给予加味白头翁汤治疗后，结肠粘膜T F F
9、3 基因表达明显上升，- 9 模型组比较，差异显著( P 0 0 5 ) 。5 与正常组比较，模型组T G FD1 的表达明显增高，两组比较差异显著( P O 0 5 ) 。与正常组比较，模型组E G F 的表达明显低于正常组，两组比较差异显著( P O 0 5 ) 。结论1 加味白头翁汤方可抑制U C 的炎性细胞浸润，使炎症减轻，同时还有促进结肠粘膜损伤修复，恢复结肠粘膜的分泌功能的作用。说明本课题U C 模型复制成功。加味白头翁汤方可通过减轻结肠炎症，促进结肠粘膜修复，从而起到治疗U C 的作用。2N F K Bp 6 5 的表达与U C 病情严重性和活动性之间有一定关系，提示U C 结肠
10、粘膜组织的N F KB 表达水平可反映结肠组织的损害程度，对于病情评估和治疗效果判断可能具有潜在指导意义。加味白头翁汤组对U C 大鼠模型过度激活的N F K B 有抑制作用，这可能是加味白头翁汤组治疗U C 大鼠的作用机理之一。3 加味白头翁汤方的治疗作用可能在于通过下调p 防御素2 基因表达含量，进而减轻结肠粘膜的炎症反应，杀伤肠道病原微生物，起到粘膜修复的作用。p 防御素2 可能是加味白头翁汤治疗U C 作用的关键的靶位。4 加味白头翁汤方可通过增加结肠上皮细胞T F F 3 的分泌从而促进受损结肠粘膜组织的修复。5 加味白头翁汤对U C 大鼠模型结肠粘膜T G Fpl 蛋白表达有下调作
11、用，从而抑制炎症的发生发展；对U C 大鼠E G F 的蛋白表达则有上调作用，能够促进受损粘膜周围的完好上皮细胞向损伤粘膜表面迁移覆盖，加快损伤粘膜的修复。关键词： 加味白头翁汤；溃疡性结肠炎；结肠粘膜修复；1 3 防御素2 ；N F KB ；T F F 3 ；T G F l 3 1 ；E G F ；A d d e dP u l s a t i l l aD e c o c t i o no nt h et r e a t m e n to fc o l o n i cm u c o s ad a m a g ea n dr e p a i rm e c h a n i s mi nr a t sw i t hu l c e r a t i v ec o l i t i sS p e c i a l i t y ：c l i n i c a lb a s i sf o rT C MA u t h o r ：Y u n h a iL e eT u t o r ：P r o fQ i uM i n g y iA b s t r a c tob j
